本文關(guān)鍵詞：Disulfiram聯(lián)合Cu對(duì)急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的殺傷作用及其分子機(jī)制的探討

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【摘要】：研究背景：急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是兒童最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,也是成人常見(jiàn)的急性白血病類型之一,發(fā)病年齡有兩個(gè)高峰期,即2至5歲的兒童和大于50歲的成人。ALL是一種起源于B或T系淋巴干祖細(xì)胞的異�？寺⌒约膊�,在臨床、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)均具有高度異質(zhì)性。近年來(lái),隨著大劑量多藥聯(lián)合化療方案、分子靶向治療藥物和造血干細(xì)胞移植的應(yīng)用,兒童ALL的治愈率可達(dá)80%以上,而成人ALL的治療效果仍然較差,5年無(wú)病生存期(disease-free survival,DFS)僅為30～40%,因此臨床上迫切需求提高成人ALL的總生存期(overall survival, OS)和無(wú)病生存期(disease-free survival,DFS)。相對(duì)于兒童而言,成人ALL的發(fā)病年齡偏大、基礎(chǔ)疾病及不良預(yù)后因素多,因此對(duì)于目前的治療策略如大劑量多藥聯(lián)合化療和造血干細(xì)胞移植等方案尚不能滿足臨床治療的需要,此外,多藥聯(lián)合化療和造血干細(xì)胞移植的并發(fā)癥及死亡率相對(duì)較高,因此尋求一種高效低毒的藥物顯得尤為迫切。雙硫侖(Disulfirum,DS)是一種臨床上應(yīng)用60多年的抗酗酒藥物,具有安全性好、毒副作用小且價(jià)格低廉等多種特性。近年來(lái),越來(lái)越多的研究者發(fā)現(xiàn)DS對(duì)乳腺癌、腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤、前列腺癌、黑色素瘤及結(jié)腸癌等多種實(shí)體瘤具有抗腫瘤作用。進(jìn)一步研究還表明DS是一種強(qiáng)的金屬離子螯合劑,能夠與多種金屬離子結(jié)合如Zn、Cu和Ni等形成復(fù)合物而增強(qiáng)其腫瘤殺傷作用。Cu是生物有機(jī)體一種必需的微量元素,其對(duì)于機(jī)體內(nèi)許多關(guān)鍵酶和轉(zhuǎn)錄因子活性的發(fā)揮具有至關(guān)重要的作用。許多研究發(fā)現(xiàn),DS與Cu結(jié)合形成Cu(deDTC)2復(fù)合物能夠增強(qiáng)DS的腫瘤殺傷作用。雖然目前許多研究者已經(jīng)證實(shí)了DS/Cu對(duì)許多惡性腫瘤包括實(shí)體瘤和血液系統(tǒng)惡性疾病具有明顯的誘導(dǎo)凋亡和抑制增殖作用,但關(guān)于其對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)細(xì)胞作用的相關(guān)報(bào)道卻很少。由于ALL 80-85%起源于B細(xì)胞,因此本研究將探討DS聯(lián)合Cu對(duì)B-ALL細(xì)胞(包括原代BALL細(xì)胞和Nalm6細(xì)胞株等)的殺傷作用及其分子機(jī)制。細(xì)胞凋亡(Apoptosis)又稱程序性細(xì)胞死亡(Programmed Cell Death,PCD),是指由基因調(diào)控的細(xì)胞自主有序的死亡,對(duì)于維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育以及生物進(jìn)化等過(guò)程中起著重要作用。機(jī)體內(nèi)主要存在有三條途徑,一條是死亡受體介導(dǎo)的凋亡通路(又稱外源性凋亡通路),另外一條是線粒體相關(guān)的凋亡通路(內(nèi)源性凋亡通路),最后是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路,其中線粒體凋亡通路被認(rèn)為是最經(jīng)典的凋亡途徑。線粒體是細(xì)胞生命活動(dòng)控制中心,它既是細(xì)胞呼吸和氧化磷酸化的中心,又是細(xì)胞凋亡的調(diào)控中心。線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡主要是由于各種刺激的作用(包括陰性和陽(yáng)性刺激兩大類,陰性刺激因子主要指的是由于各種生長(zhǎng)因子、激素和細(xì)胞因子的缺乏所致；陽(yáng)性刺激包括射線、藥物、細(xì)胞毒素、缺氧及病毒感染等多種因素)使線粒體內(nèi)膜上的通透性轉(zhuǎn)換孔道-線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(Mitochondrial permeability transition pore, MPTP)開(kāi)放,導(dǎo)致線粒體膜通透性發(fā)生改變、線粒體膜電位(mitochondrial membrance