發(fā)布時間：2017-09-30 15:41

  本文關(guān)鍵詞：Nrf2、Caspase3在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性

  更多相關(guān)文章： 人腦膠質(zhì)瘤 細(xì)胞凋亡 Nrf2 Caspase3 免疫組化 Western blot

【摘要】：目的:腦膠質(zhì)瘤人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤腦簡稱膠質(zhì)瘤,膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)最常見的惡性腫瘤,起源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,包括星形細(xì)胞系瘤,少突膠質(zhì)細(xì)胞系腫瘤,混合性膠質(zhì)細(xì)胞瘤,室管膜瘤等。據(jù)統(tǒng)計(jì),占顱內(nèi)腫瘤的50%~60%,即使給予傳統(tǒng)的手術(shù)聯(lián)合放、化療的綜合治療,低級別膠質(zhì)瘤病人的平均存活時間為3~5年,而高級別膠質(zhì)瘤生存期為1~2年,對人們的生命健康存在極大的威脅。我國是膠質(zhì)瘤的高發(fā)國家,每年的發(fā)病人數(shù)和因膠質(zhì)瘤而死亡人數(shù)都位居各種惡性腫瘤的前列,它呈侵襲性生長,其治療一直是神經(jīng)外科領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),腦膠質(zhì)瘤的傳統(tǒng)治療策略是在手術(shù)切除大部分瘤體的基礎(chǔ)上,采用多種手段殺滅殘存瘤細(xì)胞或抑制其增殖,腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是多因素、多基因、綜合作用的結(jié)果。膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)主要的原發(fā)性腫瘤[1-2],膠質(zhì)瘤發(fā)病原因和其他系統(tǒng)的腫瘤一樣,各種致癌物誘發(fā)細(xì)胞癌變的過程,實(shí)質(zhì)上都是導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化和凋亡失控,這些過程均依賴于細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[3]。多種凋亡基因,原癌基因,抑癌基因作用在腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的不同環(huán)節(jié),凋亡抑制或者平衡失調(diào),最終導(dǎo)致了瘤細(xì)胞增殖過度,對腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后起決定作用。近年研究闡述,許多細(xì)胞粘附分子對人體不同部位腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和對腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移機(jī)制起著重要作用,同樣水解蛋白酶的作用也舉足輕重,關(guān)于這其中的作用機(jī)制的研究也已經(jīng)明朗,相對于膠質(zhì)瘤的文獻(xiàn)報(bào)道并不很全面,所以,對于膠質(zhì)瘤復(fù)雜機(jī)制的探討還需要更全面、更深入,可以以分子水平為方向。機(jī)體細(xì)胞存在著不同于壞死的另一種死亡形式———凋亡。腫瘤細(xì)胞凋亡及其調(diào)控機(jī)制的研究成為腫瘤研究的主要課題之一,而凋亡的發(fā)生與凋亡機(jī)制中的關(guān)鍵蛋白酶Caspase-3備受關(guān)注。Nrf2是近年來的研究熱點(diǎn),其在抗氧化應(yīng)激、抑制腫瘤形成等多方面的作用受到廣泛關(guān)注,Nrf2(nuclear factor-E2-relatedfactor 2)是體內(nèi)多種Ⅱ相解毒酶的主要轉(zhuǎn)錄激活因子,細(xì)胞損傷時Nrf2將上調(diào)并激活下游Ⅱ相解毒基因,增強(qiáng)細(xì)胞對氧化應(yīng)激的耐受能力,本課題通過檢測Nrf2,Caspase-3在不同級別腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)以探討Nrf2,Caspase-3對腦膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的意義。方法:收集河北醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科自2013年5月-2014年10月腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本85例,其中I級膠質(zhì)瘤、II級膠質(zhì)瘤組、III級膠質(zhì)瘤、IV級膠質(zhì)瘤分別為14例、27例、25例、19例。病理診斷由醫(yī)院病理科按照WHO腦腫瘤分級診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。另外對照組取自因外傷或者腦出血而進(jìn)行的顱內(nèi)減壓的正常腦組織標(biāo)本,為15例。所有膠質(zhì)瘤組病例患者于術(shù)前均未進(jìn)行放化療等任何抗腫瘤治療。所有組織標(biāo)本均在手術(shù)切下組織后馬上取材,所有分別經(jīng)10%的福爾馬林固定及液氮保存。將以上標(biāo)本分為五組:正常腦組織組,I級膠質(zhì)瘤組,II級膠質(zhì)瘤組,III級膠質(zhì)瘤組,IV級膠質(zhì)瘤組。