本文關(guān)鍵詞：Disulfiram聯(lián)合Cu通過上調(diào)TNF-a表達及蓄積ROS誘導(dǎo)白血病干細胞凋亡

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【摘要】：背景：急性髓細胞白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)是一種在形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)及表觀遺傳學(xué)上具有異質(zhì)性的疾病,主要特點是原始及幼稚髓系白血病細胞在骨髓及外周血不斷的蓄積,是成人急性白血病(acute leukemia, AL)中最常見的一種類型。美國腫瘤協(xié)會2014年發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示在美國每年有大約1.88萬初發(fā)AML病例出現(xiàn),而死亡人數(shù)高達1萬以上,排在腫瘤相關(guān)死亡疾病的第六位,目前AML的治療對血液科及腫瘤科醫(yī)生來說仍然是的一個比較大的挑戰(zhàn)。雖然,不斷有新的化療藥物出現(xiàn),化療方案也不斷優(yōu)化及改進,疾病的緩解率也在不斷提高,但是病人的預(yù)后還是不容樂觀,良好核型患者的10年總體生存率(overall survival,OS)為550%～80%,中危核型及高危核型的患者的10年OS分別為30%～40%和8%-20%,難治和復(fù)發(fā)仍然是影響AML患者預(yù)后的最重要的因素。目前研究表明,白血病細胞是來源于白血病干細胞(leukemia stem cells, LSC),這群細胞只占白血病細胞中很少的比例,但這一小群細胞具有自我更新、不斷的生長及向成熟白血病細胞分化的能力,能夠維持著白血病的原始/幼稚特性,并且LSC大部分處于細胞周期中的G0/1期(靜止期),生存信號通路表達異常,這使得它們對那些針對細胞快速增殖的傳統(tǒng)化療藥物不敏感,這也就是AML難治復(fù)發(fā)的根源。過去十幾年,在明確及理解LSC的生物學(xué)特性的研究方面已經(jīng)取得了有了長足的進步,但是特異性的靶向殺傷LSC而不影響正常的造血干細胞(hematopoietic stem cell,HSC)依然是一個艱巨的任務(wù)。因此,開發(fā)一類只針對LSC而不影響正常HSC的靶向藥物是我們未來實現(xiàn)清除LSC治愈AML這一終極目標之前的挑戰(zhàn)及方向,也是AML最根本、最有效的治療策略。雙硫侖(Disulfiram, DS)是二硫代氨基甲酸酯(DDTC)家族的成員之一,在臨床上作為常用的抗酗酒藥物已經(jīng)有60多年的歷史了,具有螯合金屬離子的能力,例如銅、鋅等金屬離子,并且能夠與巰基基團和谷胱甘肽反應(yīng)。DS抗酗酒的原理主要是其不可逆的抑制乙醛脫氫酶(ALDH)的活性,造成乙醛代謝障礙而在體內(nèi)蓄積,從而造成酗酒者惡心、嘔吐、頭痛等不適癥狀。從上世紀70年代開始多個實驗顯示DS和它的代謝物能夠增強某些腫瘤的化療效果(Lewisonl977),而且不論在體外實驗還是臨床實驗都證明它是一種可靠的抗腫瘤藥。Lewison是最先報道DS具有抗乳腺癌的活性,并且成功的對64例高危的乳腺癌進行了Ⅱ期臨床試驗及應(yīng)用于肝轉(zhuǎn)移癌和Ⅳ期的轉(zhuǎn)移性眼黑色素瘤患者。最近,正在進行兩個DS的臨床試驗：DS作為輔助藥物(Clinical-Trials.gov Identifier NCT00312819)和DS聯(lián)合葡萄糖酸銅(ClinicalTrials.gov IdentifierNCT00742911)治療晚期實體腫瘤。但是,DS的抗腫瘤機制仍然不明確,目前認為它抗腫瘤的機制主要為：1)DS聯(lián)合Cu形成復(fù)合物,在體內(nèi)體外實驗中對多種腫瘤具有強烈的抑制蛋白酶體及誘導(dǎo)凋亡活性；2)DS能夠阻斷p-gp膜泵的突變,逆轉(zhuǎn)腫瘤對化療藥物的耐藥性；3)能夠抑制NF-κB的持續(xù)激活；4)在體內(nèi)能夠減少血管生成及降低腫瘤生長,抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的活性及腫瘤細胞的浸潤；5)DS能夠增加線粒體膜的通透性,與Zn/Cu形成復(fù)合物,進而抑制Zn依賴性的MMP及Cu/Zn超氧岐化酶(SOD1)活性,減少超氧根離子歧化形成H202,改變細胞的氧化還原狀態(tài)而促進細胞的凋亡。