本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白90抑制劑BIIB021對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病作用及其機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： BⅡB021 慢性粒細(xì)胞白血病(CML) BCR-ABL 自噬 Ulk1

【摘要】：第一部分：BIIB021對(duì)CML細(xì)胞株抑制生長(zhǎng)、誘導(dǎo)凋亡的作用及其機(jī)制目的：研究BIIB021對(duì)CML細(xì)胞株抑制生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡的作用,并探索BIIB021誘導(dǎo)CML凋亡的分子機(jī)制。方法：MTT法檢測(cè)BIIB021對(duì)CML細(xì)胞株生長(zhǎng)抑制的作用,AV/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,Western-blot法檢測(cè)Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白的表達(dá)變化。Western-blot法檢測(cè)線粒體凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)變化。Real-Time PCR檢測(cè)BIIB021作用后BCR-ABL mRNA水平,Western-blot法檢測(cè)BCR-ABL蛋白水平及其下游的Jak/Stat通路、Akt/mTOR通路、Erk通路以及β-Catenin/c-Myc通路的蛋白表達(dá)量變化。激光共聚焦檢測(cè)BIIB021作用后β-Catenin表達(dá)量的變化。結(jié)果:(1)BIIB021能顯著抑制CML細(xì)胞株K562、K562/G、32Dp210、32Dp210-T3151增殖,呈時(shí)間和濃度梯度依賴,48小時(shí)IC50分別是：513.99、603.53、110.08、148.07 nmol/L. (2) BIIB021作用24小時(shí)后能明顯誘導(dǎo)CML細(xì)胞發(fā)生凋亡。Caspase-3、Caspase-9和PARP激活,Bak、Bad的蛋白表達(dá)量增加,Bid、Mcl-1、 Survivin表達(dá)量減少,Bcl-2、Bcl-XL、Bax不變。(3) BIIB021能在蛋白水平抑制BCR-ABL和p-BCR-ABL的表達(dá),而在mRNA水平?jīng)]有減少,蛋白酶體抑制劑MG-132能逆轉(zhuǎn)BIIB021誘導(dǎo)的BCR-ABL下降,而自噬溶酶體抑制劑氯喹則不能。(4) BIIB021能在蛋白水平下調(diào)磷酸化的Stat3、Stat5、Erkl/2,下調(diào)總的Jak2和Akt。 (5) BIIB021能下調(diào)3-catenin/c-Myc通路的蛋白表達(dá)量。激光共聚焦顯微鏡觀察及分別提取胞核、胞漿蛋白,均顯示BIIB021能同時(shí)減少胞核和胞漿中的β-catenin.第二部分：BIIB021對(duì)CML細(xì)胞株誘導(dǎo)自噬的作用及其機(jī)制目的：研究BIIB021誘導(dǎo)CML細(xì)胞發(fā)生自噬及其分子機(jī)制,探討B(tài)IIB021誘導(dǎo)的自噬在凋亡中的作用,與自噬抑制劑聯(lián)合應(yīng)用,為臨床CML治療提供新的方案。方法：Monodansylcadaverine染色、吖啶橙染色后熒光顯微鏡觀察嗜酸性小體。用攜帶mRFP-GFP標(biāo)記LC3的腺病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,激光共聚焦顯微鏡觀察自噬小體。Western-blot法檢測(cè)LC3I/Ⅱ、p62、Beclin-1, mTOR-Ulk1通路蛋白水平變化。MTT法檢測(cè)生長(zhǎng)抑制作用。用攜帶shRNA的慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞沉默Caspase-3.采用SPSS20統(tǒng)計(jì)處理軟件分析,以p0.05作為有差別統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：(1)BIIB021誘導(dǎo)CML細(xì)胞產(chǎn)生自噬小體. (2)BIIB021促進(jìn)LC3I向LC3II轉(zhuǎn)化,減少p62和Beclin-1的表達(dá)量。(3) BIIB021通過Akt-mTOR-Ulkl通路誘導(dǎo)自噬。(4)BIIB021與自噬抑制劑3-methyladenine或bafilomycinA1聯(lián)合應(yīng)用后顯著增加BIIB021誘導(dǎo)的CML細(xì)胞凋亡,證明BIIB021誘導(dǎo)保護(hù)性自噬。結(jié)論：通過一系列體外實(shí)驗(yàn),證明小分子抑制劑BIIB021具有抗慢性粒細(xì)胞白血病的作用。它能激活線粒體通路誘導(dǎo)凋亡,并且對(duì)伊馬替尼耐藥株,特別是32Dp210-T315I也有明顯誘導(dǎo)凋亡的作用。BIIB021主要通過蛋白酶體途經(jīng)誘導(dǎo)BCR-ABL降解。除此之外,我們發(fā)現(xiàn)BIIB021通過Akt-mTOR-Ulkl通路誘導(dǎo)保護(hù)性自噬,聯(lián)合應(yīng)用自噬抑制劑能夠增強(qiáng)BIIB021誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這些發(fā)現(xiàn)為臨床治療CML特別是耐藥病例,提供了新的治療方案和策略。
【關(guān)鍵詞】：BⅡB021 慢性粒細(xì)胞白血病(CML) BCR-ABL 自噬 Ulk1
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733.72
【目錄】：

• 致謝4-5
• 前言5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 縮略表12-14
• 第一部分：BIIB021對(duì)CML細(xì)胞株抑制生長(zhǎng)、誘導(dǎo)凋亡的作用及其機(jī)制14-32
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑14-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-32
• 第二部分：BIIB021對(duì)CML細(xì)胞株誘導(dǎo)自噬的作用及其機(jī)制32-44
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑32-33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-44
• 討論44-47
• 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 綜述53-63
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 作者簡(jiǎn)介63

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本文編號(hào)：969704