本文關(guān)鍵詞：基于耐藥和單細(xì)胞全克隆構(gòu)建肝癌干細(xì)胞體外富集模式的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 肝癌干細(xì)胞 全克隆 單細(xì)胞培養(yǎng) 耐藥 富集

【摘要】：背景：腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells,CSCs)是指在腫瘤組織中,極少量具有以無限的自我更新潛能及真正的致瘤能力為最重要特征的腫瘤細(xì)胞的群體。肝癌我國最常見的惡性腫瘤,惡性度極高且病情進(jìn)展很快,病發(fā)后的生存時間僅為6個月被稱為“癌中之王”,其發(fā)病人數(shù)也已占到全世界病例的40%,故被列入預(yù)防治療的重點(diǎn)疾病。如何才能積極有效的分離純化出肝癌干細(xì)胞,一直是學(xué)術(shù)界著眼及研究的重點(diǎn)熱點(diǎn),本課題組選取了肝母細(xì)胞瘤HepG2細(xì)胞株為研究對象,其來源于一個15歲白人的肝細(xì)胞腺瘤組織,因可能是最早分離得到且背景清晰、表型性狀穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn),已成為被廣泛使用的肝細(xì)胞系而應(yīng)用于肝癌研究的領(lǐng)域內(nèi)。根據(jù)單個細(xì)胞全克隆富集方法的優(yōu)勢結(jié)合臨床廣譜抗腫瘤化療藥物阿霉素進(jìn)行細(xì)胞毒性干預(yù),將獲得的全克隆肝癌細(xì)胞經(jīng)異種移植實(shí)驗(yàn)檢測其成瘤性,從而試圖建立一種單細(xì)胞全克隆加阿霉素干預(yù)的改良型肝癌干細(xì)胞富集模式。研究發(fā)現(xiàn)：單個細(xì)胞有效稀釋克隆培養(yǎng)法得到的全克隆細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤率達(dá)到100%,而在不同濃度阿霉素干預(yù)模式下的單個細(xì)胞克隆培養(yǎng),所得到的全克隆比率不盡相同且裸鼠體內(nèi)成瘤率也有較大差異。研究表明經(jīng)單個細(xì)胞全克隆加阿霉素干預(yù)的培養(yǎng)方法較大可能的成為一種新的改良型肝癌干細(xì)胞富集模式。目的：觀察人肝母細(xì)胞瘤HepG2單個細(xì)胞培養(yǎng)形成的三種克隆及阿霉素干預(yù)下全克隆裸鼠體內(nèi)成瘤情況,探討基于腫瘤干細(xì)胞耐藥特性和體外單細(xì)胞培養(yǎng)形成全克隆現(xiàn)象,建立一種簡單易行的肝癌干細(xì)胞體外富集模式。方法：選擇人肝母細(xì)胞瘤HepG2細(xì)胞系,以有限稀釋法建立體外單細(xì)胞克隆培養(yǎng)體系,進(jìn)行以下兩部分實(shí)驗(yàn)：1.先觀察體外單細(xì)胞克隆培養(yǎng)的克隆細(xì)胞生長曲線和形成全克隆、部分克隆以及旁克隆等三類克隆比例后,選取全克隆逐級擴(kuò)增,最后取106的HepG2細(xì)胞進(jìn)行裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)。2.阿霉素干預(yù)HepG2癌細(xì)胞克隆的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ剑?1).先加0.1μMg/mL、0.05μg/mL和0.01μMg/mL梯度濃度的阿霉素干預(yù)HepG2細(xì)胞48hrs,單個細(xì)胞克隆培養(yǎng)后形成的全克隆、部分克隆及旁克隆進(jìn)行逐級擴(kuò)增和裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)。(2).先進(jìn)行單細(xì)胞克隆培養(yǎng),然后只針對全克隆細(xì)胞加0.5μg/mL、0.3μg/mL、 0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL和0.01μg/mL梯度濃度的阿霉素干預(yù)48hrs,觀察全克隆生長情況,對于干預(yù)后存活的全克隆全部進(jìn)行逐級擴(kuò)增和裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：1.HepG2細(xì)胞單細(xì)胞培養(yǎng)可形成全克隆、部分克隆和旁克隆等三種癌細(xì)胞擴(kuò)增生長模式,總克隆形成率為(32.78±9.03)%,其中克隆構(gòu)成為全克隆(7.12±2.96)%、部分克隆(62.67±13.39)%、旁克隆百分比(30.21±14.87)%；所有全克隆均可逐級擴(kuò)增,且在106細(xì)胞水平裸鼠成瘤率為100%(8/8)。 2.(1)先阿霉素干預(yù)后進(jìn)行單細(xì)胞克隆培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)僅0.05μg/mL和0.01μg/mL組的全克隆存活,并可逐級擴(kuò)增培養(yǎng)和100%(3/3、8/8)成瘤。(2)單細(xì)胞克隆培養(yǎng)后的全克隆進(jìn)行阿霉素干預(yù),發(fā)現(xiàn)僅0.1μg/mL、 0.05μg/mL、和0.01μg/mL、組全克隆存活,并可逐級擴(kuò)增培養(yǎng)和100%(5/5、5/5、5/5)成瘤。結(jié)論：HepG2細(xì)胞體外單細(xì)胞培養(yǎng)的全克隆樣生長且耐受阿霉素殺傷的細(xì)胞群體,極有可能是富含肝癌干細(xì)胞,這可能是簡單有效體外腫瘤干細(xì)胞富集模式。
【關(guān)鍵詞】：肝癌干細(xì)胞 全克隆 單細(xì)胞培養(yǎng) 耐藥 富集
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 實(shí)驗(yàn)流程圖9-11
• 前言11-13
• 第一部分 人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞HepG2單細(xì)胞培養(yǎng)及全克隆擴(kuò)增裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)研究13-26
• 1 材料與方法13-21
• 2 統(tǒng)計學(xué)處理21
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-26
• 第二部分 阿霉素干預(yù)人肝母細(xì)胞瘤HepG2細(xì)胞克隆的實(shí)驗(yàn)研究26-43
• 1 材料與方法26-35
• 2 統(tǒng)計學(xué)處理35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-43
• 討論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 結(jié)論47-48
• 綜述48-67
• References60-67
• 附錄67-68
• 致謝68-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文69