我們前期研究發(fā)現(xiàn)了DS/Cu能夠通過JNK通路逆轉(zhuǎn)急性髓系白血病細胞HL-60耐藥細胞株對多柔比星的耐藥,我們還發(fā)現(xiàn)DS及DS/Cu能抑制急性髓系白血病干細胞(LSC)、急性T淋巴細胞白血病Molt4細胞和淋巴瘤Raji細胞增殖及誘導(dǎo)其凋亡,其機制可能與抑偉NF-κB活性及及調(diào)節(jié)細胞氧化應(yīng)激反應(yīng)增加細胞內(nèi)活性氧(ROS)有關(guān)。但DS/Cu是否具有殺傷LSC及相關(guān)機制及上游通路仍需要進一步明確�；钚匝�(Reactive oxygen species, ROS)是在細胞氧化代謝過程中不可避免產(chǎn)生的自然產(chǎn)物,它主要包括有非自由基(如H2O2)和自由基(羥基和超氧化合物),由于ROS具有高度的活性屬性,這樣可能會造成細胞內(nèi)DNA、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)的過氧化破壞,而在正常生理狀態(tài)下,細胞可以利用細胞內(nèi)的抗氧化及防御系統(tǒng)抵御這些有毒產(chǎn)物對自身的傷害,從而保持細胞氧化還原穩(wěn)態(tài)的穩(wěn)定。然而,當(dāng)細胞內(nèi)ROS水平變化巨大時,打破了這種氧化還原狀態(tài)的穩(wěn)定,短時間急劇升高的ROS能夠誘導(dǎo)細胞的凋亡。目前研究顯示,誘導(dǎo)細胞內(nèi)ROS蓄積無疑能夠?qū)е露喾N細胞凋亡,并且能夠特異性靶向殺傷一些腫瘤細胞。研究表明,ROS可以影響涉及介導(dǎo)增殖或凋亡的信號通路,例如MAPKs、p53,、AP-1及NF-kB等信號通路。Trachootham等發(fā)現(xiàn),當(dāng)存在氧化應(yīng)激的情況下,腫瘤細胞內(nèi)的ROS水平變化幅度比非腫瘤細胞的明顯要大,同時也發(fā)現(xiàn)了應(yīng)用促氧化齊PEITC能夠促進CLL腫瘤細胞內(nèi)的ROS大幅增加到突破細胞存活的閾值水平,從而誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡,而對正常的淋巴細胞沒有影響。最近Lagadinou等人也發(fā)現(xiàn),一群較低水平ROS的白血病細胞具有AML干細胞特性,而且這群細胞高表達BCL-2,予以ABT-263抑制BCL-2活性后可以減弱細胞線粒體途徑的的氧化磷酸化,這群低水平ROS細胞體內(nèi)的ROS明顯蓄積,細胞凋亡也明顯增加,對于正常的HSC卻無明顯影響,這可以說明調(diào)節(jié)細胞氧化應(yīng)激可能是靶向殺傷白血病干細胞的一個良好位點,而ROS無疑是調(diào)節(jié)這一過程的理想的靶點。腫瘤壞死因子(tumor necrosises factor-alpha, TNF-α)是一個具有強勁促炎作用的細胞因子,對多種細胞功能的調(diào)節(jié)具有多效性,對細胞的增殖、分化及凋亡等一系列的細胞生命活動過程具有重要的調(diào)節(jié)作用。已經(jīng)清楚的知道了TNF-α在炎癥及休克狀態(tài)中的重要病理生理作用,而這個過程中內(nèi)皮細胞是它首要的靶向細胞。有研究報道TNF-α能夠增加細胞內(nèi)ROS含量,也能上調(diào)細胞漿膜NADPH氧化酶及脂氧化酶的表達水平,而且TNF-α能夠觸發(fā)ROS產(chǎn)生伴隨細胞毒作用及細胞死亡,在這些研究中,TNF-α誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生主要來源于線粒體。在急性白血病細胞中,TNF-α能夠通過抑制NF-kB通路誘導(dǎo)細胞凋亡,這其中也涉及了ROS的產(chǎn)生及激活JNK通路。