potential, MMP/ΔΨ)下降,從而使線粒體膜間隙(mitochondrial intermembrane space,IMS)存在的大量的凋亡相關(guān)因子釋放至胞漿或胞核內(nèi),包括細(xì)胞色素C、Smac/DIABLO、Htra2/Omi、IAPs、AIF及核酸內(nèi)切酶G(EndoG)等,從而誘導(dǎo)Caspases家族蛋白酶的活化,隨后Caspases切割其底物蛋白(這些蛋白大多是細(xì)胞內(nèi)的功能蛋白,在DNA修復(fù)、mRNA裂解、類固醇合成及細(xì)胞骨架重建等過(guò)程中起著重要的作用),并使這些作用底物蛋白的功能喪失,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Bcl-2家族蛋白根據(jù)其功能和BH結(jié)構(gòu)域數(shù)目的不同而分成三大亞類：1)抗凋亡蛋白亞家族：是指具有4個(gè)BH結(jié)構(gòu)域(BH1-4)的Bcl-2和Bcl-xL;2)促凋亡蛋白亞家族：指其蛋白結(jié)構(gòu)中包含有3個(gè)BH結(jié)構(gòu)域(BH1-3)的BAX和BAK等；3)僅具有BH3結(jié)構(gòu)域的促凋亡蛋白亞家族：如BID和BIM。這三類Bcl-2亞家族蛋白之間相互可形成同源或者異源二聚體,形成的二聚體是其家族蛋白之間功能實(shí)現(xiàn)和功能調(diào)節(jié)的重要形式。大量的實(shí)驗(yàn)研究表明Bcl-2家族蛋白在調(diào)控線粒體膜電位的變化中發(fā)揮著重要的的作用,從而在調(diào)控細(xì)胞凋亡作用方面發(fā)揮著不可或缺的角色。Bcl-xL、Bcl-2蛋白同屬于Bcl-2抗凋亡蛋白亞家族,兩者在細(xì)胞抗凋亡作用方面起著協(xié)同作用,共同抑制細(xì)胞凋亡,延長(zhǎng)細(xì)胞壽命。Bcl-2基因(即B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因)是一種原癌基因(oncogene),最早是由Tsujimoto Y等于1984年在濾泡性非霍奇金淋巴瘤(Follicular non-hodgkin's lymphoma)患者中首先發(fā)現(xiàn)的,是由于t(14；18)(q32；q21)染色體異位所致,其編碼的Bcl-2蛋白是體內(nèi)最重要的抗凋亡蛋白之一。Bcl-2蛋白在不同的細(xì)胞內(nèi)可以有不同的亞細(xì)胞定位,如分布于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核膜等部位上,其高表達(dá)能夠抑制細(xì)胞的凋亡,延長(zhǎng)細(xì)胞壽命。Bcl-xL(BCL2L1)是一種位于線粒體外膜的跨膜蛋白(tansmembrane protein),能調(diào)控線粒體外膜上的電壓依賴性陰離子通道蛋白質(zhì)(voltage-dependent anion channel,VDAC)的開(kāi)放和關(guān)閉,進(jìn)而影響線粒體膜通透性和線粒體膜電位的變化,最終對(duì)線粒體凋亡過(guò)程產(chǎn)生影響。其同樣也屬于Bcl-2抗凋亡蛋白亞家族,與Bcl-2協(xié)同抗凋亡作用,促進(jìn)細(xì)胞存活。目前關(guān)于DS/Cu抗腫瘤作用的分子機(jī)制尚不完全明確,大部分研究主要圍繞蛋白酶體抑制和JNK/c-Jun通路的活化等方面,其他還包括抑制血管生成、Ras/PI3K/mTOR通路及抑制MDR蛋白等多方面。本研究團(tuán)隊(duì)前期也已經(jīng)證實(shí)了DS/Cu可通過(guò)抑制NF-κB、活化JNK/c-Jun通路、誘導(dǎo)ROS在細(xì)胞內(nèi)蓄積從而誘導(dǎo)急性髓系白血病KG-1a細(xì)胞、急性T淋巴細(xì)胞白血病Molt4細(xì)胞和Brukitt淋巴瘤Raji細(xì)胞凋亡并抑制其增殖,且能逆轉(zhuǎn)HL-60耐藥細(xì)胞株對(duì)多柔比星的耐藥。目前有關(guān)DS/Cu對(duì)于急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的殺傷作用及其分子機(jī)制的研究尚少,有研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)線粒體凋亡通路(mitochondrial pathway)在DS/Cu誘導(dǎo)其他腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制增殖過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用,因此本研究將以B-ALL細(xì)胞株(Nalm6細(xì)胞)和原代B-ALL細(xì)胞為研究對(duì)象,探討DS/Cu對(duì)急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞細(xì)胞Nalm6及原代B-ALL細(xì)胞的殺傷作用及其與線粒體凋亡通路之間的關(guān)系。研究目的：本實(shí)驗(yàn)以急性B淋巴細(xì)胞白血病Nalm6細(xì)胞株、原代B-ALL細(xì)胞為研究對(duì)象,探討DS/Cu是否能誘導(dǎo)急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡并抑制其增殖；并進(jìn)一步研究DS/Cu誘導(dǎo)急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡與線粒體凋亡通路之間的關(guān)系。