發(fā)布時(shí)間：2017-09-27 23:02

  本文關(guān)鍵詞：SM-164聯(lián)合多柔比星（ADM）對(duì)人骨肉瘤U-2細(xì)胞增殖及凋亡的影響

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【摘要】：背景及目的:Smac作為一種新型線(xiàn)粒體蛋白質(zhì),自從2000年7月由Du等[16]首次報(bào)道以來(lái)作為一種新型抗癌藥物得以被廣泛研究,SM-164作為Smac蛋白的一種亞型,其抗癌效果更為顯著,同時(shí),有多篇報(bào)導(dǎo)顯示,在體內(nèi)外試驗(yàn)中,SM-164對(duì)人類(lèi)多種類(lèi)型腫瘤細(xì)胞有明確的抗腫瘤活性,包括前列腺癌,結(jié)腸癌,乳腺癌,卵巢癌以及惡性黑色素瘤等[21,25]。本文旨在探究SM-164單藥以及聯(lián)合鹽酸鹽多柔比星(ADM)對(duì)骨肉瘤U-2-OS的增值抑制和凋亡的作用,為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制和可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,以及SM-164作為一種新型化療生物制劑用于人骨肉瘤(OS)治療的可能性。方法:(1)MTT法檢測(cè)SM-164單藥及聯(lián)合鹽酸多柔比星(ADM)對(duì)U-2-OS細(xì)胞的增殖抑制作用。1)檢測(cè)不同濃度梯度的SM-164分別單獨(dú)處理U-2-OS細(xì)胞24小時(shí)后,U-2-OS的增殖抑制作用,并繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn);2)根據(jù)前期濃度梯度實(shí)驗(yàn),SM-164作用濃度分別設(shè)定為100nM、200nM,而ADM的作用濃度則分別設(shè)定為臨床用藥濃度0.5μg/mL和臨床半量濃度0.25μg/mL,分九組:單藥SM164-100nM組、SM164-200nM組、單藥ADM0.25μg/mL組、ADM0.5μg/mL組、聯(lián)合用藥(SM164-100nM+ADM0.25μg/mL)組、聯(lián)合用藥(SM164-100nM+ADM0.5μg/mL)組、聯(lián)合用藥(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)組以及聯(lián)合用藥(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)組和對(duì)照組。(2)Hoechst染色檢測(cè)U-2細(xì)胞凋亡。分別設(shè)置對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1(ADM0.25/0.5μg/ml)、實(shí)驗(yàn)組2(ADM0.25/0.5μg/ml+SM164-100 nM)。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)聯(lián)合SM-164(100nM)誘導(dǎo)U-2細(xì)胞凋亡。結(jié)果:(1)MTT實(shí)驗(yàn)顯示:1)當(dāng)不同濃度梯度(1nM、10nM、50nmol/L、100nM、200 nM、500nM、1μmol/L)的SM-164分別單獨(dú)處理U-2-OS細(xì)胞24小時(shí)后,U-2-OS的增殖受到抑制,并隨著SM-164劑量的增加抑制程度逐漸增強(qiáng),但抑制效果并不顯著,對(duì)U-2細(xì)胞存活率沒(méi)有顯著的改變(詳見(jiàn)表1,圖1);2)SM-164(100nM/200nM)聯(lián)合ADM(0.25/0.5μg/mL)比單獨(dú)使用相同濃度的ADM對(duì)U-2-OS抑制率均明顯加強(qiáng),兩者均表現(xiàn)明顯協(xié)同效應(yīng)(詳見(jiàn)表2,圖2)。(2)Hoechst染色顯示:對(duì)照組(不加藥),其視野內(nèi)U-2細(xì)胞與加藥組相比數(shù)量雖然較多,但只有很微弱的藍(lán)色熒光;ADM(0.25/0.5μg/mL)組視野內(nèi)細(xì)胞數(shù)量有所減少,可見(jiàn)少量藍(lán)色熒光;ADM(0.25/0.5μg/mL)+SM-164(100nM)組視野內(nèi)U-2細(xì)胞致密濃染,清晰可見(jiàn)大量且較強(qiáng)藍(lán)色熒光,提示該組藥物促U-2-OS凋亡效果顯著。