本文關鍵詞：ERK對子宮頸癌細胞中核轉錄因子表達的調節(jié)作用

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【摘要】：目的:HPV感染是子宮頸癌發(fā)生的主要病因但并非唯一因素。近年來研究發(fā)現(xiàn),絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信號通路在細胞惡性轉化和腫瘤浸潤轉移過程中起著重要作用。細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)作為MAPK家族的主要成員,可通過一系列級聯(lián)轉導系統(tǒng)將信號由細胞外傳導進入細胞核并且磷酸化多種核轉錄因子,促進相關癌基因的表達。研究顯示,在子宮頸癌中,ERK的表達率隨著宮頸病變的加重呈增高趨勢,但其機制不明。本研究通過細胞實驗研究方法,旨在探討ERK在子宮頸癌細胞中對核轉錄因子的調控作用以及對子宮頸癌細胞生物學功能的影響,進而解釋ERK在子宮頸癌發(fā)生中的可能機制。方法:選取HPV16陽性的Siha和HPV陰性的C33A子宮頸癌細胞進行傳代培養(yǎng),向兩種細胞施加抑制劑U0126,建立ERK抑制體系,形成對照組和干預組。采用活細胞計數(shù)法檢測細胞生長情況;采用CCK-8法檢測細胞活性;采用流式細胞術檢測細胞周期及凋亡情況;采用實時熒光定量PCR(Real-time PCR)法和Western-blot法檢測相關核轉錄因子的m RNA及蛋白的表達情況表達水平;數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。結果:1、Siha和C33A子宮頸癌細胞一般生物學特征的比較:除24小時外,兩種細胞數(shù)在其他時間點的差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);Siha細胞增殖指數(shù)(PI)高于C33A細胞(t=5.342,P0.001);C33A細胞凋亡率高于Siha細胞(t=-2.986,P=0.024)。2、Siha和C33A子宮頸癌細胞ERK1/2、hn RNP E1、c-Fos、c-Jun的表達:(1)Siha細胞ERK1 m RNA相對表達量明顯低于C33A細胞(t=-17.489,P0.001),Siha細胞ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表達水平均高于C33A細胞(ERK1/2:t=16.309,P0.001;p-ERK1/2:t=4.776,P=0.028)。(2)Siha細胞hn RNP E1 m RNA相對表達量高于C33A細胞(t=3.376,P0.001);Siha細胞hn RNP E1蛋白相對表達量高于C33A細胞(t=4.821,P0.001)。(3)Siha細胞c-Fos m RNA相對表達量高于C33A細胞(t=3.590,P=0.013),Siha細胞c-Fos蛋白表達水平低于C33A細胞(t=-1.337,P=0.184);Siha細胞p-c-Fos蛋白表達水平高于C33A細胞(t=3.029,P=0.004)。(4)c-Jun基因m RNA及蛋白表達比較:Siha細胞的c-Jun m RNA相對表達量高于C33A細胞(t=4.713,P0.001);Siha細胞p-c-Jun蛋白表達水平高于C33A細胞(t=10.209,P0.001)。3、ERK對Siha和C33A子宮頸癌細胞一般生物學特征的影響:(1)ERK抑制效果評價:C33A細胞ERK2 m RNA的抑制率為56.89±3.08%,高于Siha細胞的54.08±4.05%,但差異無統(tǒng)計學意義(t=1.004,P=0.107),C33A細胞ERK1/2蛋白的抑制率為63.16±7.24%,高于Siha細胞的51.32±6.51%,差異有統(tǒng)計學意義(t=-4.281,P=0.007),兩種細胞均達到了較好的抑制效果。(2)與對照組相比,兩種細胞干預組的增殖指數(shù)均降低(Siha:t=6.863,P0.001;C33A:t=7.092,P0.001),Siha細胞干預組增殖指數(shù)高于C33A細胞干預組(t=7.066,P0.001)。