研究方法：1、用CCK-8(cell counting kit-8)法檢測(cè)不同濃度的(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4uM)DS聯(lián)合0.5uM的Cu作用24h后對(duì)Nalm6細(xì)胞的增殖抑制作用,并用graph prism5軟件計(jì)算出相應(yīng)的IC50值。2、用Annexin-V/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度的(0.025、0.05、0.1、0.2、0.5uM) DS聯(lián)合0.5uM的Cu處理24h后對(duì)Nalm6、原代B-ALL細(xì)胞凋亡的影響。3、用甲基纖維素集落形成(colony-forming unit,CFU)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DS及DS/Cu對(duì)Nalm6細(xì)胞集落形成能力的影響；4、用JC-1法檢測(cè)不同濃度的(0.025、0.05、0.1、0.2、0.5uM)DS聯(lián)合0.5uM的Cu處理12h后對(duì)Nalm6、原代B-ALL細(xì)胞線粒體膜電位的影響。5、利用蛋白免疫印跡法檢測(cè)DS、DS/Cu作用Nalm6細(xì)胞12h后引起線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白：Bcl-2、Bcl-xL、Caspase-3和PARP等的表達(dá)變化。6、采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,多組間均數(shù)比較使用多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)或單因素方差法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(方差不齊時(shí)考慮Welch校正),方差齊時(shí)考慮使用LSD(方差齊性)進(jìn)行多重比較,不齊時(shí)采用Dunnett's T3方法進(jìn)行多重比較；計(jì)量資料用Mean±SD表示,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05,所有檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)。由于樣本量較小,當(dāng)參數(shù)檢驗(yàn)與非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果不一致時(shí),以非參數(shù)檢驗(yàn)的結(jié)果為準(zhǔn),并采用Bonferroni法校正檢驗(yàn)水準(zhǔn)進(jìn)行多重比較；兩種方法結(jié)果一致時(shí),采用參數(shù)方法的結(jié)論。研究結(jié)果：1、CCK-8細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DS/Cu對(duì)Nalm6細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用：作用24h后,單藥Cu(0.5uM)組的增殖抑制率為(6.39±4.93)%,與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.244,P=0.088)。而不同濃度的DS/Cu對(duì)Nalm6細(xì)胞均具有顯著的增殖抑制作用,且呈劑量依賴性,0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4uM的DS聯(lián)合0.5uM的Cu對(duì)nalm6細(xì)胞的增殖抑制率分別為(22.29±6.69)%、(48.66±11.58)%、(50.83±12.61)%、(59.24±4±9.43)%、(62.74±9.17)%、(66.7±7.64)%、(72.13±7.94)%、(77.86±5.43)%,單因素方差分析表明與對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),由graph prism5軟件計(jì)算24h的IC50濃度為(0.18±0.08)uM。2、流式細(xì)胞術(shù)Annexin-V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示DS/Cu對(duì)Nalm6細(xì)胞具有顯著的凋亡誘導(dǎo)作用：?jiǎn)嗡嶤u(0.5uM)組作用于Nalm6細(xì)胞24h后凋亡比例為(7.82±5.13)%,與對(duì)照組(8.34±6.23)%相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.112,P=0.916)。