本文關(guān)鍵詞：尼妥珠單抗對(duì)食管鱗癌ECA-109細(xì)胞放射敏感性的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:探討尼妥珠單抗對(duì)人食管癌細(xì)胞的放射增敏的作用及可能機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:1采用Western blot技術(shù)檢測(cè)人食管鱗癌細(xì)胞ECA-109、TTN、TE-1、TE-13、YES-2、EC9706和KYES-450中EGFR的表達(dá)。2將ECA-109細(xì)胞分為:空白對(duì)照組、單純照射組(4Gy照射)、單純藥物組(900n M尼妥珠單抗)、聯(lián)合組(900n M尼妥珠單抗+4Gy照射),采用Western blot技術(shù)檢測(cè)尼妥珠單抗對(duì)人食管鱗癌ECA-109細(xì)胞EGFR及p-EGFR表達(dá)影響。3采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)尼妥珠單抗(900n M)對(duì)食管癌ECA-109細(xì)胞的放射敏感性的影響。4采用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定各組細(xì)胞周期分布及凋亡率的情況。5采用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)各組食管癌ECA-109細(xì)胞核內(nèi)γH2AX焦點(diǎn)形成的變化情況。6采用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組食管癌ECA-109細(xì)胞Akt、p-Akt、DNA-PKcs、p-DNA-PKcs、γH2AX蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1不同食管癌細(xì)胞株中EGFR蛋白的表達(dá)Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:七種食管癌細(xì)胞株ECA-109、TTN、TE-1、TE-13、YES-2、EC9706和KYES-450細(xì)胞均表達(dá)EGFR,七組之間總體EGFR表達(dá)水平差別有顯著性意義(F=10.00,P0.05),ECA-109細(xì)胞中EGFR的表達(dá)水平最高。其次為T(mén)E-13。YES-2、EC9706和KYES-450之間EGFR的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2尼妥珠單抗對(duì)人食管鱗癌ECA-109細(xì)胞EGFR及p-EGFR表達(dá)影響結(jié)果Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:各組細(xì)胞EGFR的表達(dá)水平無(wú)顯著性差異(P0.05)。照射組p-EGFR的表達(dá)水平較空白對(duì)照組明顯升高(P0.05);與照射組和藥物組比較,聯(lián)合組的p-EGFR的表達(dá)水平明顯降低(P0.05)。3尼妥珠單抗對(duì)人食管鱗癌ECA-109細(xì)胞放射敏感性的影響克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:根據(jù)放射敏感性參數(shù)分析,與對(duì)照組比較,聯(lián)合組細(xì)胞的D0、Dq、N和SF2值明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);放射增敏比為1.35。4尼妥珠單抗對(duì)人食管鱗癌ECA-109細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡的影響流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:藥物組細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的G0/G1期阻滯,G0/G1期細(xì)胞比例明顯升高,G2/M期也升高,與空白對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與藥物組相比,照射組細(xì)胞G0/G1期比例降低,G2/M期升高,聯(lián)合組細(xì)胞G2/M期阻滯最為明顯,所占比例達(dá)到(30.28±2.23)%。凋亡結(jié)果顯示:空白對(duì)照組、照射組、藥物組和聯(lián)合組的凋亡率為:(2.76±0.23)%、(19.75±1.11)%、(9.54±0.52)%、和(41.31±1.52)%。組間比較差別有顯著性意義(F=368.5,P0.05)照射組ECA-109細(xì)胞凋亡率高于藥物組;聯(lián)合組ECA-109細(xì)胞凋亡率大于照射組和藥物組作用之和。5尼妥珠單抗對(duì)人食管鱗癌ECA-109細(xì)胞放射敏感性機(jī)制研究5.1激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)γH2AX焦點(diǎn)結(jié)果顯示:激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察各組細(xì)胞核內(nèi)γH2AX焦點(diǎn)情況,紅紫色亮點(diǎn)為γH2AX焦點(diǎn)。照射組γH2AX的焦點(diǎn)明顯高于藥物組(P0.05);聯(lián)合組與照射組和藥物組比較γH2AX焦點(diǎn)明顯升高(P0.05)。5.2 Western blot檢測(cè)Akt及DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白結(jié)果顯示:各組的Akt和DNA-PKcs的表達(dá)水平未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);p-Akt和p-DNA-PKcs在照射組較空白對(duì)照組及藥物組表達(dá)水平明顯升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與照射組和單藥組比較,聯(lián)合組的p-Akt和p-DNA-PKcs表達(dá)水平明顯降低(P0.05)。γH2AX在照射組及藥物組均較空白對(duì)照組表達(dá)明顯升高(P0.05)。與照射組和單藥組比較,聯(lián)合組γH2AX的表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。結(jié)論：尼妥珠單抗增加EGFR高表達(dá)的食管鱗癌ECA-109細(xì)胞的放射敏感性,其增敏機(jī)制可能與尼妥珠單抗阻止EGFR下游信號(hào)的傳導(dǎo),下調(diào)p-Akt的表達(dá),誘導(dǎo)ECA-109細(xì)胞G2/M期阻滯,阻礙DNA損傷修復(fù)增加食管鱗癌ECA-109細(xì)胞的凋亡有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：尼妥珠單抗 食管癌細(xì)胞 放射敏感性 表皮生長(zhǎng)因子受體 Akt DNA損傷修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫(xiě)10-11
• 引言11-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-29
• 附表29-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述 PI3K/Akt信號(hào)通路在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展37-51
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳靜;藍(lán)玉玲;楊永強(qiáng);劉宗文;曲寶林;李建雄;孟玲玲;馮林春;;抗表皮生長(zhǎng)因子受體單抗聯(lián)合X線(xiàn)照射對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2的作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年04期

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本文編號(hào)：906983