表柔比星聯(lián)合5-FU、OXA誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞增殖及凋亡的影響

發(fā)布時間：2017-09-21 06:01

本文關(guān)鍵詞：表柔比星聯(lián)合5-FU、OXA誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞增殖及凋亡的影響

【摘要】：原發(fā)性肝癌在我國屬于常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率在世界上僅次于肺癌、胃癌、直腸癌,居第四,而死亡率位列世界第二名。肝癌的預(yù)后差,治療棘手,是由于該病起病隱襲、進(jìn)展迅速、早診困難,大多數(shù)患者確診時已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移或已達(dá)到晚期。對于晚期肝癌,系統(tǒng)化療是臨床經(jīng)常采用的姑息療法,但是迄今為止,還未找到理想的化療藥物及方案。目前奧沙利鉑(oxaliplatin,L-OHP,OXA,第三代的鉑類化療藥物)是臨床上的一線化療藥物。相關(guān)研究結(jié)果顯示奧沙利鉑可以抑制DNA的合成,其機(jī)制是通過產(chǎn)生水化衍生物作用于腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA,形成鏈間和鏈內(nèi)的交聯(lián),從而產(chǎn)生抗腫瘤活性。由于其對腫瘤細(xì)胞能起到較好的抑制作用,目前奧沙利鉑不僅被用于結(jié)直腸癌等的治療,也在肝癌的全身化療治療中也有著很好的應(yīng)用。5-FU(Fluorouracil,5-FU)經(jīng)過三十多年來的臨床使用,已廣泛用于肝癌、胃癌、卵巢癌、絨癌、惡性葡萄胎、結(jié)腸癌、直腸癌等惡性腫瘤的治療.它是一種臨床常用的抗代謝類抗癌藥,是消化道惡性腫瘤的首選化療藥物。5-FU通過多種途徑阻斷腫瘤細(xì)胞內(nèi)的RNA和DNA合成,發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用。5-FU在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為5-FU核苷(5-FUR)后,摻入RNA中干擾蛋白質(zhì)合成,故對各期細(xì)胞都發(fā)揮著作用;5-FU還可通過抑制外切體復(fù)合物,從而影響細(xì)胞生存;5-FU最主要的抗腫瘤作用方式是在生物體內(nèi)核糖磷酸化和核糖基化,轉(zhuǎn)化成5F-dUMP(5-FU脫氧核苷酸),而抑制脫氧胸苷酸合成酶,阻止dUMP(脫氧尿苷酸)甲基化為dTMP(脫氧胸苷酸),而dTMP是DNA復(fù)制合成的必需原材料,可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯[1]。但在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn),存在著5-FU易產(chǎn)生耐藥性,肝癌細(xì)胞對5-FU敏感性不高[2]口服吸收不完全,毒副作用較大,中毒劑量與治療劑量很接近等諸多缺點[3-4],然而高劑量時毒副作用大及對肝癌的療效不足等缺點限制了其臨床使用。因此探索新型的化療方案以提高5-FU對肝癌細(xì)胞的敏感性成為了一個非常重要且緊迫的問題。新的蒽醌類抗腫瘤藥表柔比星又叫表阿霉素,表柔比星相比多柔比星具有廣譜且更有效的優(yōu)點,它在氨基糖部分4位的羥基由原先的順式變成了現(xiàn)在的反式,比阿霉素和柔紅霉素,具有更低的毒性,在目前的臨床上為同類藥物的首選,并已被廣泛使用[4]。它的主要作用機(jī)理是:通過插入dna相鄰的堿基對間,與dna形成可逆的雙螺旋結(jié)合,干擾轉(zhuǎn)錄的過程,抑制rna和dna的合成,以實現(xiàn)癌癥治療的目標(biāo)[5]、朱曉東等[6]應(yīng)用表柔比星聯(lián)合5-fu+oxa方案對晚期胃癌作了評估。結(jié)果顯示,與其他化療方案相比,具有良好的耐受性和高效率,且毒性低。目的:我們通過體外實驗,使用表柔比星聯(lián)合5-fu和oxa,探討三種藥物聯(lián)合是否能夠增加腫瘤細(xì)胞的有效凋亡率及其可能相關(guān)機(jī)制,探索新的思路用于治療肝癌,為臨床肝癌抗腫瘤治療提供基礎(chǔ)提供理論依據(jù)。方法:1.細(xì)胞來源:人肝癌hepg2細(xì)胞株購買自上海美軒生物科技有限公司2.