因此,TNF-a可能是抗腫瘤藥物在誘導(dǎo)ROS蓄積殺傷腫瘤細胞過程中重要的細胞因子。近幾十年在研究及治療腫瘤的過程中,開發(fā)新藥一直是科研的熱點,然而開發(fā)一類新藥成功幾率較低,而且將會耗費大量的人力、經(jīng)費,而且藥物真正運用到臨床可能需要多年的臨床試驗驗證,這有將耗費大量時間。因此,在開發(fā)新藥存在各種缺點時,大量的科研工作者將目光投入到“老藥新用”的科研思路上,尤其運用廉價易得、安全無毒或低毒的老藥治療腫瘤是目前藥物開發(fā)的一條可行性捷徑。Ds可以抑制醛脫氫酶在臨床上作為抗酗酒藥物已經(jīng)有60多年歷史,毒副作用小且價格低廉易得,同時也是一類金屬螯合劑,能夠結(jié)合銅(Cu)并轉(zhuǎn)運入細胞內(nèi)。最近多個學(xué)者關(guān)注DS并應(yīng)用于腫瘤的治療,研究顯示DS聯(lián)合Cu (DS/Cu)對黑色素瘤、間質(zhì)瘤、肺癌等實體腫瘤細胞及白血病細胞具有細胞毒作用以及對傳統(tǒng)化療藥具有增敏作用,同時也發(fā)現(xiàn)DS對膠質(zhì)瘤、乳腺癌等一些實體腫瘤干細胞具有細胞毒性作用。我們課題組前期工作已經(jīng)發(fā)現(xiàn)DS能夠增強AML耐藥株對化療藥物的敏感性,我們還發(fā)現(xiàn)DS/Cu可以增加白血病細胞內(nèi)ROS含量激活JUK及MAPK通路以及抑制NF-kB通路誘導(dǎo)急性髓系白血病(AML)干細胞細胞凋亡。為了進一步驗證DS/Cu是否能夠誘導(dǎo)AML干細胞凋亡及分子機制,本實驗以分選的CD34+CD38-KG1α細胞作為AML干細胞,研究DS/Cu能否誘導(dǎo)AML干細胞凋亡及其分子機制,為DS/Cu在白血病治療方面提供更多的科學(xué)依據(jù)。研究目的：本課題建立CD34+CD38-KG1α細胞的AML干細胞模型,明確Disulfiram(DS)單藥及DS聯(lián)合Cu離子(DS/Cu)在體外誘導(dǎo)AML干細胞凋亡,并從ROS蓄積的角度出發(fā),進一步探討引起ROS上調(diào)的上游分子機制。研究方法：1、應(yīng)用磁珠分選術(shù)分選出人急性髓系白血病細胞株KGla細胞；2、Annexin-V標記,流式細胞術(shù)檢測DS(5μM)及DS/Cu (5μM/0.5μM)對CD34+CD38-KG1α細胞的誘導(dǎo)凋亡作用,并比較與對照組Control之間的關(guān)系；3、利用DCFA-DA法,流式細胞術(shù)檢測DS及DS/Cu作用24h后CD34+CD38-KG1α細胞中ROS水平的變化,比較各組之間ROS變化率(ROS變化率=測試組/空白對照組)的差別；4、利用Annexin-V標記,流式細胞術(shù)檢測DS/Cu聯(lián)合ROS清除劑NAC(10mM)后的對CD34+CD38-KG1α細胞的誘導(dǎo)凋亡能力,并比較其與DS/Cu誘導(dǎo)凋亡能力的差異；5、利用實時熒光定量PCR法檢測空白對照、DS(5μM)、DS/Cu5μM/0.5μM)及DS/Cu+NAC5μM/0.5Mm/10Mm)處理CD34+CD38-KG1α細胞24h后TNF-α、 CD40、TNFRSF11B、TNFRSF1B、HRK等凋亡基因表達的變化,采用2-Act法對PCR結(jié)果進行計算,分析各種不同處理組上述基因的mRNA表達變化。6、利用Western Blot法檢測空白對照、DS、DS/Cu及DS/Cu+NAC處理CD34+CD38-KG1α細胞24h后TNF-α蛋白水平,并比較各組之間TNF-α蛋白表達量的變化。