本文關(guān)鍵詞：粘細(xì)菌代謝產(chǎn)物NX52和NX83作用大腸癌細(xì)胞的增殖影響

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【摘要】：粘細(xì)菌在每克土中約有103~106個子實(shí)體,在各類土壤中普遍存在。粘細(xì)菌的生長具有極為復(fù)雜的多細(xì)胞行為,它們可以進(jìn)行細(xì)胞-細(xì)胞的信號傳遞、細(xì)胞間的協(xié)同感應(yīng),粘細(xì)菌還可以運(yùn)動,在發(fā)育過程中形成菌體子實(shí)體,因而粘細(xì)菌的社會學(xué)特征非常顯著。由于粘細(xì)菌的特性不同于其他的微生物,所以具有特異性的粘細(xì)菌在微生物學(xué)研究中占有舉足輕重的地位。隨著越來越多的具有藥理性和生物活性的次級代謝產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn),藥源菌家族中的粘細(xì)菌也不出意外地獲得了科學(xué)家們的關(guān)注,并且關(guān)注度已超過假單胞桿菌沖進(jìn)前三甲。據(jù)報道,粘細(xì)菌的具有生物活性的代謝產(chǎn)物多達(dá)十余種,其中包含芳香族雜環(huán)、醌類、大環(huán)類、多烯類、聚醚類、肽類化合物等,在經(jīng)過分離提純的次級代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)七十余種基本結(jié)構(gòu),而在其它微生物中僅發(fā)現(xiàn)三種類似結(jié)構(gòu)。其次,粘細(xì)菌的另外一種特性就是同一菌株粘細(xì)菌可產(chǎn)生同一種基本結(jié)構(gòu)的相關(guān)或不相關(guān)的類似化合物,這種特性在篩選高效低毒的藥物先導(dǎo)體或化合物方面提供了可靠的資源平臺。粘細(xì)菌最廣為人知的特性就是它具有菌株特異性,而不僅僅是存在種或?qū)匍g的特異性,數(shù)十種甚至數(shù)百種以上結(jié)構(gòu)相異或相似的化合物可以同一時間產(chǎn)生自同一株粘細(xì)菌,這些化合物中有許多是抑制真核細(xì)胞生長發(fā)育的潛在藥源化合物或先導(dǎo)化合物,其中不乏一些抑制腫瘤生長或真菌生長的化合物,其抑制效果往往較其他微生物活性代謝產(chǎn)物顯著。除此以外,粘細(xì)菌的胞外粘液質(zhì)、胞外多糖等對于人類醫(yī)療事業(yè)的進(jìn)步具有不可忽視的應(yīng)用價值。本實(shí)驗(yàn)對陜西省微生物研究所建立的較大規(guī)模秦巴山區(qū)粘細(xì)菌菌株庫及其代謝產(chǎn)物庫的兩種粘細(xì)菌粗提物NX52和NX83進(jìn)行了體外細(xì)胞毒性篩選。用不同濃度的粘細(xì)菌代謝產(chǎn)物0.1mg/ml、1mg/ml和10mg/ml分別處理結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480和SW1463一定時間,驗(yàn)證這兩種粘細(xì)菌粗提物的細(xì)胞毒作用,為今后粘細(xì)菌庫及其代謝產(chǎn)物庫的全面篩選,打下良好的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)后期可深入分析實(shí)驗(yàn)用粘細(xì)菌粗提物的化學(xué)本質(zhì),分離出單體物質(zhì)進(jìn)行抗腫瘤藥物或抑制真菌藥物的開發(fā)利用,為粘細(xì)菌代謝產(chǎn)物庫這類生物資源的有效開發(fā)利用進(jìn)一步奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證粘細(xì)菌發(fā)酵粗提物NX52和NX83在不同作用濃度不同作用時間的情況,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測其對大腸癌細(xì)胞的增殖抑制作用,24h組、48h組和72h組不同濃度粘細(xì)菌發(fā)酵粗提物對結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480和SW1463細(xì)胞毒性存在顯著差異,隨著藥物濃度增高、藥物時間延長,抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長增殖作用也隨之增強(qiáng),兩種發(fā)酵粗提物NX52和NX83對上述腫瘤細(xì)胞的增殖呈現(xiàn)時間依賴和劑量依賴,在相同濃度相同作用時間下,代謝產(chǎn)物NX83對腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用更為顯著,有開發(fā)成為抗腫瘤藥物的潛能,擇其進(jìn)行下一步細(xì)胞毒性機(jī)制研究。粘細(xì)菌不同濃度(0.1mg/ml和1mg/ml)發(fā)酵粗提物NX83作用48h后,濃度0.1mg/ml組細(xì)胞凋亡率以及濃度1mg/ml組細(xì)胞凋亡率相較陰性對照組細(xì)胞凋亡率均有顯著增高。隨著發(fā)酵粗提物濃度的升高,早期凋亡及晚期凋亡/壞死細(xì)胞也相應(yīng)多地出現(xiàn)。進(jìn)一步證明粘細(xì)菌發(fā)酵粗提物NX83具有體外抑制腫瘤生長活性,作用機(jī)制在一定程度上可以認(rèn)為是通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞早期凋亡或晚期凋亡/壞死達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：粘細(xì)菌 代謝產(chǎn)物 結(jié)直腸癌細(xì)胞 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 引言8-13
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料與方法13-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1.1 代謝產(chǎn)物13-14
• 1.1.2 細(xì)胞株14
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)分組14
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑14
• 1.1.5 試劑配制14-15
• 1.1.6 實(shí)驗(yàn)儀器15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟15-19
• 1.2.1 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)15
• 1.2.2 腫瘤細(xì)胞傳代培養(yǎng)15-16
• 1.2.3 細(xì)胞計數(shù)方法16
• 1.2.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察16
• 1.2.5 細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)(MTT法)16-17
• 1.2.6 流式細(xì)胞儀分析17-19
• 1.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析19
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-25
• 2.1 倒置顯微鏡觀察結(jié)果19-22
• 2.2 MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖抑制結(jié)果22-24
• 2.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果24-25
• 第三章 分析討論25-30
• 第四章 結(jié)論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 致謝35-36
• 攻讀學(xué)位期間研究成果36

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李峨,陳信義,王玉芝;九種中藥活性成分抗耐藥腫瘤細(xì)胞體外研究[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2004年02期

2 方蓉,李芳秋,武建國;MTT比色法的條件探討[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2003年01期

3 陳R，

本文編號：899216