本文關(guān)鍵詞：CD151對(duì)人結(jié)腸癌干細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)作用及機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 結(jié)腸癌干細(xì)胞 CD151 CD133 CD44 Wnt-5a β-catenin

【摘要】：目的:本研究擬用篩選后的人結(jié)腸癌干細(xì)胞,建立裸鼠移植瘤模型。在細(xì)胞水平和整體動(dòng)物水平上,探討在人結(jié)腸癌干細(xì)胞裸鼠成瘤模型中CD151基因?qū)nt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用影響。方法:1運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對(duì)HT29細(xì)胞系及被敲除CD151的HT29細(xì)胞系在含有血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行貼壁培養(yǎng),對(duì)CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞和敲除CD151的CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮培養(yǎng),觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況,獲取足量對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的結(jié)腸癌干細(xì)胞及普通結(jié)腸癌細(xì)胞,并通過(guò)含有血清的培養(yǎng)基對(duì)結(jié)腸癌干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化來(lái)鑒定結(jié)腸癌干細(xì)胞。2運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)HT29細(xì)胞組和敲除CD151的HT29細(xì)胞組中CD44蛋白和CD133蛋白的熒光表達(dá)情況。3裸鼠皮下移植瘤模型的構(gòu)建:將HT29細(xì)胞和敲除CD151的HT29細(xì)胞及其分選后的兩種CD133+CD44+的結(jié)腸癌干細(xì)胞分別接種于裸鼠皮下,觀察其成瘤情況及進(jìn)行病理學(xué)檢查。4采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)兩組CD133+CD44+的結(jié)腸癌干細(xì)的裸鼠移植瘤中Wnt-5a m RNA、β-catenin m RNA的表達(dá)。結(jié)果:1 HT29細(xì)胞和敲除CD151的HT29細(xì)胞在含有血清的培養(yǎng)基中貼壁生長(zhǎng)狀況良好,CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞和敲除CD151的CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中呈球狀懸浮生長(zhǎng),生長(zhǎng)狀況良好。腫瘤干細(xì)胞球通過(guò)含有血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),在其誘導(dǎo)分化后均貼壁生長(zhǎng)。2激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)到HT29細(xì)胞組CD44蛋白、CD133蛋白的熒光強(qiáng)度明顯高于敲除CD151的HT29細(xì)胞組。3 CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞組的裸鼠成瘤率、瘤體體積、惡性程度均高于HT29細(xì)胞組和敲除CD151的CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞組。4應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量的RT-PCR技術(shù)檢測(cè)到CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞所形成的裸鼠移植瘤中Wnt-5a m RNA、β-catenin m RNA的表達(dá)量明顯高于敲除CD151的CD133+CD44+結(jié)腸癌干細(xì)胞組。結(jié)論:1經(jīng)CD133抗體和CD44抗體標(biāo)記篩選的結(jié)腸癌干細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖和侵襲能力;CD151基因缺失的HT29細(xì)胞中結(jié)腸癌干細(xì)胞特征性標(biāo)記物CD44蛋白和CD133蛋白的表達(dá)較原株HT29細(xì)胞明顯減少。2結(jié)腸癌干細(xì)胞組敲除CD151基因后可使與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化功能密切相關(guān)的Wnt-5a和β-catenin基因轉(zhuǎn)錄水平明顯降低,其裸鼠成瘤率、瘤體體積、組織的惡性程度及對(duì)周?chē)M織的侵襲能力也隨之降低,提示CD151可能通過(guò)Wnt通路影響結(jié)腸癌的增殖和侵襲功能。3進(jìn)一步闡明CD151基因的生理功能及監(jiān)測(cè)其基因的表達(dá)水平,可能為今后結(jié)腸癌的治療提供有力依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌干細(xì)胞 CD151 CD133 CD44 Wnt-5a β-catenin
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRAST6-8
• 英文縮寫(xiě)8-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-19
• 1 實(shí)驗(yàn)材料10-12
• 2 實(shí)驗(yàn)方法12-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-29
• 附表29-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 綜述 腫瘤干細(xì)胞的研究進(jìn)展38-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

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本文編號(hào)：888502