本文關鍵詞：啟膈化裁方調控食管癌前病變小鼠分化相關基因NDRG1表達的實驗研究

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【摘要】：目的:利用化學致癌劑4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO)誘導C57BL/6小鼠食管癌前病變動物模型,觀察啟膈化裁方對食管癌前病變小鼠分化相關基因NDRG1及c-myc表達的影響,探討啟膈化裁方逆轉食管癌前病變的部分作用機制,為臨床應用提供實驗依據。方法:選取SPF級4周齡C57BL/6小鼠130只,雌雄各65只,體重18±2g。隨機分為5組(1)正常對照組20只:常規(guī)飼養(yǎng);(2)模型組30只:飲用4NQO水(濃度為100μg/ml)14周,25ml/100g體重/天,造模成功后改飲用水灌胃;(3)陽性對照組20只:飲用4NQO水14周后,改用全反式維甲酸灌胃;(4)預防組30只:飲用4NQO水同時,灌服啟膈化裁方溶液(含免煎顆粒240mg/ml),14周后只灌服啟膈化裁方溶液;(5)治療組30只:飲用4NQO水14周后,采用啟膈化裁方溶液灌胃。每組小鼠每周灌胃3次,每次0.1ml/20g體重,并根據每周小鼠體重變化調整灌胃容積。14周末食管癌前病變模型成功,至24周末,全部處死小鼠,取14、24周末小鼠食管組織行HE染色,光鏡下觀察正常組、模型組、預防組小鼠食管粘膜上皮的病理改變。24周末透射電鏡下觀察各組小鼠食管粘膜上皮超微結構的改變;免疫印跡法測定各組小鼠食管粘膜上皮組織NDRG1蛋白的表達;逆轉錄-聚合酶鏈反應法測定各組小鼠食管粘膜上皮組織NDRG1、c-myc基因表達。結果:1各組小鼠一般情況實驗過程中,正常對照組小鼠無異常,其余各組小鼠2周內一般情況無異常;2周后,模型組小鼠逐漸出現皮毛凌亂、色枯無澤,頸部毛發(fā)脫落,精神不振、卷曲拱背、扎堆,閉目少動,食欲不振,體重下降;14周后,陽性對照組、預防組及治療組小鼠精神狀態(tài)和食欲較模型組好;預防組小鼠一般情況好于治療組。2各項指標檢測結果2.1光鏡下各組小鼠食管粘膜上皮病理形態(tài)學變化第14周末和第24周末,正常對照組小鼠食管粘膜鱗狀上皮未見異常;第14周末,模型組的小鼠食管粘膜上皮細胞的層數增多,異型細胞累及到食管上皮全層的下2/3,第24周末時,異型增生現象嚴重,異型細胞大部分累及食管上皮的全層,細胞核染色加深、核仁增大,可見病理性核分裂;第24周末,陽性對照組小鼠食管粘膜上皮增厚,異型細胞介于上皮層的下1/3~2/3之間;第14周末,預防組小鼠食管上皮異型細胞介于上皮層的下1/3~2/3,第24周末時,異型細胞局限于上皮全層的下1/3;第24周末,治療組小鼠異型細胞大部分局限在上皮層的下2/3,少部分在1/3~2/3之間。2.2透射電鏡下各組小鼠食管上皮細胞超微結構的改變正常對照組小鼠食管粘膜上皮未見異常改變;模型組小鼠食管上皮細胞間隙增寬、橋粒減少、線粒體水腫,部分細胞空泡變性、壞死、上皮脫落,細胞核形態(tài)不規(guī)則,核周隙增大,核仁變大,可見核切跡,細胞核中染色質邊移;與模型組小鼠相比,預防組、陽性對照組和治療組小鼠的食管上皮病變減輕,細胞間隙變小,橋粒較多;預防組與治療組相比,細胞間隙較小、橋粒較豐富。2.3 Western-blotting測定24周末各組小鼠NDRG1蛋白的表達情況與正常對照組相比,模型組小鼠NDRG1蛋白表達水平明顯上調,經統(tǒng)計學處理有顯著差異(P0.01);陽性對照組、預防組、治療組與模型組相比,NDRG1蛋白表達水平明顯下調(P0.01);預防組優(yōu)于陽性對照組和治療組(P0.05)。2.4 RT-PCR法測定各組小鼠NDRG1、c-myc基因表達情況各組總RNA分別等量利用通用引物Olig(d T)15逆轉錄,用NDRG1、c-myc引物將逆轉錄產物,進行PCR擴增。分別出現483bp、263bp特異性區(qū)帶。NDRG1m RNA、c-mycm RNA表達水平分別用NDRG1、c-myc擴增片斷和GAPDH擴增片斷的吸光度比值表示。結果表明,模型組NDRG1m RNA/GAPDHm RNA遠遠高于正常對照組(P0.01);陽性對照組、治療組、預防組NDRG1m RNA/GAPDHm RNA明顯低于模型組,且有顯著差異(P0.01);預防組與陽性對照組相比無統(tǒng)計學意義(P0.05);預防組與治療組相比,明顯降低(P0.05)。模型組c-mycm RNA/GAPDHm RNA遠高于正常對照組,經統(tǒng)計學處理有顯著性差異(P0.01);陽性對照組、治療組、預防組c-mycm RNA/GAPDHm RNA明顯低于模型組(P0.05);預防組與陽性對照組比較無統(tǒng)計學意義(P0.05);預防組與治療組比較,比值明顯降低(P0.05)。結論:1食管癌前病變發(fā)展過程中,NDRG1蛋白表達及NDRG1和c-myc基因表達明顯上調;啟膈化裁方可降低食管癌前病變小鼠食管組織中NDRG1蛋白表達及NDRG1和c-myc基因的表達,延緩食管癌前病變發(fā)展,預防用藥有一定優(yōu)勢。2啟膈化裁方延緩食管癌前病變發(fā)展,發(fā)揮預防和治療作用的機制可能與調控小鼠食管癌前病變分化相關基因NDRG1及原癌基因c-myc的表達有關。
【關鍵詞】：食管癌前病變 NDRG1 c-myc 啟膈化裁方 4NQO
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-23
• 結果23-26
• 附圖26-35
• 附表35-36
• 討論36-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-47
• 綜述 歷代名家對食管癌病因病機及治療思路分析47-59
• 參考文獻54-59
• 致謝59-60
• 個人簡歷60

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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本文編號：901444