本文關(guān)鍵詞：LIMK1過表達(dá)對羅格列酮抑制胃癌裸鼠移植瘤的影響

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【摘要】：目的:通過構(gòu)建過表達(dá)LIMK1的MGC-803穩(wěn)定細(xì)胞株,觀察LIMK1與羅格列酮(Rosiglitazone,ROS)對胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的影響。方法:構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的含有過表達(dá)LIMK1的病毒載體系統(tǒng)并對MGC-803細(xì)胞進(jìn)行感染,篩選穩(wěn)定過表達(dá)LIMK1的細(xì)胞株。用q PCR及Western blot對穩(wěn)定細(xì)胞株進(jìn)行鑒定。收集好OE組、NC組和空白對照組三組細(xì)胞接種于裸鼠前肢腋下,觀察裸鼠成瘤情況。待移植瘤體積長至100mm3時,在成瘤的三組細(xì)胞里隨機(jī)各均分為兩組,每組8只,共6組。實驗組予以羅格列酮100mg/kg/2d灌胃處理,對照組予以生理鹽水灌胃。每6天測量瘤體的長短徑,并稱重,以此繪制移植瘤生長曲線圖。48天以后,把成瘤的裸鼠處死,檢測每組移植瘤的大小、重量并計算抑瘤率。HE染色觀察移植瘤形態(tài)學(xué)變化,免疫組織化學(xué)方法和Western blot檢測ROS處理后裸鼠移植瘤LIMK1蛋白表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1.成功地構(gòu)建了穩(wěn)定過表達(dá)LIMK1的MGC-803細(xì)胞系。用慢病毒介導(dǎo)的過表達(dá)LIMK1的病毒載體去感染MGC-803細(xì)胞,檢測到細(xì)胞的綠色熒光提示病毒成功感染了MGC803細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素對細(xì)胞進(jìn)行篩選,可觀察到細(xì)胞的綠色熒光穩(wěn)定表達(dá)。q PCR及Western blot實驗顯示,過表達(dá)LIMK1的m RNA與蛋白表達(dá)水平較空載體組上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而轉(zhuǎn)染空載體組的MGC803細(xì)胞與空白對照組相比,LIMK1的蛋白表達(dá)水平,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.ROS對過表達(dá)LIMK1的MGC803細(xì)胞裸鼠移植瘤的影響。(1)對移植瘤生長的影響:IMK1過表達(dá)組移植瘤的體積及重量明顯高于空白對照組和NC組,而ROS灌藥組的體積及重量明顯低于未灌藥組。經(jīng)計算灌藥組均有一定的抑瘤率。(2)對移植瘤形態(tài)學(xué)的影響:未灌藥組較ROS灌藥組組的細(xì)胞異型性大,細(xì)胞間質(zhì)多,細(xì)胞核染色深,核質(zhì)比多,細(xì)胞排列紊亂,其中LIMK1過表達(dá)組最為明顯。(3)對移植瘤蛋白表達(dá)的影響:各組移植瘤中均有LIMK1蛋白的表達(dá)(棕黃色顆粒,為胞質(zhì)或胞膜),在40倍物鏡下對比觀察,以C組(LIMK1過表達(dá))最為明顯,未灌藥組(A、B、C)較ROS灌藥組(D、E、F)的LIMK1蛋白表達(dá)強(qiáng)。結(jié)論:1.LIMK1過表達(dá)可以促進(jìn)MGC-803細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長。2.羅格列酮可以抑制MGC-803細(xì)胞裸鼠移植瘤的的生長。3.LIMK1可能是羅格列酮抑制人胃癌MGC-803細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的作用靶點。
【關(guān)鍵詞】：羅格列酮 LIMK1過表達(dá) MGC-803細(xì)胞 裸鼠 移植瘤
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 主要縮略語英文索引10-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 材料和方法13-23
• 第3章 實驗結(jié)果23-37
• 第4章 討論37-41
• 第5章 結(jié)論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 文獻(xiàn)綜述 LIMK1/Cofilin信號通路與腫瘤的研究進(jìn)展47-55
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文55-57
• 致謝57

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1 吳勇軍;唐儀;李箏;張漾;趙毅;伍鎮(zhèn)江;蘇琦;;胃癌中LIMK1的表達(dá)及其病理意義[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2011年06期

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1 崔佳鑫;計算機(jī)輔助limk1抑制劑的開發(fā)[D];上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué);2016年

2 歐陽靖霖;沉默LIMK1對羅格列酮抑制人胃癌MGC803細(xì)胞增殖、遷移與侵襲的影響[D];南華大學(xué);2016年

3 吳南芳;LIMK1過表達(dá)對羅格列酮抑制胃癌裸鼠移植瘤的影響[D];南華大學(xué);2016年

4 謝玉冬;Pak1、LIMK1、Cofilin-1在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];南華大學(xué);2015年

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本文編號：951862