本文關鍵詞：利用QM-FISH技術分析EGFR與AKT1基因拷貝數(shù)與乳腺癌預后的相關性

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【摘要】：目的:1.探討乳腺癌患者中表皮生長因子受體EGFR和絲氨酸/蘇氨酸-蛋白激酶AKT1基因拷貝數(shù)變化情況。2.探討分析乳腺癌患者中表皮生長因子受體EGFR和絲氨酸/蘇氨酸-蛋白激酶AKT1基因拷貝數(shù)變化與臨床病理資料的關系。3.探討分析表皮生長因子受體EGFR和絲氨酸/蘇氨酸-蛋白激酶AKT1拷貝數(shù)變化對乳腺癌患者預后的影響,進而為今后提供有效的治療靶點。4.在體外細胞實驗初步研究EGFR抑制劑厄洛替尼聯(lián)合AKT1抑制劑LY294002對MCF-7過表達EGFR及AKT1細胞系的作用,觀察雙靶向治療對過表達EGFR/AKT1細胞系的作用。方法:1.QM-FISH:收集2007年8月至2008年8月在天津市腫瘤醫(yī)院住院收治的原發(fā)性浸潤性乳腺癌患者中隨機選取205例,收集病人的臨床資料以及病理診斷時切除的原發(fā)瘤石蠟病理標本。對乳腺癌患者的石蠟切片進行定量多基因熒光原位雜交(Quantitative Multi-gene Fluorescence In Situ Hybridization,QM-FISH),目的是檢測EGFR與AKT1基因狀況,分析同一細胞內EGFR與AKT1基因拷貝數(shù)與患者臨床病理特征之間的關系,并評估其在乳腺癌預后預測中的價值。研究對象標準為:病理診斷均證實為浸潤性導管癌。所有病例均為初治乳腺癌患者,手術之前未行放化療及內分泌治療。標本收集后經(jīng)10%福爾馬林固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,4um切片。采用IBM SPSS 21統(tǒng)計軟件包與Graphpad 5.0進行統(tǒng)計學分析。EGFR、AKT1基因拷貝數(shù)改變與臨床病理指標關系采用卡方檢驗和Fisher確切概率法,患者的生存情況采用Kaplan-Meier法進行分析,生存率比較采用Log-rank檢驗,Cox比例風險回歸模型進行預后的多因素分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2.體外細胞學實驗:采用MTT法分別檢測EGFR抑制劑厄洛替尼、AKT1抑制劑LY294002單藥對EGFR/AKT1過表達細胞系MCF-7的生長抑制作用;檢測EGFR抑制劑厄洛替尼聯(lián)合AKT1抑制劑LY294002對EGFR/AKT1過表達細胞系MCF-7的生長抑制作用。結果:1.205例乳腺癌患者標本中,EGFR基因高拷貝數(shù)71例(34.6%),AKT1基因高拷貝數(shù)57例(27.8%),其中24例(11.7%)例患者既存在EGFR基因高拷貝數(shù)又存在AKT1基因高拷貝數(shù),101例(49.3%)例為EGFR及AKT1基因低拷貝數(shù)。2.EGFR及AKT1基因拷貝數(shù)與患者年齡、腫瘤分期、組織分級、ER、PR、HER2狀態(tài)、分子亞型、Ki67以及p53表達無關。3.EGFR基因高拷貝數(shù)影響乳腺癌患者5年生存率(P=0.0002),而AKT1基因高拷貝數(shù)對生存期并無影響(P=0.1177),但EGFR基因高拷貝數(shù)伴隨AKT1基因高拷貝數(shù)患者的預后較僅EGFR基因高拷貝數(shù)患者差(P=0.0383)。單因素及多因素COX生存分析顯示EGFR與AKT1基因高拷貝數(shù)[(P=0.000(U),P=0.0001(C)]、組織學分級[P=0.001(U),P=0.012(C)]及淋巴結轉移狀態(tài)[P=0.046(U),P=0.158(C)]是影響乳腺癌患者5年總生存率的獨立預后因素。4.采用MTT法在體外實驗中,與對照組、厄洛替尼或LY294002單藥組相比,聯(lián)合用藥可進一步的抑制EGFR/AKT1過表達細胞系的生長,初步印證了靶向治療對EGFR/AKT1過表達細胞系的生長抑制作用。結論:1.EGFR與AKT1基因高拷貝數(shù)在乳腺癌中比較常見。EGFR基因高拷貝數(shù)為71例(34.6%),AKT1基因高拷貝數(shù)為57例(27.8%)。2.EGFR及AKT1基因高拷貝數(shù)與患者臨床病理資料不存在顯著相關性。3.EGFR及AKT1基因高拷貝數(shù)與乳腺癌臨床預后不良有關,是影響乳腺癌患者5年OS的獨立預后因素。4.體外細胞實驗中,初步印證了靶向治療對EGFR/AKT1過表達細胞系的生長抑制作用,為EGFR及AKT1基因高拷貝數(shù)患者的治療方案提供了新思路。
【關鍵詞】：EGFR AKT1 基因拷貝數(shù) 生存分析 靶向治療
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 對象和方法14-29
• 1.1 實驗材料14-15
• 1.1.1 實驗對象14
• 1.1.2 常用試劑14-15
• 1.1.3 實驗儀器15
• 1.2 實驗方法15-28
• 1.2.1 人二倍體成纖維細胞(HDF)的培養(yǎng)及爬片15-17
• 1.2.2 BAC克隆實驗溶液配制17
• 1.2.3 探針的選取17-18
• 1.2.4 BAC克隆的質粒DNA提取18-21
• 1.2.5 探針的制作21-24
• 1.2.6 探針信號的驗證24-25
• 1.2.7 石蠟切片的預處理25-26
• 1.2.8 石蠟切片的雜交26
• 1.2.9 圖像的采集及計數(shù)26-27
• 1.2.10 Lipo3000脂質體轉染系統(tǒng)（6 孔板）細胞轉染27
• 1.2.11 MTT實驗27-28
• 1.3 統(tǒng)計學方法28-29
• 實驗結果29-36
• 2.1 探針的HDF細胞驗證29
• 2.2 乳腺癌患者中EGFR和AKT1基因拷貝數(shù)變化29-30
• 2.3 EGFR和AKT1基因拷貝數(shù)變化與臨床病理特征的關系30-33
• 2.4 EGFR與AKT1基因高拷貝數(shù)與乳腺癌預后的關系33-34
• 2.5 MTT檢測LY294002與厄洛替尼對乳腺癌細胞系的作用34-36
• 討論36-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 綜述 EGFR/PI3K/AKT通路抑制劑在乳腺癌中的研究進展46-62
• 綜述參考文獻54-62
• 致謝62

【共引文獻】

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本文編號：969558