本文關(guān)鍵詞：小鼠皮膚黑色素瘤微環(huán)境內(nèi)源性電場(chǎng)及離子流研究

  更多相關(guān)文章： 黑色素瘤 微環(huán)境 內(nèi)源性電場(chǎng) 離子流 細(xì)胞遷移

【摘要】：研究背景電場(chǎng)作為一個(gè)重要的信號(hào),可指導(dǎo)細(xì)胞的遷移、促進(jìn)細(xì)胞增殖以及誘導(dǎo)細(xì)胞的定向排列。有著豐富的離子通道存在于腫瘤細(xì)胞膜上,離子通過(guò)離子通道進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn),產(chǎn)生電勢(shì)梯度,從而形成腫瘤組織的內(nèi)源性電場(chǎng)。許多實(shí)驗(yàn)研究表明腫瘤微環(huán)境中內(nèi)源性電場(chǎng)異常,這種電信號(hào)可能是腫瘤發(fā)生、發(fā)展及惡性轉(zhuǎn)移的重要微環(huán)境信號(hào)之一。本實(shí)驗(yàn)以小鼠皮膚黑色素瘤為模型,應(yīng)用掃描微振動(dòng)電極技術(shù)研究腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,腫瘤組織周圍的內(nèi)源性電場(chǎng)變化;應(yīng)用選擇性離子電極技術(shù)研究導(dǎo)致生物電變化的內(nèi)在離子流(鈉、氯、鉀、鈣離子)變化;同時(shí),以小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞B16-F10為模型,研究腫瘤細(xì)胞對(duì)電場(chǎng)的反應(yīng)以及電場(chǎng)對(duì)腫瘤細(xì)胞定向遷移的影響。為應(yīng)用生物電原理揭示腫瘤發(fā)生發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果1)與正常皮膚組織相比較,腫瘤組織周圍內(nèi)源性電場(chǎng)異常。接種6天時(shí),腫瘤組織的電流值達(dá)到-5.57±1.10μA/cm2(n=3);接種9天時(shí),腫瘤組織的電流值達(dá)到-7.17±1.85μA/cm2(n=3),與正常皮膚電流相比較電流方向均相反。2)與正常皮膚組織相比較,腫瘤組織周圍的鈉、氯、鉀離子流異常。a.垂直腫瘤組織方向,鈉離子流(-3700.39±889.63pmol/cm~(-2)/sec,n=3)、氯離子流(-9305.68±1449.91pmol/cm~(-2)/sec,n=4)、鉀離子流(274.86±55.32 pmol/cm~(-2)/sec,n=3)與正常皮膚各離子流方向相反,且顯著高于正常皮膚。鈣離子流(-13.12±6.67pmol/cm~(-2)/sec,n=4)無(wú)顯著差異b.腫瘤邊緣水平方向,鈉離子流(-1913.51±500.64 pmol/cm~(-2)/sec,n=4)、氯離子流(-11004.39±2643.16pmol/cm~(-2)/sec,n=3)、鉀離子流(321.17±98.78pmol/cm~(-2)/sec,n=3)與正常皮膚各離子流方向相反,顯著高于正常皮膚。鈣離子流(-20.05±6.73pmol/cm~(-2)/sec,n=3)無(wú)顯著差異。3)在200mV/mm~500mV/mm電壓強(qiáng)度范圍內(nèi),外加直流電場(chǎng)能夠指導(dǎo)小鼠黑色素瘤細(xì)胞向電場(chǎng)的負(fù)極定向遷移。a.細(xì)胞趨電方向性(Directedness)隨電壓增加逐漸增強(qiáng)(從-0.307±0.055一直增加到-0.616±0.045;n≥140),表現(xiàn)出電壓依賴性。b.在200~400mV/mm范圍內(nèi),細(xì)胞軌跡速度、位移速度及方向持續(xù)性隨電壓增加而增強(qiáng);在500mV/mm電壓下,以上參數(shù)開(kāi)始減弱。結(jié)論腫瘤組織微環(huán)境中的生物電異常,鈉離子流、氯離子流和鉀離子流是腫瘤組織微環(huán)境內(nèi)源性電場(chǎng)異常的主要貢獻(xiàn)者。體外模擬實(shí)驗(yàn)表明,生理大小的微直流電場(chǎng)能夠指導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向電場(chǎng)負(fù)極定向遷移,并且在一定電壓強(qiáng)度的范圍內(nèi),細(xì)胞遷移的速度(包括位移速度、軌跡速度)、遷移方向上的持續(xù)性、遷移的方向均隨著電壓強(qiáng)度的增大而增大。
【關(guān)鍵詞】：黑色素瘤 微環(huán)境 內(nèi)源性電場(chǎng) 離子流 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：云南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮略表7-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 腫瘤微環(huán)境12-14
• 1.1.1 生物因子12-13
• 1.1.2 化學(xué)因子13
• 1.1.3 物理因子13-14
• 1.2 內(nèi)源性電場(chǎng)14-15
• 1.2.1 內(nèi)源性電場(chǎng)的發(fā)現(xiàn)14
• 1.2.2 內(nèi)源性電場(chǎng)產(chǎn)生的原理14-15
• 1.3 腫瘤微環(huán)境中的內(nèi)源性電場(chǎng)15-17
• 1.4 腫瘤微環(huán)境內(nèi)源性電場(chǎng)與離子通道17-20
• 1.4.1 鈉離子通道18-19
• 1.4.2 氯離子通道19
• 1.4.3 鉀離子通道19