而不同濃度的(0.025、0.05、0.1、0.2/0.5uM)DS聯(lián)合0.5uM的Cu對(duì)Nalm6細(xì)胞具有顯著的凋亡誘導(dǎo)作用,凋亡比例分別為(17.84±7.68)%、(31.39±5.86)%、(60.41±13.87)%、(69.26±13.29)%、(81.37±12.72)%,經(jīng)單因素方差分析表明,不同濃度DS/Cu均能誘導(dǎo)Nalm6細(xì)胞凋亡,與對(duì)照組(8.34±4±6.23)%比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.471,P=0.000)。進(jìn)一步用LSD方法比較不同濃度DS/Cu兩兩組間的細(xì)胞凋亡比例的差異結(jié)果顯示：0.025uM組與0.1、0.2、0.5uM組間均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.01)；0.05uM與0.1、0.2、0.5uM組間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.01)；0.1uM與0.5uM組間差異也具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；余各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、DS/Cu對(duì)原代B-ALL細(xì)胞亦具有誘導(dǎo)凋亡的作用：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)16例原代B-ALL細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn),DS/Cu對(duì)不同患者來(lái)源的原代B-ALL細(xì)胞均有不同程度的凋亡誘導(dǎo)作用,亦呈劑量依賴性。單藥Cu(0.5uM)組作用24h后的凋亡比例為(34.66±16.99)%,與對(duì)照組(33.82±15.25)%相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.146,P=0.885);而不同濃度的(0.025、0.05、0.1、0.2、0.5uM)DS聯(lián)合Cu(0.5uM)作用24h后的凋亡比例分別為(43.0±15.93)%、(57.02±23.8)%、(64.82±24.03)%、(70.22±22.2)%、(68.09±22.72)%,方差分析表明,與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.392,P=0.000)。用LSD方法比較不同濃度DS/Cu兩兩組間的細(xì)胞凋亡比例的差異結(jié)果顯示：0.025uM組與0.1、0.2、0.5uM組間均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.01)；余各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。于B-ALL患者之間的一些臨床生物學(xué)特征存在著不同程度的差異性,而這些差異可能會(huì)影響DS/Cu對(duì)原代B-ALL細(xì)胞的殺傷作用,故本研究將從B-ALL患者的年齡、起病時(shí)白細(xì)胞(white blood cell,WBC)數(shù)、免疫分型、危險(xiǎn)分層、細(xì)胞遺傳學(xué)及Ph染色體等多方面來(lái)探討這些因素對(duì)DS/Cu療效的影響。經(jīng)析因分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果表面,患者的起病時(shí)的WBC數(shù)及免疫分型等三個(gè)因素可能會(huì)影響DS/Cu的療效,起病時(shí)WBC=30*109/L患者的凋亡比例較WBC30*109/L高(F=3.966,P=0.049),免疫分型的Pro-B組的細(xì)胞凋亡比例較non-ProB高(F=6.149,P=0.015)。而其他臨床生物學(xué)特征,如患者的年齡、危險(xiǎn)分層、遺傳學(xué)改變及Ph染色體等,均不影響DS/Cu對(duì)原代B-ALL細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用。但由于本實(shí)驗(yàn)僅研究16例患者來(lái)源的原代B-ALL細(xì)胞,樣本量偏少,故以上結(jié)果可能存在一定的偏差,需要擴(kuò)大樣品量來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。4、CFU(甲基纖維素集落形成)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示DS/Cu能夠抑制Nalm6細(xì)胞的集落形成：對(duì)照組、Cu、DS和DS/Cu組的集落形成百分比分別為(33.63±4.15)%、(30.93±4.22)%、(10.83±2.63)%、(0.9±0.66)%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,單藥Cu(0.5uM)組并不能抑制Nalm6細(xì)胞的集落形成,兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.791,P=0.473)；而DS和DS/Cu組能顯著抑制集落形成,單因素方差分析表明,與對(duì)照組相比差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=70.949,P0.001)；進(jìn)一步用LSD分析表明,DS與DS/Cu組間亦存在明顯的差異(P=0.006),DS/Cu組抑制Nalm6細(xì)胞集落形成能力更強(qiáng)。