本文關(guān)鍵詞：硫化砷對(duì)胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制作用及其分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 硫化砷 As_4S_4 胃癌 侵襲 轉(zhuǎn)移

【摘要】：【目的】探討硫化砷抑制胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用及其機(jī)制,進(jìn)一步豐富硫化砷個(gè)體化治療胃癌的理論基礎(chǔ),為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。【方法】選擇人胃癌AGS、MGC803細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)材料;以劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;Western blotting法檢測(cè)硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞中E-cadherin、β-catenin、Sp1、KLF4、VEGF、等侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響;明膠酶譜法檢測(cè)硫化砷對(duì)MGC803細(xì)胞金屬基質(zhì)蛋白酶MMP-2、MMP-9分泌水平及活性的影響。裸鼠皮下注射MGC803細(xì)胞建立胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,連續(xù)腹腔注射硫化砷3周,監(jiān)測(cè)裸鼠體重及瘤徑變化,計(jì)算抑瘤率,并分別用HE和TUNEL染色法檢測(cè)小鼠瘤組織標(biāo)本中細(xì)胞形態(tài)以及凋亡細(xì)胞比率。瘤體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白和基因的變化則通過免疫組化、Western blotting和RT-PCR法進(jìn)行檢測(cè)。【結(jié)果】細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)證明硫化砷對(duì)胃癌的遷移和侵襲能力具有明顯的抑制作用;Western blotting顯示硫化砷能引起MGC803細(xì)胞中E-cadherin、K LF4表達(dá)增加,Sp1、VEGF表達(dá)降低;明膠酶譜法檢測(cè)表明硫化砷能降低MGC803中MMP-2及MMP-9的活性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明硫化砷能明顯抑制胃癌移植瘤的生長(zhǎng)和侵襲能力,鏡下觀察瘤組織HE染色和TUNEL染色結(jié)果可見硫化砷處理組瘤組織凋亡細(xì)胞及其周圍浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞增多;瘤組織免疫組化、Western blotting及RT-PCR結(jié)果提示硫化砷抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用可能與E-cadherin蛋白表達(dá)水平上調(diào),β-catenin、Sp1、VEGF及CD34表達(dá)水平下調(diào)有關(guān),這一結(jié)果與體外研究結(jié)果一致�！窘Y(jié)論】硫化砷具有抑制胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力,其抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制可能涉及多種途徑。最主要的機(jī)制可能是通過上調(diào)MMP-2/E-cadherin的上游靶基因KLF4的表達(dá),從而增加腫瘤細(xì)胞的粘附能力,減少遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。除此之外,這一過程還可能與血管生成受到抑制相關(guān)。我們的結(jié)果提示,硫化砷可能成為抑制胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的有效治療藥物。
【關(guān)鍵詞】：硫化砷 As_4S_4 胃癌 侵襲 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞表9-13
• 第1章 緒論13-18
• 1.1 課題研究的背景及意義13-15
• 1.2 課題研究的側(cè)重點(diǎn)15
• 1.3 課題研究的具體內(nèi)容15-16
• 1.4 課題研究的創(chuàng)新性16-17
• 1.5 技術(shù)路線圖17-18
• 第2章 硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響18-28
• 引言18
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 2.1.1 藥品制備18
• 2.1.2 主要試劑18-19
• 2.1.3 主要儀器與耗材19-20
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-23
• 2.2.1 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇20-21
• 2.2.2 劃痕實(shí)驗(yàn)操作步驟21-22
• 2.2.3 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)操作步驟22-23
• 2.2.4 統(tǒng)計(jì)方法23
• 2.2.5 作圖軟件23
• 2.3 結(jié)果23-27
• 2.3.1 硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞遷移愈合能力的影響23-26
• 2.3.2 硫化砷對(duì)MGC803細(xì)胞侵襲能力的影響26-27
• 2.4 結(jié)論27-28
• 第3章 硫化砷抑制胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究28-38
• 引言28-29
• 3.1 材料29-31
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑29-30
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞30
• 3.1.3 主要儀器及耗材30-31
• 3.2 方法31-35
• 3.2.1 溶液配制31-32
• 3.2.2 明膠酶譜法檢測(cè)硫化砷處理對(duì)MGC803細(xì)胞分泌金屬基質(zhì)蛋白酶水平的影響32-33
• 3.2.3 Western blotting法檢測(cè)硫化砷處理對(duì)MGC803細(xì)胞內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的蛋白水平的影響33-35
• 3.3 統(tǒng)計(jì)方法35
• 3.4 結(jié)果35-37
• 3.4.1 硫化砷處理24h后對(duì)MGC803細(xì)胞分泌MMP-2、MMP-9 活性的影響35
• 3.4.2 硫化砷處理24h后MGC803細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因蛋白水平的變化35-37
• 3.5 結(jié)論37-38
• 第4章 硫化砷調(diào)控胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究38-57
• 引言38-39
• 4.1 材料39-41
• 4.1.1 藥品與試劑39-40
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及動(dòng)物40
• 4.1.3 主要儀器與耗材40-41
• 4.2 方法41-48
• 4.2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)41
• 4.2.2 胃癌皮下移植瘤模型的構(gòu)建41-42
• 4.2.3 動(dòng)物給藥42
• 4.2.4 HE染色檢測(cè)硫化砷對(duì)裸鼠瘤組織形態(tài)學(xué)的改變42-43
• 4.2.5 TUNEL染色法檢測(cè)硫化砷對(duì)裸鼠瘤組織細(xì)胞凋亡的影響43-44
• 4.2.6 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)硫化砷對(duì)裸鼠瘤組織侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的影響44-45
• 4.2.7 estern Blotting法檢測(cè)硫化砷對(duì)裸鼠瘤組織侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的影響45
• 4.2.8 Realtime PCR法檢測(cè)硫化砷對(duì)裸鼠瘤組織侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因m RNA水平的影響45-48
• 4.3 統(tǒng)計(jì)方法48
• 4.4 結(jié)果48-56
• 4.4.1 硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)能力的影響48-50
• 4.4.2 硫化砷引起胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤組織形態(tài)的改變及凋亡的發(fā)生50-52
• 4.4.3 免疫組化法檢測(cè)硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的影響52-53
• 4.4.4 Western Blotting檢測(cè)硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)因子蛋白水平的影響53-55
• 4.4.5 RT-PCR法檢測(cè)硫化砷對(duì)胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)因子mRNA的影響55-56
• 4.5 結(jié)論56-57
• 討論57-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 致謝71-73
• 學(xué)術(shù)論文和科研成果73

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3 石s，

本文編號(hào)：966296