7、利用DCFA-DA法,流式細胞術(shù)檢測Control、DS/Cu、TNF-α mAb(2μg/mL)、TNF-α mAb(2μg/mL)+DS/Cu、IgG(2μg/mL)及IgG(2μg/mL)+DS/Cu作用24h后CD34+CD38-KG1α細胞中ROS水平的變化,比較各組之間ROS變化率的差別；8、利用Annexin-V標記,流式細胞術(shù)檢測Control、DS/Cu、TNF-α mAb(2μg/mL)、TNF-α mAb(2μg/mL)聯(lián)合DS/Cu、IgG(2μg/mL)及IgG(2μg/mL)聯(lián)合DS/Cu作用24h后對CD34+CD38-KG1α細胞的誘導(dǎo)凋亡能力,并比較Control、TNF-α mAb、IgG組之間的凋亡差別及Control、DS/Cu、TNF-α mAb+DS/Cu、IgG+DS/Cu組之間的凋亡差別；9、采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料用M±S表示,兩組間均數(shù)的比較使用兩獨立樣本t檢驗方法；多組間均數(shù)比較使用單因素方差分析方法進行統(tǒng)計,在方差分析顯著的情況下采用LSD方法(方差齊性分析)進行多重比較,方差不齊情況下采用近似F檢驗代替方差分析后采用Dunnett's T3方法進行多重比較(檢驗水準為α=0.05,雙側(cè)檢驗,NS代表無統(tǒng)計學(xué)意義,*代表P0.05,**代表P≤0.01,***代表P≤0.001)。研究結(jié)果：1、AML干細胞模型建立。采用抗人CD34-APC、CD38-PE雙抗標記,流式細胞術(shù)檢測具有干細胞特性的CD34+CD38-亞群細胞比例,分選前CD34+CD38-亞群細胞占KG1α細胞比例為(64.73±2.01)%,經(jīng)MACS分選后CD34+CD38-KG1 α細胞比例為(95.37±1.84)%。2、DS及DS/Cu均能誘導(dǎo)AML干細胞的凋亡。設(shè)置空白對照、DS單藥(5μmol/L)、DS/Cu (5 μmol/L/0.5 μmol/L)3組,各組藥物處理CD34+CD38-KG1α 24h后,流式細胞術(shù)檢測凋亡細胞比例,結(jié)果顯示空白對照組、DS單藥組及DS/Cu組凋亡細胞比例分別為(6.65±0.64)%、(11.87±1.30)%和(27.43±1.65)%,DS單藥組和DS/Cu組誘導(dǎo)AML干細胞凋亡的比例明顯高于空白對照組(P=0.008和P=0.001),此外,DS/Cu組誘導(dǎo)AML干細胞凋亡的比例也顯著高于DS單藥組(P0.001)。根據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果顯示,我們可以認為DS、DS/Cu均可以誘導(dǎo)細胞的凋亡,但聯(lián)合Cu后可以明顯增強DS誘導(dǎo)細胞凋亡能力。3、DS及DS/Cu均能使AML干細胞內(nèi)ROS蓄積。設(shè)置空白對照、DS單藥(5μmol/L)、DS/Cu (5μmol/L/0.5μmol/L) 3組,各組藥物處理CD34+CD38-KG1α 24h后,流式細胞術(shù)檢測ROS水平。結(jié)果顯示空白對照組、DS單藥組及DS/Cu組ROS水平分別為(359.67±32.50)、(497.38±36.85)、(1008.93±83.72),DS單藥組及DS/Cu組ROS水平較空白對照組上升了(1.39±0.12)倍、(2.81±0.11)倍(P=0.028和P=0.001)；并且DS單藥組與DS/Cu組ROS變化率也有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001)。以上統(tǒng)計分析表明,DS、DS/Cu組均能誘導(dǎo)AML干細胞ROS蓄積,但DS/Cu誘導(dǎo)能力顯著高于DS單藥組。4、NAC清除ROS蓄積可以抑制DS/Cu誘導(dǎo)的AML干細胞凋亡。設(shè)置DS/Cu (5μmol/L/0.5μmol/L)、DS/Cu+NAC (5μmol/L/0.5μmol/L/10m mol/L)2組,各組藥物處理CD34+CD38-KG1α24h后,流式細胞術(shù)檢測凋亡細胞比例及ROS水平。結(jié)果顯示DS/Cu組及DS/Cu+NAC組ROS水平分別為(1008.93±83.72)、(413.95+70.90),統(tǒng)計學(xué)具有明顯差異(P=0.001),細胞凋亡比例分別為(27.43±1.65)%、(12.37±0.85)%,統(tǒng)計學(xué)同樣具有明顯差異(P=0.001)。以上結(jié)果分析表明,加入ROS清除劑NAC后可以挽救DS/Cu引起的細胞凋亡,說明ROS是造成細胞凋亡的重要因素。