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1 宋凱;楊碩菲;吳俊華;江春平;;肝癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2009年36期

2 嚴(yán)威;吳國洋;;肝癌干細(xì)胞分離鑒定研究進(jìn)展[J];肝膽外科雜志;2010年03期

3 李廣權(quán);陳偉強(qiáng);;肝癌干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年03期

4 張朵;朱海英;馬鳳云;胡以平;;肝癌干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J];生命的化學(xué);2006年01期

5 陳麗;戴廣海;;肝癌干細(xì)胞研究現(xiàn)狀[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2008年12期

6 唐飛;呂洪敏;向慧玲;;肝癌干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J];實(shí)用肝臟病雜志;2008年02期

7 張偉;陳孝平;;肝癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];臨床外科雜志;2008年09期

8 張華;高志紅;許田英;朱建鳳;文家斌;張陽;;常規(guī)化療對肝癌干細(xì)胞的作用[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2009年06期

9 徐文;曹璐;殷正豐;;肝癌干細(xì)胞研究進(jìn)展與方向[J];癌癥;2009年09期

10 孫力超;趙璇;遇瓏;韓璐璐;劉彤;胡海;孫立新;楊治華;冉宇靚;;抗肝癌干細(xì)胞功能性單克隆抗體的研制[J];中國腫瘤生物治療雜志;2010年02期

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1 單娟娟;錢程;;懸浮條件培養(yǎng)法富集肝癌干細(xì)胞[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

2 尹川;謝渭芬;;肝癌干細(xì)胞及其分化治療[A];第九次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議專題報告論文集[C];2009年

3 殷勝勇;陳新華;胡晨;;CD133陽性肝癌干細(xì)胞在肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)中的作用及納秒脈沖進(jìn)行干預(yù)的初步實(shí)驗(yàn)研究[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

4 杜智;宋文芹;張世光;高英堂;朱爭艷;王毅軍;只丹琮;;人原發(fā)性肝癌細(xì)胞建系及其生物學(xué)特性的初步鑒定[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會2007年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2007年

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1 本報記者 王雪敏;肝癌干細(xì)胞及其分化治療[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2010年

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1 雷增杰;組蛋白去甲基化酶LSD1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞“干性”和侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 張克志;三氧化二砷抑制GLI1表達(dá)誘導(dǎo)肝癌干細(xì)胞分化延長術(shù)后生存期的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 劉輝琦;肝癌干細(xì)胞相關(guān)功能性基因的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 戎曉祥;CIK細(xì)胞對肝癌干細(xì)胞的殺傷作用及其相關(guān)機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

5 朱平平;肝癌干細(xì)胞相關(guān)基因和長鏈非編碼RNA調(diào)控自我更新的分子機(jī)制研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2016年

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9 朱新鋒;全反式維甲酸誘導(dǎo)分化肝癌干細(xì)胞作用研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

10 王雪;長鏈非編碼RNA對肝癌干細(xì)胞的調(diào)控作用及分子機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

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1 王璐;抑瘤素M與鹽霉素聯(lián)用對肝癌干細(xì)胞作用的研究[D];吉林大學(xué);2016年

2 陸世東;CD90陽性細(xì)胞篩選及PI3K/AKT通路對其干細(xì)胞樣特性影響的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

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6 曹璐;球培養(yǎng)法富集肝癌干細(xì)胞樣亞群及其特征鑒定[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 楊軍;肝癌干細(xì)胞特異性標(biāo)志物的實(shí)驗(yàn)研究及其臨床病理聯(lián)系[D];中南大學(xué);2009年

8 常文娟;低劑量順鉑富集肝癌干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

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10 陶璐;基于腫瘤耐藥特性構(gòu)建肝癌干細(xì)胞富集模式的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號：943974