實驗分組:設(shè)立表柔比星聯(lián)合5-fu+oxa組、5-fu+oxa組、表柔比星組、空白對照組3.mtt法檢測各干預(yù)組hepg2人肝癌細(xì)胞增殖活性的差異4.rt-pcr法測定各組對hepg2細(xì)胞bcl-2mrna、baxmrna表達(dá)影響的差異5.westernblot法測定各組對hepg2細(xì)胞bcl-2蛋白、bax蛋白表達(dá)影響的差異6.統(tǒng)計分析:統(tǒng)計數(shù)據(jù)使用spss17.0,分別用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的數(shù)據(jù)進(jìn)行表示。多組之間的比較使用單因素方差分析法,兩組之間的比較使用snk法,p0.05則表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.mtt法檢測不同用藥組間hepg2人肝癌細(xì)胞增殖的影響:先篩查出各藥物48h的ic50做為聯(lián)合用藥的濃度分別為:表柔比星、5-fu及oxa的ic50分別為3.44umol/l,1.76mmol/l,6.89mmol/l。mtt法結(jié)果示,四組hepg2細(xì)胞分別進(jìn)行藥物干預(yù)48h后,各組的抑制率分別為29.80%(表柔比星+5-fu+oxa組)、22.19%(5-fu+oxa組)、14.86%(表柔比星組),差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(F=120.198,P0.05)。表柔比星+5-FU+OXA組、5-FU+OXA組、表柔比星組與空白對照組比較,OD值均降低,各用藥組均抑制HepG2肝癌細(xì)胞的增殖,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而各干預(yù)組中表柔比星+5-FU+OXA組OD值最低,說明表柔比星與5-FU+OXA聯(lián)合有效提高了對HepG2肝癌細(xì)胞增殖的抑制率。(表柔比星+5-FU+OXA組、5-FU+OXA組間、表柔比星組、空白對照組間的比較,P0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義)。2.RT-PCR法測各干預(yù)組HepG2細(xì)胞中Bcl-2mRNA、BaxmRNA的表達(dá):表柔比星+5-FU+OXA組、5-FU+OXA組間、表柔比星組與空白對照組比較,各干預(yù)組Bcl-2mRNA的表達(dá)均降低(F=27.392,P0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義)、BaxmRNA均升高(F=70.490,P0.05),其中表柔比星聯(lián)合5-FU+OXA組、5-FU+OXA組、表柔比星組三組藥物干預(yù)組中,表柔比星聯(lián)合5-FU+OXA組的Bcl-2mRNA的表達(dá)最低,同時表柔比星聯(lián)合5-FU+OXA組的BaxmRNA的表達(dá)最低(P0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義)。3.Western Blot法檢測各干預(yù)組HepG2細(xì)胞中Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表達(dá):予以空白對照組相比較,各用藥組HepG2細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)均降低、Bax蛋白的表達(dá)均升高,且表柔比星聯(lián)合5-FU+OXA組的蛋白表達(dá)最明顯。表明隨著藥物的聯(lián)合作用,Bcl-2蛋白的表達(dá)逐漸增高(F=816.418,P0.05,各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義)、Bax蛋白的表達(dá)逐漸降低(F=62.916,P0.05,各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義)。結(jié)論:HepG2人肝癌細(xì)胞在表柔比星聯(lián)合5-FU及OXA三種藥物的共同干預(yù)作用下,加速了腫瘤細(xì)胞的凋亡,其增值率明顯降低,其聯(lián)合作用機(jī)制可能通過抑制Bcl-2表達(dá),從而促進(jìn)Bax的表達(dá)來實現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：表柔比星 5-FU聯(lián)合OXA化療方案 肝癌凋亡 Bcl-2 Bax
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：