5、TNF-α是DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞ROS蓄積的上游基因。設(shè)置空白對照、DS單藥(5μmol/L)、DS/Cu (5μmol/L/0.5μmol/L)及DS/Cu+NAC (5μ mol/L/0.5 μ mol/L/10m mol/L) 4組,上述各組藥物處理CD34+CD38-KG1α24h后,qRT-PCR驗證與調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)的基因TNF-α、CD40、TNFRSF11B、TNFRSF1B、HRK的mRNA水平,結(jié)果顯示DS組及DS/Cu組相比于空白對照組能上調(diào)上述基因(P0.05),且DS/Cu組較DS組上調(diào)更明顯(P0.05),予以NAC抑制ROS蓄積挽救細胞凋亡后,相比于DS/Cu組,在DS/Cu+NAC組中TNF-α依然高表達(P=0.726),而CD40、TNFRSF11B、TNFRSF1B、HRK基因水平明顯下調(diào)(P0.05)；Western blot檢測細胞內(nèi)TNF-α的表達,結(jié)果同樣顯示DS組及DS/Cu組均可明顯上調(diào)TNF-α蛋白表達水平,其中聯(lián)合組上調(diào)更明顯；加入ROS抑制劑NAC后不能抑制DS/Cu引起的TNF-α表達水平的上調(diào)。以上結(jié)果表明,TNF-α是DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞ROS蓄積的上游分子,而CD40、TNFRSF11B、TNFRSF1B、HRK的表達受ROS的水平調(diào)控。6、中和TNF-α可以抑制DS/Cu誘導(dǎo)的AML干細胞ROS的蓄積。先予以中和抗體TNF-α mAb(2μg/ml)及對照抗體IgG(2μg/ml)預(yù)處理CD34+CD38-KG1α細胞2h,設(shè)置空白對照組、DS/Cu組、TNF-a mAb組、TNF-a mAb+DS/Cu組、IgG組、IgG+DS/Cu組(DS、Cu溶度同前),不同處理作用CD34+CD38-KG1α細胞24h,流式細胞術(shù)檢測各組細胞ROS水平,結(jié)果顯示6組細胞ROS水平依次為(355.33±35.23)、(985.33±120.97)、(280.00±23.07)、(451.33+44.66)(328.00±30.27)、(1145.33±59.50),DS/Cu、TNF-α mAb組、TNF-α mAb+DS/Cu組、IgG組、IgG+DS/Cu組的ROS變化率分別為2.78±0.25、0.82±0.14、1.28±0.18、0.93+0.16、3.25±0.49,結(jié)果顯示TNF-α mAb+DS/Cu組相比DS/Cu的ROS變化比率由2.78±0.25倍下降到1.28±0.17倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001),而IgG+DS/Cu組相比DS/Cu組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.23),并且TNF-α mAb及IgG組相比空白對照組的ROS水平也無顯著性差異(P=0.09和P=0.50)。以上統(tǒng)計分析表明,中和抗體TNF-α mAb及對照抗體IgG對AML干細胞ROS的蓄積無明顯影響,但是TNF-α mAb能夠抑制DS/Cu誘導(dǎo)的ROS蓄積,而IgG對DS/Cu誘導(dǎo)ROS蓄積無影響。7、中和TNF-α可以挽救DS/Cu誘導(dǎo)的AML干細胞凋亡。