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示:單獨(dú)用ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)處理U-2細(xì)胞24小時(shí),其凋亡率為(8.53±2.41)%、(12.2±3.11)%;SM-164-100nM處理U-2細(xì)胞24小時(shí)后,其凋亡率為(6.03±2.01)%;將SM-164-100nM聯(lián)合鹽酸多柔比星ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)處理U-2 OS 24小時(shí),其凋亡率分別為(36.4±3.68)%、(50.2±5.19)%,SM-164可促進(jìn)U-2細(xì)胞凋亡。結(jié)論:1)SM-164單藥對(duì)U-2-OS增殖抑制作用有限,但是SM-164聯(lián)合ADM對(duì)U-2-OS有明顯的增殖抵抗作用,且協(xié)同效應(yīng)十分顯著;2)SM-164能明顯加強(qiáng)鹽酸多柔比星(ADM)誘導(dǎo)U-2-OS的凋亡,在誘導(dǎo)凋亡方面二者協(xié)同作用同樣顯著。
【關(guān)鍵詞】：U-2細(xì)胞 SM-164 鹽酸多柔比星(ADM) 增殖抑制 細(xì)胞凋亡 IAPS
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-13
• 第2章 材料和方法13-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 2.1.1 細(xì)胞來(lái)源13
• 2.1.2 主要試劑與材料13
• 2.1.3 主要儀器與設(shè)備13-14
• 2.1.4 常用試劑的配置14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代14-16
• 2.2.2 細(xì)胞凍存16-17
• 2.2.3 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇17
• 2.2.4 MTT法檢測(cè)SM-164單藥及聯(lián)合鹽酸多柔比星（ADM）對(duì)U2OS的增殖抑制影響17-18
• 2.2.5 Hoechst熒光染色試劑盒觀(guān)察U2OS凋亡18
• 2.2.6 流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)ADM（0.25μg/m L、0.5μg/m L）聯(lián)合SM-164（100n M）誘導(dǎo)U-2 細(xì)胞凋亡18-19
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法19-20
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-27
• 3.1 不同濃度SM-164單藥作用下U2OS生長(zhǎng)曲線(xiàn)20-21
• 3.2 SM-164聯(lián)合ADM對(duì)U2OS增殖的抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-22
• 3.3 hoechst試劑盒染色U-2 細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果22-24
• 3.4 流式細(xì)胞儀測(cè)ADM（0.25μg/m L、0.5μg/m L）聯(lián)合SM-164（100n M）誘導(dǎo)U-2 細(xì)胞凋亡結(jié)果24-27
• 第4章 討論27-30
• 4.1 SM-164聯(lián)合鹽酸多柔比星(ADM)對(duì)U-2 細(xì)胞增殖的影響27-28
• 4.2 SM-164聯(lián)合鹽酸多柔比星(ADM)對(duì)U-2 細(xì)胞凋亡的影響28
• 4.3 SM-164誘導(dǎo)U-2 細(xì)胞凋亡的相關(guān)作用機(jī)制28-29
• 4.4 本實(shí)驗(yàn)的不足之處29-30
• 第5章 結(jié)論與展望30-31
• 5.1 結(jié)論30
• 5.2 進(jìn)一步工作方向30-31
• 致謝31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 綜述34-42
• 參考文獻(xiàn)40-42

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉國(guó)雄;婁楠;王洋;吳元成;黃嵐峰;;長(zhǎng)春新堿對(duì)人成骨肉瘤MG63細(xì)胞的增殖抑制和凋亡促進(jìn)作用及其機(jī)制[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2013年09期

2 龍海濤;李康華;朱勇;肖文峰;祝偉宏;;非甾體類(lèi)抗炎藥對(duì)骨肉瘤細(xì)胞株增殖和凋亡的影響[J];中國(guó)骨與關(guān)節(jié)雜志;2012年02期

3 牟鈺欽;周龍洋;楊秋s，

本文編號(hào)：932369