5、用線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(Mitochondrial membrane potential detection kit:JC-1 kit)檢測(cè)DS/Cu作用12h后對(duì)B-ALL細(xì)胞(包括Nalm6和原代B-ALL細(xì)胞)線粒體膜電位(mitochondrial membrance potential,MMP/AΔΨ)的影響發(fā)現(xiàn)：對(duì)Nalm6細(xì)胞作用12h后,單藥Cu (0.5uM)組的JC-1多聚體/單體平均熒光強(qiáng)度的比值為(1.01±0.09),與對(duì)照組(1.21±0.36)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.996,P=0.375)；而不同濃度的(0.025、0.05、0.1、0.2、0.5uM)DS聯(lián)合0.5uM的Cu作用于Nalm6細(xì)胞12h后JC-1多聚體/單體平均熒光強(qiáng)度的比值分別為：(1.01±0.15)、(0.64±0.22)、(0.39±0.25)、(0.21±0.11)、(0.11±0.07),經(jīng)方差分析發(fā)現(xiàn),不同濃度的DS/Cu可致Nalm6細(xì)胞線粒體膜電位水平下降,與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=14.535,P=0.000)。用LSD方法比較不同濃度DS/Cu兩兩組間的線粒體膜電位變化的差異結(jié)果顯示：0.025uM組與0.05、0.1、0.2、0.5uM組間均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)；0.05uM與0.2、0.5uM組間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)；余各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究還發(fā)現(xiàn)DS/Cu對(duì)不同患者來(lái)源的7例原代B-ALL細(xì)胞線粒體膜電位的影響與Nalm6細(xì)胞相似,單藥Cu(0.5uM)組作用12h后JC-1多聚體/單體的比值為(1.75±1.3),與對(duì)照組(1.69±1.04)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.099,P=0.923)；而不同濃度的(0.025、0.05、0.1、0.2、0.5uM)DS聯(lián)合0.5uM的Cu作用于原代B-ALL細(xì)胞12h后JC-1多聚體/單體的比值分別為：(1.3±0.78)、(1.02±0.71)、(0.68±0.64)、(0.36±0.34)、(0.15±0.12),經(jīng)方差分析表明,不同濃度的DS/Cu均能引起原代B-ALL細(xì)胞線粒體膜電位水平不同程度的下降,與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.33,P0.01)；6、蛋白免疫印跡法發(fā)現(xiàn)DS/Cu可能是通過(guò)影響線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡：對(duì)照組、Cu. DS和DS/Cu組作用于Nalm6細(xì)胞24h后收集細(xì)胞,用蛋白免疫印跡法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DS/Cu能下調(diào)Bcl-2、Bcl-xl等蛋白的表達(dá),進(jìn)而活化Caspase3等蛋白水解酶,降解其作用底物PARP蛋白,最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)論：1、不同濃度的DS/Cu對(duì)Nalm6細(xì)胞具有顯著的增殖抑制作用,且呈劑量依賴性,24h的IC50為(0.18±0.08)uM。2、不同濃度的DS/Cu能顯著誘導(dǎo)B-ALL細(xì)胞(包括Nalm6和原代B-ALL細(xì)胞)凋亡,呈劑量依賴性；同時(shí)DS/Cu能明顯的抑制Nalm6細(xì)胞集落形成。3、DS/Cu可以通過(guò)降低B-ALL細(xì)胞(包括Nalm6和原代B-ALL細(xì)胞)內(nèi)線粒體膜電位(MMP)水平,下調(diào)Bcl-2、Bcl-xl等線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白的表達(dá),活化Caspase-3、水解PARP等底物蛋白,最終誘導(dǎo)B-ALL細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：雙硫侖 銅 急性B淋巴細(xì)胞白血病 線粒體膜電位
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71
【目錄】：

