發(fā)布時間：2017-09-30 16:16

  本文關(guān)鍵詞：康萊特注射液聯(lián)合順鉑對Lewis肺癌小鼠TAM數(shù)目及HIF-1α表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:肺癌的死亡率位居惡性腫瘤的首位,且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。含鉑類的化療方案在肺癌治療中占有重要地位,但不良反應(yīng)限制其應(yīng)用。臨床實踐中發(fā)現(xiàn)康萊特注射液(KLT)聯(lián)合化療可起到協(xié)同作用,且減輕不良反應(yīng),提高患者生活質(zhì)量。本研究以近年的研究熱點腫瘤微環(huán)境為出發(fā)點,從腫瘤免疫微環(huán)境的主要炎性細(xì)胞即腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor associated macrophage,TAM)和缺氧微環(huán)境的關(guān)鍵因子缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)著手,利用Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,研究KLT聯(lián)合順鉑對體內(nèi)腫瘤生長、免疫狀況的影響、對TAM、HIF-1α的影響及腫瘤組織中TAM與HIF-1α的關(guān)系,從腫瘤微環(huán)境的角度探討KLT對化療增效減毒、提高免疫的機制。方法:1體外培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞,取傳至3-4代生長好的細(xì)胞接種于小鼠左腋皮下,建立Lewis肺癌移植瘤模型。觀察記錄小鼠的一般狀況,如體重、進(jìn)食、活動、毛發(fā)狀況。待腫瘤最長徑為0.8-1.0cm時,挑選腫瘤大小較均一的荷瘤小鼠24只,隨機分為對照組(control)、康萊特組(KLT)、順鉑組(DDP)及DDP聯(lián)合KLT組(DDP+KLT)4組,每組6只,腹腔注射相應(yīng)藥物,分別為:生理鹽水(normal saline,NS)、NS;KLT、NS;NS、DDP;KLT、DDP,其中NS、KLT按12.5m L/kg,DDP按1mg/Kg(將10mg DDP溶于125ml氯化鈉注射液中)每日腹腔注射,兩次注射之間間隔12小時,連續(xù)給藥14天。2給藥第15天(最后一次給藥后12小時),脫頸處死小鼠,稱取小鼠體重,完整剝離腫瘤及脾臟,分別稱重,計算各組腫瘤抑制率及脾臟指數(shù)。3采用流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry,FCM)檢測各組小鼠腫瘤組織中TAM比例。4采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測各組小鼠腫瘤組織中HIF-1αm RNA的表達(dá)。5采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件建立數(shù)據(jù)庫,將相關(guān)資料錄入數(shù)據(jù)庫,進(jìn)行統(tǒng)計分析。瘤重、脾指數(shù)等計量資料用x__±s表示,經(jīng)正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗后,各組指標(biāo)均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間多重比較采用LSD-t檢驗,相關(guān)性檢驗采用Pearson相關(guān)檢驗,各檢驗均以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1各組小鼠一般情況:小鼠皮下接種Lewis肺癌細(xì)胞后,接種6-8天小鼠進(jìn)食、活動較前減少,毛發(fā)欠光澤,有脫落。6-7天建模成功,第10天絕大多數(shù)小鼠腫瘤最長徑為0.8-1.0cm。荷瘤小鼠進(jìn)食、活動、毛發(fā)等一般情況逐漸變差,對照組小鼠最明顯。2各組干預(yù)對荷瘤小鼠的抑瘤效應(yīng):對照組、KLT組、DDP組、DDP+KLT組平均瘤重分別為(2.1517±0.29936)g、(1.1217±0.22798)g、(0.8867±0.18694)g、(0.7050±0.23227)g,三個治療組的瘤重均明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與DDP治療組相比,KLT組、DDP+KLT組的瘤重與其無顯著性差異(P分別為0.105,0.205)。3各組小鼠脾臟指數(shù)比較:對照組、KLT組、DDP組、DDP+KLT組脾臟指數(shù)分別為7.31±1.50、9.70±1.53、4.58±1.29、6.54±1.68,對照組、KLT組、DDP+KLT組的脾臟指數(shù)均高于DDP組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005,0.000,0.0360.05);對照組和DDP+KLT組的脾臟指數(shù)相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.385),兩組脾臟指數(shù)高于DDP組,而低于KLT組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4各組小鼠腫瘤組織中CD11b+F4/80+細(xì)胞比較:與對照組相比,KLT組、DDP+KLT組的腫瘤組織中CD11b+F4/80+細(xì)胞比例較低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.020,0.0130.05),DDP組TAM比例較對照組高,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.898);與DDP組相比,DDP+KLT組的腫瘤組織CD11b+F4/80+細(xì)胞比例顯著降低(P=0.0090.01)。 與對照組相比,KLT組、DDP組和DDP+KLT組3個治療組腫瘤組織中HIF-1αm RNA表達(dá)量均較低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002,0.011,0.0000.05);DDP+KLT組的腫瘤組織中HIF-1αm RNA表達(dá)量較KLT或DDP單獨應(yīng)用均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.039,0.0090.05);DDP組及KLT組的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.518)。6小鼠腫瘤組織中TAM和HIF-1αm RNA表達(dá)的相關(guān)性分析:四個組中TAM和HIF-1αm RNA的表達(dá)均無相關(guān)性(P=0.545,0.332,0.751,0.7760.05)。5各組小鼠腫瘤組織中HIF-1αm RNA的表達(dá):結(jié)論:1 KLT本身具有抑制Lewis肺癌小鼠腫瘤生長、增強小鼠免疫功能的作用,與DDP聯(lián)合應(yīng)用可增強其抗腫瘤作用,減輕化療引起的免疫抑制。2 DDP可有效控制Lewis肺癌小鼠腫瘤生長,但降低其免疫功能;KLT可改善化療引起的免疫抑制,其機制可能與抑制TAM有關(guān)。3 KLT、DDP單獨應(yīng)用可改善Lewis肺癌小鼠腫瘤缺氧狀態(tài),聯(lián)合應(yīng)用優(yōu)于任何一種藥物單用。KLT對Lewis肺癌小鼠的抗腫瘤作用及對化療的增效作用可能是通過下調(diào)HIF-1αm RNA水平、改善缺氧實現(xiàn)的。HIF-1α表達(dá)升高與腫瘤發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：康萊特注射液 Lewis肺癌 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 腫瘤微環(huán)境
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-26
• 附表26-28
• 討論28-32
• 結(jié)論32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 綜述 康萊特注射液聯(lián)合化療治療惡性腫瘤的研究進(jìn)展38-45
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

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本文編號：949181