本文關(guān)鍵詞：脂肪因子網(wǎng)膜素-1的自分泌效應(yīng)與結(jié)腸癌發(fā)病的相關(guān)性研究

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【摘要】：目的(1)以結(jié)腸癌患者的癌組織和癌旁組織為研究對象,檢測癌組織和癌旁組織中Omentin-1的表達(dá)和定位。(2)以結(jié)腸癌細(xì)胞SW480為研究對象,通過體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞,檢測結(jié)腸癌細(xì)胞是否能夠自分泌脂肪因子Omentin-1。(3)以結(jié)腸癌患者的癌組織和癌旁組織為研究對象,檢測Akt信號分子表達(dá)的變化;前炎癥因子TNF-α、IL-1β和血管生成因子VEGF-A的表達(dá)定位,了解Omentin-1參與結(jié)腸癌發(fā)生的機(jī)制是否涉及Akt分子信號通路,結(jié)腸癌組織中Omentin-1表達(dá)是否與結(jié)腸癌微環(huán)境存在聯(lián)系。方法(1)應(yīng)用實時熒光定量PCR方法檢測Omentin-1在結(jié)腸癌組織和癌旁組織中的m RNA表達(dá)。采用Western Blot方法檢測Omentin-1在結(jié)腸癌組織和癌旁組織中的蛋白表達(dá)。免疫組織化學(xué)方法觀察Omentin-1蛋白的表達(dá)以及定位。(2)通過體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞,應(yīng)用實時熒光定量PCR方法檢測不同時間點細(xì)胞裂解液中脂肪因子Omentin-1 m RNA的相對表達(dá)量。使用ELASA試劑盒檢測不同時間點細(xì)胞上清液和細(xì)胞裂解液中脂肪因子Omentin-1蛋白的表達(dá)量。(3)應(yīng)用Western Blot方法檢測各組織中p Akt/Akt信號分子蛋白的變化,以及與相應(yīng)組織中Omentin-1蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析。(4)應(yīng)用免疫組織染色的方法觀察TNF-α、IL-1β和VEGF-A的在結(jié)腸癌組織和癌旁組織中蛋白的表達(dá)定位,以及與相應(yīng)組織中Omentin-1蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析。結(jié)果(1)結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織中Omentin-1 m RNA、Omentin-1蛋白的表達(dá)量均高于癌旁組織中的表達(dá)量,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(m RNA:0.983±0.105 vs5.381±1.250,P=0.0140.05;蛋白:1.086±0.242 vs 0.612±0.064,P0.01);電子顯微鏡下觀察,Omentin-1蛋白經(jīng)過染色后呈棕黃色,陽性表達(dá)主要在結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞間質(zhì)內(nèi),癌旁正常細(xì)胞也存在少量表達(dá)。且結(jié)腸癌組織切片視野的平均光密度值高于癌旁組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(0.621±0.102 vs0.295±0.030,P0.01)。(2)結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞裂解液中可以檢測出脂肪因子Omentin-1 m RNA和蛋白的表達(dá);細(xì)胞上清液中可以檢測出Omentin-1蛋白的表達(dá),并且細(xì)胞裂解液中Omentin-1蛋白的表達(dá)量較上清液中的更多,其表達(dá)均具有時間依賴性。(3)結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織中p Akt/Akt蛋白表達(dá)量高于癌旁組織中表達(dá)量,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(1.891±0.245 vs 1.076±0.094,P=0.0060.01)。通過Pearson相關(guān)分析顯示,Omentin-1蛋白的表達(dá)與p Akt/Akt蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.764,P0.01),且具有較強的相關(guān)性,線性回歸分析表明,脂肪因子Omentin-1是p Akt/Akt蛋白表達(dá)水平的影響因素。(4)免疫組化染色后,電子顯微鏡下觀察:結(jié)腸癌組織中TNF-α、IL-1β和VEGF-A蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁組織內(nèi)的表達(dá),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(0.546±0.078 vs 0.231±0.064,0.673±0.103 vs 0.336±0.044,0.578±0.079 vs0.250±0.079,P0.01~0.05),但TNF-α、IL-1β的表達(dá)與Omentin-1的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)關(guān)系(r分別-0.767和-0.334,P均0.05)。