• 摘要3-11
• ABSTRACT11-22
• 前言22-26
• 材料與方法26-41
• 結(jié)果41-53
• 討論53-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-67
• 攻讀學(xué)位期間成果67-68
• 致謝68-70

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 劉丹;胡秀芳;鄭艷艷;潘鶴;羅舒維;洪芳;趙文娜;姜美紅;祝云輝;邵敬偉;王文峰;;蒽醌類親脂性陽(yáng)離子的合成及抗癌活性[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);2015年06期

2 BASHIR Sajid;王婷婷;PALAKURTHI Srinath;劉靜波;;納米金屬和復(fù)合物在腫瘤診斷和治療中的應(yīng)用（英文）[J];黑龍江大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào);2014年01期

3 張曼曼;張飲江;張樂(lè)婷;黎臻;;實(shí)驗(yàn)室廢液分類及處理方法研究進(jìn)展[J];實(shí)驗(yàn)室研究與探索;2013年07期

4 鄧漫漫;蔣治武;李潔;陳凱;李鵬;周淑蕓;徐兵;;Disulfiram聯(lián)合銅對(duì)B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株增殖與凋亡影響機(jī)制探討[J];中華腫瘤防治雜志;2015年11期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 張軍波;毛細(xì)管電泳技術(shù)在疾病標(biāo)志物及食品分析中的應(yīng)用研究[D];華東師范大學(xué);2011年

2 張欣;CyPA-CD147，，Cu~(2+)-CD147溶液結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

3 李婉珍;金納米團(tuán)簇薄膜的量子化充放電現(xiàn)象研究[D];浙江大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 吳瑕;基于DNA鍵合的不對(duì)稱N，N’-雙取代草酰胺雙核銅（Ⅱ）配合物的合成、結(jié)構(gòu)及抗癌活性研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2013年

2 王詩(shī)韻;Disulfiram聯(lián)合Cu通過(guò)上調(diào)ROS-JNK及下調(diào)Nrf2、NF-κB通路靶向殺傷AML干細(xì)胞[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

3 李婷;山楂果皮、果肉多酚抑制MCF-7細(xì)胞的活性及促進(jìn)NO_2~-還原釋放NO的作用[D];陜西師范大學(xué);2014年

4 胡曉楠;蔓荊子總黃酮及紫花牡荊素對(duì)肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響[D];南華大學(xué);2014年

本文編號(hào)：888466