本文關鍵詞：胰腺癌Panc-1細胞中miR-103a-3p靶向作用Dicer1基因的研究

  更多相關文章： mi R-103a-3p Dicer1 胰腺癌 靶基因

【摘要】：目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關系密切,其主要通過與靶基因m RNA的3’UTR結合進而導致m RNA降解或抑制m RNA翻譯,最終促進或抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本實驗中我們通過尋找mi R-103a-3p的潛在靶基因,并驗證mi R-103a-3p與潛在靶基因在胰腺癌細胞株Panc-1中的靶向關系。在此基礎上進一步探討mi R-103a-3p調節(jié)其靶基因表達的作用方式,為下一步體內實驗奠定基礎,同時也為尋求胰腺癌有效的治療靶點提供理論依據(jù)。方法:1.利用靶基因預測軟件并結合相關因素分析,篩選出Dicer1可能為mi R-103a-3p的靶基因;2.利用雙熒光素酶報告基因技術,驗證mi R-103a-3p與Dicer1基因的靶向關系;3.構建mi R-103a-3p inhibitor轉染成功的胰腺癌細胞Panc-1并檢驗轉染效率;4.利用實時熒光定量PCR及Western Blot技術分別檢測mi R-103a-3p和Dicer1的表達,從功能上驗證mi R-103a-3p對Dicer1基因的調控關系。結果:1.通過八個數(shù)據(jù)庫預測mi R-103a-3p作用的靶基因,結果顯示Dicer1預測值較高,在八個數(shù)據(jù)庫預測中都存在靶向關系,且Dicer1在胰腺癌中研究較為成熟,因此,選定了Dicer1作為mi R-103a-3p靶基因的驗證對象;2.基因測序結果表明,攜帶Dicer1基因3’-UTR序列的GV306報告基因載體構建成功,與mi R-103a-3p inhibitor共轉染細胞后,熒光素酶活性較對照組明顯上升(P0.05);3.Panc-1胰腺癌細胞轉染mi R-103a-3p inhibitor后,Panc-1細胞中mi R-103a-3p的表達水平明顯下降(P0.05);4.在Panc-1細胞中,mi R-103a-3p濃度與Dicer1的m RNA水平無明顯相關性,而與Dicer1蛋白表達水平呈負相關。結論:1.Dicer1基因是mi R-103a-3p的靶基因,其3’-UTR序列中存在mi R-103a-3p的作用靶點;2.通過瞬時轉染mi R-103a-3p inhibitor,成功構建低表達mi R-103a-3p的Panc-1細胞系;3.在胰腺癌Panc-1細胞中,mi R-103a-3p在轉錄后水平調節(jié)Dicer1基因的表達。
【關鍵詞】：mi R-103a-3p Dicer1 胰腺癌 靶基因
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 中英文縮略詞9-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料與方法14-31
• 第3章 實驗結果31-40
• 第4章 討論40-44
• 第5章 結論44-46
• 參考文獻46-50
• 綜述50-60
• 參考文獻57-60
• 科研成果60
• 論文受以下基金項目資助60-61
• 致謝61

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