本文關(guān)鍵詞：胰腺星狀細(xì)胞（PSCs）激活過(guò)程中類上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）機(jī)制研究

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【摘要】：背景:胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)和慢性胰腺炎(CP)以間質(zhì)中大量纖維結(jié)締組織增生為其組織學(xué)特點(diǎn),激活的胰腺星狀細(xì)胞(Pancreatic stellate cells,PSCs)則是參與間質(zhì)纖維化的主要細(xì)胞成分。然而,PSCs激活的機(jī)制現(xiàn)仍不明確。根據(jù)其激活的特點(diǎn),我們提出假設(shè),PSCs活化的核心事件是上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。目的:通過(guò)檢測(cè)PSCs激活前后的細(xì)胞功能、形態(tài)、基因表達(dá)方面的變化,闡明PSCs活化過(guò)程中是否存在類似EMT的過(guò)程,并探索其可能的分子機(jī)制。方法:通過(guò)酶消化-密度梯度離心法從Sprague-Dawley大鼠體內(nèi)提取正常靜止態(tài)PSCs,原代分離的PSCs均經(jīng)過(guò)免疫熒光染色和免疫化學(xué)染色鑒定。本研究將原代分離后培養(yǎng)40h的細(xì)胞作為靜止態(tài)PSCs,分離后10d的細(xì)胞作為激活態(tài)PSCs,分別對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和活細(xì)胞工作站檢測(cè),來(lái)評(píng)估細(xì)胞功能改變。并通過(guò)qRT-PCR和Western blotting分別檢測(cè)兩組細(xì)胞的EMT相關(guān)基因mRNA和蛋白水平表達(dá)變化。結(jié)果:每1g大鼠胰腺組織,能夠獲得的PSCs約為:4×106-7×106個(gè),經(jīng)臺(tái)酚藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞存活率約為90%左右。原代分離48h內(nèi)的PSCs定義為靜止態(tài)PSCs,細(xì)胞體積小,外觀呈圓形或多邊形,胞內(nèi)含有豐富的脂滴,可在320nm波長(zhǎng)的激發(fā)光下有短暫的自發(fā)藍(lán)綠色熒光;超過(guò)48h,細(xì)胞逐漸激活,外形呈多觸角狀,胞內(nèi)脂滴逐漸減少直至消失。與靜止態(tài)PSCs相比,激活態(tài)PSCs細(xì)胞遷移和運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)。同時(shí),上皮標(biāo)記(如E-cadherin、BMP7和Desmoplakin)表達(dá)下降,伴隨間質(zhì)標(biāo)記(如N-cadherin、Vimentin、Fibronectin1、Collagen1α1和S100A4)表達(dá)上升,且EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail與Slug也有不同程度的上調(diào)。結(jié)論:細(xì)胞遷移和運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)伴隨EMT相關(guān)基因表達(dá)改變,表明體外靜止態(tài)的大鼠PSCs活化為激活態(tài)的肌成纖維細(xì)胞樣PSCs這一過(guò)程中,發(fā)生了類似EMT的改變。此結(jié)果促使了我們更好地理解胰腺病理性纖維化的發(fā)病機(jī)制,并有望為今后診治慢性胰腺炎和胰腺癌提供有力的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：胰腺星狀細(xì)胞(PSCs) 激活 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT) 胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC) 慢性胰腺炎(CP)
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R576;R735.9
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-27
• 結(jié)果27-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 文獻(xiàn)綜述45-62
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 附錄62-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況64-65
• 致謝65

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本文編號(hào)：909947