發(fā)布時(shí)間：2017-09-23 18:08

  本文關(guān)鍵詞：白頭翁皂苷A對(duì)肺癌細(xì)胞放射敏感性的影響及機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 白頭翁皂苷A 非小細(xì)胞肺癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期 細(xì)胞凋亡 電離輻射 DNA損傷修復(fù)

【摘要】：目的:研究中藥提取物白頭翁皂苷A對(duì)人非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)及放射敏感性的影響,初步研究相關(guān)作用機(jī)制,探討白頭翁皂苷A作為新型放療增敏劑的可能性。方法:選用人正常支氣管上皮細(xì)胞系Beas-2B、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1975作為研究對(duì)象,采用:(1)四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測(cè)白頭翁皂苷A對(duì)人正常支氣管上皮細(xì)胞與人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,并篩選出實(shí)驗(yàn)所用藥物濃度;(2)細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白頭翁皂苷A對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞放射敏感性的影響;(3)流式細(xì)胞術(shù)觀察白頭翁皂苷A對(duì)受照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞周期的影響;(4)磷脂酰絲氨酸外翻法(AnnexinⅤ和PI雙染法)檢測(cè)白頭翁皂苷A對(duì)照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的影響;(5)磷酸化?-H2AX免疫熒光染色和彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白頭翁皂苷A對(duì)照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞DNA損傷的影響;(6)Western blot法檢測(cè)白頭翁皂苷A對(duì)照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白、周期相關(guān)蛋白以及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響;(7)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:(1)白頭翁皂苷A明顯抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1975細(xì)胞的生長(zhǎng),其半抑制濃度IC50分別為13.12±0.79μg/ml、10.56±0.68μg/ml,而對(duì)人正常支氣管上皮細(xì)胞Beas-2B的毒性作用相對(duì)較弱,其IC50為19.84±1.12μg/ml;本研究中選取細(xì)胞存活約80%的藥物濃度(約2μg/ml)做為實(shí)驗(yàn)用藥物濃度;(2)白頭翁皂苷A增加非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)電離輻射的敏感性:白頭翁皂苷A聯(lián)合照射組相比于單純照射組,A549細(xì)胞系克隆形成率顯著降低(P0.05),放射增敏比為1.17;H1975細(xì)胞系中白頭翁皂苷A聯(lián)合照射組比單純照射組克隆形成率顯著降低(P0.05),放射增敏比為1.28。(3)白頭翁皂苷A顯著增加受照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1975細(xì)胞周期G2/M期阻滯:A549細(xì)胞G2/M期細(xì)胞的比例由單純照射組(33.16±1.45)%增加至加藥聯(lián)合照射組中的(46.05±1.76)%(p0.05);單純照射組h1975細(xì)胞g2/m期細(xì)胞的比例為(7.62±1.32)%,加藥聯(lián)合照射組h1975細(xì)胞中該比例增加至(63.68±1.31)%(p0.05)。(4)白頭翁皂苷a顯著增加照射后a549細(xì)胞的早期凋亡,單純照射組和加藥聯(lián)合照射組早期凋亡分別為(26.81±1.70)%、(58.36±2.18)%(p0.05);白頭翁皂苷a能顯著增加照射后h1975細(xì)胞的晚期凋亡,細(xì)胞單純照射組和加藥聯(lián)合照射組晚期凋亡分別為(24.31±1.94)%、(46.69±2.42)%(p0.05)。(5)白頭翁皂苷a能增加非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系a549、h1975細(xì)胞中由電離輻射引起的dna損傷:在磷酸化?-h2ax免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)中,對(duì)對(duì)照組、單純加藥組、單純照射組和加藥聯(lián)合照射組a549細(xì)胞中磷酸化γ-h2ax焦點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù),分別為(6.38±2.47)/細(xì)胞、(12.08±5.28)/細(xì)胞、(21.84±4.87)/細(xì)胞、(30.17±7.85)/細(xì)胞(p0.05);各組h1975細(xì)胞中磷酸化γ-h2ax抗體焦點(diǎn)形成,分別為(10.08±3.87)/細(xì)胞、(24.18±3.52)/細(xì)胞、(16.06±2.77)/細(xì)胞、(34.66±10.06)/細(xì)胞(p0.05);在單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中,對(duì)照組、單純加藥組、單純照射組和加藥聯(lián)合照射組a549細(xì)胞中彗尾的相對(duì)長(zhǎng)度(taildna%),分別為(2.24±0.09)%/細(xì)胞、(4.38±0.89)%/細(xì)胞、(5.33±0.41)%/細(xì)胞、(6.04±1.48)%/細(xì)胞(p0.05);各組h1975細(xì)胞中彗尾的相對(duì)長(zhǎng)度(taildna%),分別為(1.12±0.41)%/細(xì)胞、(4.91±1.35)%/細(xì)胞、(2.87±0.91)%/細(xì)胞、(6.92±1.35)%/細(xì)胞(p0.05);(6)westernblot法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),相比于單純照射組,白頭翁皂苷a聯(lián)合電離輻射處理后,a549、h1975細(xì)胞中dna損傷修復(fù)相關(guān)蛋白mre11、dna-pkcs、ku80,周期相關(guān)蛋白cycline、cyclinb1以及抗凋亡相關(guān)蛋白bcl-2的表達(dá)均下降。結(jié)論:(1)白頭翁皂苷a對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞不僅具有生長(zhǎng)抑制作用,白頭翁皂苷a聯(lián)合電離輻射還可顯著增加對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的殺傷作用。(2)白頭翁皂苷a影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)電離輻射的敏感性的機(jī)制可能與其參與調(diào)控照射后細(xì)胞g2/m期阻滯、凋亡以及抑制細(xì)胞dna損傷修復(fù)蛋白有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：白頭翁皂苷A 非小細(xì)胞肺癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期 細(xì)胞凋亡 電離輻射 DNA損傷修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-17
• 參考文獻(xiàn)13-17
• 第一部分 白頭翁皂苷A(PSA)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖及放射敏感性的影響17-36
• 前言17-18
• 材料與方法18-22
• 結(jié)果22-32
• 討論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 第二部分 白頭翁皂苷A(PSA)聯(lián)合電離輻射對(duì)肺癌細(xì)胞的作用及分子機(jī)制的初步研究36-53
• 前言36-37
• 材料與方法37-42
• 結(jié)果42-49
• 討論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 結(jié)論53-54
• 綜述 中草藥白頭翁提取物的抗腫瘤作用54-57
• 參考文獻(xiàn)56-57
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文57-58
• 致謝58-59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 蔡鷹,陸瑜,梁秉文,余國(guó)祥,謝瑛,張能方,亢壽海;白頭翁體內(nèi)抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中草藥;1999年12期

2 王長(zhǎng)福;孫世芹;王有志;辛萍;;朝鮮白頭翁抗炎有效部位化學(xué)成分研究[J];中草藥;2013年18期

，

本文編號(hào)：906701