而與VEGF-A的表達(dá)未顯示出相關(guān)關(guān)系。結(jié)論(1)結(jié)腸癌細(xì)胞能夠自分泌表達(dá)脂肪因子Omentin-1,可能通過內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌的途徑,參與結(jié)腸癌的發(fā)生、進(jìn)展。(2)脂肪因子Omentin-1參與結(jié)腸癌發(fā)生的機(jī)制可能涉及Akt信號通路的激活。(3)Omentin-1的表達(dá)與前炎癥因子IL-1β、TNF-α存在負(fù)性相關(guān),而與VEGF-A的表達(dá)無相關(guān)性。提示Omentin-1可能并未通過改變慢性炎癥狀態(tài)這一作用機(jī)制而參與結(jié)腸癌的發(fā)病。結(jié)論
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 網(wǎng)膜素-1 脂肪因子 自分泌 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶 炎癥
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 主要英文縮寫一覽表6-8
• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 1. 前言14-17
• 1.1 肥胖人群結(jié)腸癌發(fā)生風(fēng)險的流行病學(xué)14-15
• 1.2 脂肪因子網(wǎng)膜素-1 與結(jié)腸癌的相關(guān)性研究15-16
• 1.3 脂肪因子網(wǎng)膜素-1 參與結(jié)腸癌的相關(guān)機(jī)制16-17
• 2. 實驗試劑和材料17-20
• 2.1 實驗材料17-18
• 2.2 主要實驗儀器18-19
• 2.3 主要實驗試劑19-20
• 3. 實驗方法20-31
• 3.1 結(jié)腸癌組織和癌旁組織中網(wǎng)膜素-1 的表達(dá)和定位的相關(guān)實驗20-26
• 3.2 結(jié)腸癌細(xì)胞自表達(dá)網(wǎng)膜素-1 的相關(guān)實驗26-30
• 3.3 結(jié)腸癌組織和癌旁組織中AKT、PAKT蛋白表達(dá)的相關(guān)實驗以及與網(wǎng)膜素-1 蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析30
• 3.4 結(jié)腸癌組織和癌旁組織中TNF-a、IL-1 b 和VEGF-A蛋白表達(dá)定位的相關(guān)實驗以及與網(wǎng)膜素-1 蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析30-31
• 4. 結(jié)果31-37
• 4.1 結(jié)腸癌組織和癌旁組織中網(wǎng)膜素-1 的表達(dá)和定位31-33
• 4.2 結(jié)腸癌細(xì)胞能夠自分泌表達(dá)脂肪因子網(wǎng)膜素-133-34
• 4.3 結(jié)腸癌組織和癌旁組織中AKT、PAKT蛋白表達(dá)以及與網(wǎng)膜素-1蛋白表達(dá)的關(guān)系34-35
• 4.4 結(jié)腸癌組織和癌旁組織中TNF-a、IL-1 b 和VEGF-A蛋白表達(dá)定位以及與網(wǎng)膜素-1 蛋白表達(dá)的關(guān)系35-37
• 5. 討論37-43
• 6. 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 附錄一 個人簡介50-52
• 附錄二 致謝52-54
• 綜述54-68
• 參考文獻(xiàn)62-68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陳燕;趙曉彤;陳明衛(wèi);李永翔;王圣毅;王佑民;;血漿網(wǎng)膜素-1水平與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2015年01期

2 陳燕;陳明衛(wèi);;脂肪因子與結(jié)直腸癌[J];國際腫瘤學(xué)雜志;2015年01期

3 邵金雙;賈國瑜;王璐;李強;張潔;劉玉清;邸阜生;;糖尿病脂肪肝患者網(wǎng)膜素-1與脂聯(lián)素、炎癥因子的關(guān)系[J];天津醫(yī)藥;2013年12期

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6 富翠芹;王沁;尹蓉;武令啟;;PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝癌細(xì)胞生長和黏附中的作用[J];世界華人消化雜志;2008年14期

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本文編號：968934