采用免疫組織化學(xué)方法檢測Nrf2,Caspase-3在上述五組病理組織切片中的表達(dá)情況及分析其相關(guān)性。采用Western Blot(蛋白質(zhì)印記)法同時對5組標(biāo)本的Nrf2,Caspase-3的蛋白含量進(jìn)行測量,得出各組灰度值與標(biāo)本相對應(yīng),采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。蛋白表達(dá)情況:1 IHC結(jié)果顯示:Nrf2在正常腦組織、I、II、III、IV級膠質(zhì)瘤組表達(dá)陽性率分別為6.67%、71.43%、85.19%、96.00%、100.00%,并且隨著腫瘤惡性程度增高,Nrf2表達(dá)量增加,Spearman等級相關(guān)得出相關(guān)系數(shù)r=0.525,P0.01,Nrf2表達(dá)與腫瘤分級呈正相關(guān),即腫瘤分級越高,Nrf2表達(dá)陽性率越高,圖片見:Fig.1、Fig.2、Fig.3、Fig.4、Fig.5。統(tǒng)計(jì)圖表詳見Table 1、Table 3。2 IHC結(jié)果顯示:Caspase-3在正常腦組織、I、II、III、IV級膠質(zhì)瘤組表達(dá)陽性率分別為13.33%、92.86%、88.89%、76.00%、42.11%,并且隨著腫瘤惡性程度增高,Caspase-3表達(dá)量降低,Spearman等級相關(guān)得出相關(guān)系數(shù)r=-0.513,P0.01,Caspase-3表達(dá)與腫瘤分級呈負(fù)相關(guān),即腫瘤分級越高,Caspase-3表達(dá)陽性率越。圖片見:Fig6、Fig7、Fig8、Fig9、Fig10詳見Table 2、Table 4。3對Nrf2、Caspase-3的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析。Spearman等級相關(guān)得出相關(guān)系數(shù)r=-0.936,P0.01,即Nrf2表達(dá)與Caspase-3表達(dá)呈高度負(fù)相關(guān),即Nrf2表達(dá)陽性等級越高,Caspase-3表達(dá)陽性等級越高,詳見Table 5。4蛋白含量:采用western blot方法對標(biāo)本的蛋白含量進(jìn)行測定。觀察Nrf2、Caspase-3及action在正常腦組織、I級、II級、III級、IV級中的蛋白表達(dá)情況,結(jié)果以測定的灰度值為準(zhǔn)。分析Nrf2、Caspase-3的相對表達(dá)量,Nrf2的相對表達(dá)量逐漸升高,Caspase-3的相對表達(dá)量逐漸降低。各級別膠質(zhì)瘤組分別與正常腦組織組向比較,采用單因素方差分析,均有顯著性意義。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,*P0.05,**P0.01。詳見Table 6、Table 7、Fig.11、Fig.12、Fig.13。結(jié)論:1與以正常腦組織為標(biāo)本的對照組相比,膠質(zhì)瘤組中的Nrf2表達(dá)明顯增高,且隨著膠質(zhì)瘤的級別增加表達(dá)增高越明顯,存在明顯差異。2膠質(zhì)瘤組中的Caspase-3蛋白含量明顯降低,隨著膠質(zhì)瘤惡性程度(級別)的增高,Caspase-3的蛋白表達(dá)越低。蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤惡性程度(級別)存在負(fù)相關(guān)性。提示腫瘤的惡性水平在一定程度上可以影響著Caspase-3的蛋白含量的表達(dá)。3 Nrf2、Caspase-3在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)存在相關(guān)性,隨著Nrf2的表達(dá)上升,Caspase-3的表達(dá)下調(diào)。4 Nrf2、Caspase-3在膠質(zhì)瘤復(fù)雜的發(fā)生、發(fā)展過程中起一定作用。Caspase3和Nrf2有可能成為膠質(zhì)瘤預(yù)后判斷的潛在指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：人腦膠質(zhì)瘤 細(xì)胞凋亡 Nrf2 Caspase3 免疫組化 Western blot
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-23
• 附圖23-30
• 附表30-34
• 討論34-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述 Nrf2、Caspase3 與腫瘤關(guān)系研究進(jìn)展39-48
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 周立田;王漢東;金偉;喬梁;唐科;茅磊;王笑亮;;Nrf2在腦外傷后細(xì)胞鈣離子穩(wěn)態(tài)及凋亡中的作用[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2010年05期

2 楊海虹;郜靚;張亞雷;王瑋;趙瑾;鄧秋華;溫丹萍;;NRF2、Keap1基因及蛋白在非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織中的表達(dá)[J];山東醫(yī)藥;2010年13期

3 ;Caspase Family Proteases and Apoptosis[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2005年11期

4 王克文;張桂英;;食管癌survivin、caspase-3表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2006年05期

，

本文編號：949028