本文關(guān)鍵詞：SphK1信號(hào)通路和FAK對(duì)結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

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【摘要】：目的研究鞘磷酸激酶1(sphingosine kinase 1, SphK 1)信號(hào)通路和粘著斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞介導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影響,初步探討SphK1和FAK在結(jié)腸癌發(fā)展進(jìn)程中的臨床意義及機(jī)制研究。方法 將人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116分成3組：FAK抑制劑組、SphKl抑制劑組和空白對(duì)照組；根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果,分別采用5μmol/L的SphK1抑制劑N,N-二甲基鞘胺醇(N, N-dimethylsphingosine, DMS)、10pmol/L FAK抑制劑PF573228和相同體積的培養(yǎng)基處理人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞48 h。采用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,采用免疫印跡方法(Western blotting)檢測(cè)SphK1、FAK、E-cadherin、N-cadhern、Vimentin和MMP2蛋白的表達(dá),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢鋇SphK1、S1P、FAK、E-cadherin和vimentin的mRNA表達(dá)水平,同時(shí)應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移能力。結(jié)果PF573228和DMS均呈時(shí)間劑量依賴性的抑制人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞的增殖。Western blotting結(jié)果表明DMS抑制SphK1的表達(dá),同時(shí)下調(diào)FA、N-cadherin、Vimentin和MMP2蛋白的表達(dá),而E-cadherin蛋白表達(dá)增加；PF573228明顯抑制FAK的表達(dá),同時(shí)抑制SphK1、N-cadherin、Vimentin和MMP2的表達(dá),上調(diào)E-cadherin蛋白。SphKl的蛋白表達(dá)結(jié)果為,PF573228組(0.78±0.03),DMS組(0.83±0.05)均低于對(duì)照組(1.34±0.06)(P0.01); FAK的蛋白表達(dá)結(jié)果為,PF573228組(0.87±0.04),DMS組(0.84±0.07)均低于對(duì)照組(1.35±0.03)(P0.01)；E-cadherin的蛋白表達(dá)結(jié)果為,PF773228組(1.28±0.06),DMS組(1.10±0.03)均高于對(duì)照組(0.67±0.06)(P0.01)；N-cadherin的蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,PF573228組(0.84±0.02),DMS組(0.73±0.02)均低于對(duì)照組(1.41±0.05)(P0.01)；Vimentin的蛋白表達(dá)結(jié)果為,PF573228組(0.52±0.01),DMS組(1.044±0.02)均低于對(duì)照組(1.36±0.01)(P0.05); MMP2的蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,PF573228組(0.98±0.02),DMS組(0.86±0.06)均低于對(duì)照組(1.14±0.04)(P0.01)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞的mRNA結(jié)果顯示,SphK1、FAK、SIP和Vimentin基因表達(dá)降低,而E-cadherin基因表達(dá)增加。具體結(jié)果為：與對(duì)照組比較,PF573228組和DMS組FAK的mRNA表達(dá)(1.00±0.00vs0.16±0.01,0.38±0.03)、SphK1的mRNA表達(dá)(1.00±0.00vs 0.21±0.08,0.55±0.1)、S1P的mRNA表達(dá)(1.00±0.00 vs 0.08±0.01,0.30±06)以及Vimentin的mRNA表達(dá)(1.00±0.00 vs 0.244±0.08,0.30±0.06)均明顯下調(diào),而E-cadherin的mRNA的表達(dá)(1.00±0.00 vs 1.56±0.21,2.39±0.30)則明顯上調(diào)(P0.05或0.01)。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組及藥物干預(yù)組24h細(xì)胞遷移距離分別為：對(duì)照組(93.87±6.06) μm、PF573228(22.97±9.54) μm DMS組(36.76±9.94)μm; 48h遷移距離分別為：對(duì)照組(139.95±13.4)μm、 PF573228(42.95±12.18)μm, DMS組(50.09±9.7)μm,表明PF573228和DMS顯著抑制HCT-116細(xì)胞的遷移能力,其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論SphK1和FAK可能相互作用并通過抑制細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移在結(jié)腸癌HTC-116細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：鞘氨醇激酶 粘著斑激酶 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 人結(jié)腸癌細(xì)胞 侵襲和轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 中英文縮略詞一覽表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖14-15
• 材料與方法15-32
• 結(jié)果32-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 綜述51-70
• 參考文獻(xiàn)61-70
• 致謝70-71
• 攻讀學(xué)位期間參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文71

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7 宋e，

本文編號(hào)：903863