本文關(guān)鍵詞：胰腺癌Panc-1細(xì)胞中miR-103a-3p靶向作用Dicer1基因的研究

  更多相關(guān)文章： mi R-103a-3p Dicer1 胰腺癌 靶基因

【摘要】：目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,其主要通過(guò)與靶基因m RNA的3’UTR結(jié)合進(jìn)而導(dǎo)致m RNA降解或抑制m RNA翻譯,最終促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)中我們通過(guò)尋找mi R-103a-3p的潛在靶基因,并驗(yàn)證mi R-103a-3p與潛在靶基因在胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc-1中的靶向關(guān)系。在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討mi R-103a-3p調(diào)節(jié)其靶基因表達(dá)的作用方式,為下一步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ),同時(shí)也為尋求胰腺癌有效的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。方法:1.利用靶基因預(yù)測(cè)軟件并結(jié)合相關(guān)因素分析,篩選出Dicer1可能為mi R-103a-3p的靶基因;2.利用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù),驗(yàn)證mi R-103a-3p與Dicer1基因的靶向關(guān)系;3.構(gòu)建mi R-103a-3p inhibitor轉(zhuǎn)染成功的胰腺癌細(xì)胞Panc-1并檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染效率;4.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)mi R-103a-3p和Dicer1的表達(dá),從功能上驗(yàn)證mi R-103a-3p對(duì)Dicer1基因的調(diào)控關(guān)系。結(jié)果:1.通過(guò)八個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)mi R-103a-3p作用的靶基因,結(jié)果顯示Dicer1預(yù)測(cè)值較高,在八個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)中都存在靶向關(guān)系,且Dicer1在胰腺癌中研究較為成熟,因此,選定了Dicer1作為mi R-103a-3p靶基因的驗(yàn)證對(duì)象;2.基因測(cè)序結(jié)果表明,攜帶Dicer1基因3’-UTR序列的GV306報(bào)告基因載體構(gòu)建成功,與mi R-103a-3p inhibitor共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,熒光素酶活性較對(duì)照組明顯上升(P0.05);3.Panc-1胰腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染mi R-103a-3p inhibitor后,Panc-1細(xì)胞中mi R-103a-3p的表達(dá)水平明顯下降(P0.05);4.在Panc-1細(xì)胞中,mi R-103a-3p濃度與Dicer1的m RNA水平無(wú)明顯相關(guān)性,而與Dicer1蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:1.Dicer1基因是mi R-103a-3p的靶基因,其3’-UTR序列中存在mi R-103a-3p的作用靶點(diǎn);2.通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-103a-3p inhibitor,成功構(gòu)建低表達(dá)mi R-103a-3p的Panc-1細(xì)胞系;3.在胰腺癌Panc-1細(xì)胞中,mi R-103a-3p在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)Dicer1基因的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：mi R-103a-3p Dicer1 胰腺癌 靶基因
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 中英文縮略詞9-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料與方法14-31
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-40
• 第4章 討論40-44
• 第5章 結(jié)論44-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述50-60
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 科研成果60
• 論文受以下基金項(xiàng)目資助60-61
• 致謝61

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本文編號(hào)：932343