發(fā)布時間：2017-10-04 05:31

  本文關(guān)鍵詞：EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞系的表達及對其細(xì)胞增殖的影響

  更多相關(guān)文章： 乳腺腫瘤 他莫昔芬 RNAi MCF-7 細(xì)胞 EZH2

【摘要】：目的:通過檢測EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞(MCF-7/Tam+細(xì)胞)及他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7細(xì)胞(MCF-7/Tam-細(xì)胞)的表達情況,并探討EZH2對兩種乳腺癌細(xì)胞株增殖的影響。方法:1.通過Western blot法在MCF-7/Tam+細(xì)胞和MCF-7/Tam-細(xì)胞中檢測EZH2蛋白表達差異。2.采用10 nmol/l的雌二醇和10 nmol/l 4-羥他莫昔芬(4-OHT)分別處理MCF-7/Tam-細(xì)胞24 h后檢測EZH2蛋白的變化。3.使用LipofectamineTM 2000將靶向抑制EZH2的si RNA(si RNA-EZH2)轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam+細(xì)胞,運用實時PCR檢測EZH2基因的相對表達量,Western blot法檢測EZH2蛋白表達量以驗證si RNA的有效性。4.將si RNA-EZH2轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam+和MCF-7/Tam-細(xì)胞,采用細(xì)胞計數(shù)檢測細(xì)胞數(shù),MTT檢測細(xì)胞增殖情況(570 nm波長處吸光度值)。結(jié)果:1.EZH2蛋白在MCF-7/Tam+細(xì)胞中相對表達量為2.237±0.091,高于在MCF-7/Tam-細(xì)胞中的相對表達量(1.870±0.114)(t=8.582,P=0.013)。2.與陰性對照組(EZH2相對表達量:0.480±0.017)相比,經(jīng)10 nmol/l的雌二醇誘導(dǎo)MCF-7/Tam-細(xì)胞24 h后EZH2蛋白相對表達量為0.657±0.015,相同濃度的4-羥基他莫昔芬處理MCF-7/Tam-細(xì)胞24 h后EZH2蛋白相對表達量為0.423±0.012(F=175.032,P=0.000)。3.轉(zhuǎn)染si RNA-EZH2至MCF-7/Tam+細(xì)胞后,EZH2 m RNA相對表達量下降了69%(t=14.061,P=0.005),EZH2蛋白的相對表達量降低了42%(t=15.366,P=0.004),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。4.細(xì)胞計數(shù)結(jié)果顯示與對照組相比,轉(zhuǎn)染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam-細(xì)胞組細(xì)胞數(shù)在第3,4,5天明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=77.515,P=0.001);轉(zhuǎn)染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam+細(xì)胞組與對照組相比,細(xì)胞數(shù)在第3,4,5天明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=702.347,P=0.000)。5.MTT結(jié)果顯示與對照組相比,轉(zhuǎn)染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam-細(xì)胞組及轉(zhuǎn)染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam+細(xì)胞組在570 nm波長處的吸光度值分別降低了43%(t=9.676,P=0.011)、77%(t=65.069,P=0.000),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:相較于他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7細(xì)胞(MCF-7/Tam-細(xì)胞),EZH2在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞(MCF-7/Tam+)細(xì)胞中高表達。為確認(rèn)si RNA的有效性,將靶向EZH2的si RNA(si RNA-EZH2)轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam+細(xì)胞之后,EZH2在m RNA水平和蛋白水平均有不同程度的下降。將si RNA-EZH2分別轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam-和MCF-7/Tam+細(xì)胞,細(xì)胞增殖能力顯著降低。
【關(guān)鍵詞】：乳腺腫瘤 他莫昔芬 RNAi MCF-7 細(xì)胞 EZH2
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 英文縮略詞詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-15
• 2 材料和方法15-29
• 3 結(jié)果29-36
• 4 討論36-42
• 5 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-49
• 附錄49-50
• 致謝50-51
• 綜述51-60
• 參考文獻57-60

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本文編號：968911