本文關(guān)鍵詞：HBV通過調(diào)節(jié)miR-499a抑制靶基因CFLAR表達(dá)

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【摘要】：目的‘探討miR-499a及靶基因在肝癌細(xì)胞中的關(guān)系。方法1.通過實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)檢測miR-499a在HepG2與HepG2.2.15細(xì)胞中、表達(dá)HBV的腺病毒瞬時感染HepG2細(xì)胞(Ad-HBV-HepG2)與其對照組感染GFP的HepG2細(xì)胞(Ad-GFP-HepG2)中的表達(dá)。2.構(gòu)建miR-499a的過表達(dá)質(zhì)粒(pTARGET-miR-499a)并且運用Real-time PCR的方法驗證過表達(dá)效果,通過miRNA靶基因預(yù)測軟件如TargetScan和miRDB,篩選到miR-499a靶基因CFLAR,構(gòu)建靶基因CFLAR的3'UTR(3'端Untranslated Regions)野生型和突變型熒光素酶報告質(zhì)粒,運用熒光素酶報告系統(tǒng)檢測靶基因CFLAR與miR-499a的相互作用。3.通過Real-time PCR在mRNA水平和Western-blot在蛋白質(zhì)水平驗證CFLAR是否為miR-499a的靶基因。購買miR-499a的抑制劑miR-499a inhibitor,通過Real-time PCR的方法驗證干擾效果,再運用Real-time PCR和Western-blot實驗進(jìn)一步驗證CFLAR是miR-499a的一個靶基因。4.通過qRT-PCR和Western Blot檢測HBV對CFLAR表達(dá)的影響。結(jié)果1.miR-499a在HepG2.2.15細(xì)胞中的表達(dá)高于HepG2細(xì)胞,在Ad-HBV-HepG2細(xì)胞中的表達(dá)高于Ad-GFP-HepG2細(xì)胞。2. miR-499a通過結(jié)合CFLAR的3'UTR來抑制其表達(dá)。3.在SMMC7721細(xì)胞中過表達(dá)miR-499a, CFLAR在mRNA和蛋白水平表達(dá)降低。干擾miR-499a的表達(dá),CFLAR在mRNA和蛋白水平表達(dá)升高。4.HBV抑制CFLAR的表達(dá)。結(jié)論在肝癌細(xì)胞中HBV能上調(diào)miR-499a的表達(dá),CFLAR是miR-499a的靶基因之一,HBV可以通過上調(diào)m1R-499的表達(dá)抑制CFLAR的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：HBV miR-499a CFLAR
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7;R440
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分 HBV上調(diào)肝癌細(xì)胞系中miR-499a的表達(dá)13-19
• 1 材料與方法13-17
• 2 結(jié)果17-18
• 3 討論18-19
• 第二部分 CFLAR是miR-499a的一個靶基因19-36
• 1 材料與方法19-31
• 2 結(jié)果31-34
• 3 討論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-36
• 第三部分 HBV調(diào)節(jié)CFLAR的表達(dá)36-38
• 1 材料和方法36
• 2 結(jié)果36-37
• 3 討論37
• 參考文獻(xiàn)37-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-40
• 文獻(xiàn)綜述：miRNAs在肝癌中的角色40-49
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文50

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1 張靖南;HBV通過調(diào)節(jié)miR-499a抑制靶基因CFLAR表達(dá)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：954837