先予以中和抗體TNF-α mAb及對照抗體IgG預(yù)處理CD34+CD38-KG1α細胞2h,設(shè)置空白對照組、DS/Cu組、TNF-α mAb組、TNF-α mAb+DS/Cu組、IgG組、IgG+DS/Cu組(溶度同前),不同處理作用CD34+CD38-KG1α細胞24h,流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡水平,結(jié)果顯示6組細胞凋亡率分別為(5.74+0.91)%、(27.0±2.33)%、(6.08±1.01)%、(12.17±0.91)%、(7.57+0.84)%、(24.17±2.03)%,TNF-α mAb、IgG組與Control的細胞凋亡率無顯著性的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.69,P=0.063),TNF-α mAb+DS/Cu組較DS/Cu的細胞凋亡率明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.004),而IgG+DS/Cu與DS/Cu組比較無顯著性差異(P=0.188)。以上結(jié)果統(tǒng)計分析表明,抗體本身對細胞的凋亡無明顯影響,而抗體中和TNF-α后可以挽救DS/Cu誘導(dǎo)的ROS蓄積而導(dǎo)致的AML干細胞凋亡。結(jié)論：1、DS和DS/Cu均可誘導(dǎo)AML干細胞凋亡,而且DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞凋亡的能力較DS單藥顯著。2、DS/Cu可顯著提高AML干細胞內(nèi)ROS的水平,加入ROS清除劑NAC后可以顯著挽救DS/Cu誘導(dǎo)的AML干細胞的凋亡,說明細胞內(nèi)ROS的蓄積是DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞凋亡的重要因素。3、中和TNF-α后可以抑制ROS的蓄積,挽救DS/Cu誘導(dǎo)的細胞凋亡,提示DS/Cu是通過上調(diào)TOF-α表達誘導(dǎo)ROS蓄積導(dǎo)致AML干細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：Disulfiram Cu AML干細胞 CD34~+CD38~-KG1α ROS TNF-a 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-22
• 前言22-29
• 材料與方法29-43
• 第一部分：材料29-34
• 第二部分：研究方法34-43
• 結(jié)果43-58
• 一、急性髓系白血病干細胞模型的建立43-44
• 二、DS和DS/Cu可以誘導(dǎo)AML干細胞凋亡44-45
• 三、DS及DS/Cu可以使AML干細胞內(nèi)ROS蓄積45-48
• 四、ROS清除劑—NAC對DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞凋亡的影響48-50
• 五、TNF-α是DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞的ROS蓄積的上游分子50-54
• 六、中和TNF-α可以抑制DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞的ROS蓄積54-58
• 討論58-64
• (一) DS及DS/Cu能夠殺傷AML干細胞59-60
• (二) 破壞細胞內(nèi)氧化平衡是DS及DS/Cu殺傷AML干細胞的重要機制60-62
• (三) TNF-α是DS和DS/Cu誘導(dǎo)AML干細胞ROS產(chǎn)生的上游分子62-64
• 全文小結(jié)64-65
• 本研究的創(chuàng)新性65-66
• 參考文獻66-74
• 攻讀學(xué)位期間成果74-75
• 致謝75-77

【共引文獻】

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3 周勇;鐘文彬;陳凱;董慧娟;閆道廣;周淑云;徐兵;;Disulfiram聯(lián)合Cu通過上調(diào)TNF-α表達及蓄積ROS誘導(dǎo)白血病干細胞凋亡[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2015年10期

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本文編號：919944