• 1.4.4 鈣離子通道19-20
• 1.5 研究目的及意義20-21
• 1.5.1 研究目的20
• 1.5.2 研究意義20-21
• 1.6 研究?jī)?nèi)容和方法21-22
• 1.6.1 研究?jī)?nèi)容21
• 1.6.2 實(shí)驗(yàn)方案21-22
• 第2章 小鼠皮膚黑色素瘤模型的建立22-28
• 2.1 引言22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器設(shè)備23-24
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料23
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑23
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器23-24
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟24-25
• 2.3.1 B16-F10細(xì)胞的培養(yǎng)24
• 2.3.2 皮內(nèi)腫瘤模型的建立24-25
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 2.5 討論27-28
• 第3章 腫瘤組織周圍電流的測(cè)量28-34
• 3.1 引言28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器設(shè)備28-29
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料28
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑28-29
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備29
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟29-32
• 3.3.1 接地電極和參比電極的鉑化29-30
• 3.3.2 掃描振動(dòng)電極的鉑化30
• 3.3.3 電極的校正30-31
• 3.3.4 腫瘤電流的測(cè)量31-32
• 3.3.5 數(shù)據(jù)處理32
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 3.5 討論33-34
• 第4章 腫瘤邊緣離子流的測(cè)量34-44
• 4.1 引言34
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器設(shè)備34-36
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑35
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備35-36
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟36-39
• 4.3.1 電極的制備36-37
• 4.3.2 選擇性離子電極的校正37-38
• 4.3.3 腫瘤周圍離子流的測(cè)量38
• 4.3.4 數(shù)據(jù)輸出及換算38-39
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-42
• 4.4.1 腫瘤邊緣的鈉離子流39-40
• 4.4.2 腫瘤邊緣的氯離子流40-41
• 4.4.3 腫瘤邊緣的鉀離子流41
• 4.4.4 腫瘤邊緣的鈣離子流41-42
• 4.5 討論42-44
• 第5章 小鼠黑色素瘤細(xì)胞的趨電性44-56
• 5.1 引言44
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器設(shè)備44-46
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料44-45
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑45
• 5.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器45-46
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟46-50
• 5.3.1 B16-F10細(xì)胞實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備46-47
• 5.3.2 電場(chǎng)實(shí)驗(yàn)47-49
• 5.3.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理49-50
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-54
• 5.4.1 細(xì)胞在不同電壓強(qiáng)度下均向負(fù)極遷移50-51
• 5.4.2 細(xì)胞在微直流電場(chǎng)下的遷移51-54
• 5.5 討論54-56
• 結(jié)論56-57
• 創(chuàng)新點(diǎn)與展望57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和研究成果64-65
• 致謝65

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5 記者 張e，

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