本文關(guān)鍵詞：人參炔醇抑制胰腺癌干細胞的增殖及自我更新

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【摘要】：實驗?zāi)康耐ㄟ^各種方法及相關(guān)蛋白的測定,探討人參炔醇對胰腺癌干細胞增殖及自我更新的影響。實驗方法(1)胰腺癌干細胞培養(yǎng):胰腺癌Panc-1細胞在加有EGF、b FGF及B27的干細胞培養(yǎng)體系培養(yǎng)基中培養(yǎng),參照試劑說明及其他文獻培養(yǎng)成胰腺癌干細胞,細胞的CD133+用流式細胞儀進行檢測,觀察培養(yǎng)后細胞的干性比例;(2)胰腺癌干細胞分選:為了得到更高比例的胰腺癌干細胞,通過流式細胞儀將培養(yǎng)的細胞進行CD133+分選。(3)CCK8實驗:將人參炔醇分為0、72、144、287nmol/L四個藥物濃度分別作用于胰腺癌干細胞,作用時間為0、12、24、48h,CCK8實驗選出合適的藥物作用濃度及最佳的作用時間;(4)克隆實驗:濃度為0、72、144、287nmol/L的人參炔醇作用于胰腺癌干細胞48h后,將干細胞消化為單個細胞,并重新種于6孔板中培養(yǎng)兩周,形成集落后,對實驗組與對照組集落的數(shù)目進行比較;(5)western blot實驗:檢測增殖相關(guān)蛋白Ki67、PCNA及自我更新有關(guān)蛋白β-catenin。實驗結(jié)果(1)經(jīng)干細胞培養(yǎng)體系培養(yǎng)的胰腺癌干細胞,用流式細胞儀檢測其CD133+比例為9.96%,對照組干性比例為2.21%,兩組相比具顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001);(2)經(jīng)過細胞分選后,胰腺癌干細胞比例為96.78%,對照組為3.67%,兩組相比具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001);(3)CCK8實驗OD值檢測顯示,人參炔醇減少胰腺癌干細胞的存活率,藥物作用具有濃度依賴性,并隨著時間延長作用加強,0、72、144、287nmol/L的人參炔醇作用胰腺癌干細胞48h后存活率分別為100%、63.13%、50.32%、41.62%,結(jié)果具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001);(4)克隆實驗中,數(shù)量上實驗組的集落少于對照組(P0.001);(5)人參炔醇作用48h后,胰腺癌干細胞的Ki67、PCNA及β-catenin蛋白表達量均降低。結(jié)論(1)人參炔醇作用于胰腺癌干細胞,抑制其增殖及自我更新能力;(2)其機制可能與下調(diào)Ki67、PCNA表達,阻滯Wnt/β-catenin信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人參炔醇 胰腺癌干細胞 自我更新
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 英漢縮略語名詞對照11-12
• 第一章 緒論12-17
• 1.1 人參炔醇12-13
• 1.2 胰腺癌13
• 1.3 腫瘤干細胞13-15
• 1.4 通路15-17
• 第二章 人參炔醇對胰腺癌干細胞增殖作用研究17-33
• 2.1 材料與方法17-27
• 2.1.1 細胞來源17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.1.3 主要儀器18
• 2.1.4 主要試劑配制18-19
• 2.1.5 細胞培養(yǎng)19-21
• 2.1.6 細胞計數(shù)21
• 2.1.7 藥物濃度和作用時間點設(shè)置21-22
• 2.1.8 胰腺癌干細胞干性測定及分選22-23
• 2.1.9 CCK8實驗檢測人參炔醇對胰腺癌干細胞增殖的作用23-24
• 2.1.10 KI67、PCNA蛋白表達24-27
• 2.2 統(tǒng)計分析27
• 2.3 結(jié)果27-31
• 2.3.1 檢測胰腺癌干細胞比例及干細胞分選結(jié)果27-29
• 2.3.2 CCK8實驗示人參炔醇可降低胰腺癌干細胞的存活率29-30
• 2.3.3 人參炔醇抑制胰腺癌干細胞增殖相關(guān)蛋白的表達30-31
• 2.4 討論31-33
• 第三章 人參炔醇對胰腺癌干細胞自我更新作用研究33-43
• 3.1 材料與方法33-38
• 3.1.1 細胞來源33
• 3.1.2 主要試劑33
• 3.1.3 主要儀器33-34
• 3.1.4 主要試劑配制34-35
• 3.1.5 細胞培養(yǎng)35
• 3.1.6 細胞計數(shù)35-36
• 3.1.7 藥物濃度和作用時間點設(shè)置36
• 3.1.8 細胞克隆實驗36-37
• 3.1.9 Wnt/β- catenin信號通路中β- catenin蛋白的表達及CD133表達37-38
• 3.2 統(tǒng)計分析38
• 3.3 結(jié)果38-40
• 3.3.1 人參炔醇抑制胰腺癌干細胞集落的形成38-39
• 3.3.2 人參炔醇降低增殖及自我更新有關(guān)蛋白的表達39-40
• 3.3.3 人參炔醇作用于胰腺癌干細胞后CD133的表達變化40
• 3.4 討論40-43
• 第四章 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-48
• 綜述48-59
• 參考文獻55-59
• 致謝59-60
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文60

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