(3)與對照組相比,兩種細胞干預組的凋亡率均增加,(Siha:t=-5.201,P=0.006;C33A:t=-4.335,P=0.005);C33A細胞干預組凋亡率高于Siha細胞干預組,但差異無統(tǒng)計學意義(t=-2.431,P=0.057)。4、ERK對Siha和C33A子宮頸癌細胞hn RNP E1、c-Fos、c-Jun表達的影響:(1)與對照組相比,Siha細胞干預組hn RNP E1 m RNA相對表達量降低(t=2.407,P0.001),Siha細胞hn RNP E1 m RNA的抑制率高于C33A細胞(t=-12.073,P0.001);Siha細胞干預組hn RNP E1蛋白表達水平低于對照組(t=2.539,P=0.004),Siha細胞干預組與C33A細胞干預組hn RNP E1蛋白表達水平的差異有統(tǒng)計學意義(t=2.132,P=0.017),Siha細胞hn RNP E1蛋白的抑制率高于C33A細胞(t=2.967,P=0.039)。(2)與對照組相比,Siha細胞干預組c-Fos m RNA相對表達量降低(t=4.129,P0.001),Siha細胞c-Fos m RNA的抑制率高于C33A細胞(t=14.697,P0.001);與對照組相比,兩種細胞干預組p-c-Fos蛋白表達水平均降低(Siha:t=2.753,P=0.038;C33A:t=2.547,P=0.041);Siha細胞干預組p-c-Fos蛋白表達水平高于C33A細胞干預組(t=2.910,P0.001)。(3)與對照組相比,Siha細胞干預組c-Jun m RNA相對表達量降低(t=4.037,P0.001),Siha細胞c-Jun m RNA的抑制率高于C33A細胞(t=9.260,P0.001);Siha細胞干預組c-Jun蛋白表達水平降低(t=2.059,P=0.017);Siha細胞干預組c-Jun蛋白表達水平低于C33A細胞干預組(t=-2.917,P0.001);與對照組相比,Siha細胞干預組p-c-Jun蛋白表達水平降低(t=4.209,P0.001);Siha細胞干預組p-c-Jun蛋白表達水平高于C33A細胞干預組(t=3.106,P=0.002),Siha細胞p-c-Jun蛋白的抑制率高于C33A細胞(t=11.734,P0.001)。結論:1、ERK的活化可以降低子宮頸癌細胞的凋亡,有促進其增殖分化作用,ERK的活化和HPV感染在促子宮頸癌細胞生長過程中可能存在協(xié)同作用。2、ERK可以上調子宮頸癌細胞中hn RNP E1的表達,進而促進子宮頸癌細胞生長,HPV感染可能協(xié)同參與了ERK對hn RNP E1的上調作用。3、ERK可以激活c-Fos、c-Jun并促進其磷酸化,進而促進子宮頸癌細胞生長,HPV感染可能協(xié)同參與了ERK對c-Fos、c-Jun的激活。
【關鍵詞】：ERK 子宮頸癌細胞 轉錄因子 調節(jié)作用
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-13
• 前言13-16
• 1 材料與方法16-30
• 1.1 實驗材料16-20
• 1.2 實驗方法20-28
• 1.3 資料整理和分析28
• 1.4 質量控制28-30
• 2 結果30-47
• 2.1 Siha與C33A子宮頸癌細胞一般生物學特征的比較30-32
• 2.2 Siha與C33A子宮頸癌細胞核轉錄因子的表達32-34
• 2.3 ERK抑制體系的建立34-37
• 2.4 ERK 對兩種子宮頸癌細胞生物學功能及核轉錄因子表達的影響37-47
• 3 討論47-51
• 3.1 ERK對子宮頸癌細胞生物學特征的影響47-48
• 3.2 ERK對子宮頸癌細胞hnRNP E1 表達的影響48-49
• 3.3 ERK對子宮頸癌細胞c-Fos、c-Jun表達的影響49-51
• 4 結論51-52
• 參考文獻52-56
• 綜述56-65
• 參考文獻60-65
• 致謝65-66
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果66-67
• 個人簡歷67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：931957