本文關(guān)鍵詞：VEZT在胃癌組織中的表達(dá)及其過表達(dá)載體構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 胃癌 免疫組化 VEZT 預(yù)后 真核表達(dá)載體

【摘要】：背景和目的：胃癌是多年來一直影響著人類身心健康的惡性腫瘤之一,目前其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)處于腫瘤的第四位,死亡率已處于癌癥的第二位。胃癌的發(fā)生是多個基因突變的結(jié)果,是一個多階段、多種影響因素的復(fù)雜過程。多年來,許多學(xué)者在胃癌的發(fā)生機(jī)制及預(yù)后方面做了大量研究,但是目前其發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明,且沒有一個指標(biāo)能較好地預(yù)測胃癌患者的生存期。其中,抑癌基因表達(dá)的下調(diào)是胃癌發(fā)生的一個重要原因,因此上調(diào)抑癌基因的表達(dá)為開發(fā)新型抗胃癌藥物提供了一個重要思路。VEZT基因是本課題組新近發(fā)現(xiàn)的胃癌相關(guān)候選抑癌基因,其編碼的蛋白是一種跨膜蛋白,包括三部分,即較短的膜外部、跨膜部和較長的膜內(nèi)部,其中膜內(nèi)部與肌球蛋白VⅡa (myosin Ⅶa)相連。肌球蛋白Ⅶa及其配體VEZT蛋白共同定位粘合連接于E-鈣粘蛋白上,發(fā)揮類似于E-鈣粘蛋白的作用,具有增加上皮細(xì)胞間相互粘附的作用,對保證上皮組織極性和完整性也具有重要作用。本課題組在前期的研究工作中,利用QRT-PCR技術(shù)在體外培養(yǎng)的5種胃癌細(xì)胞系及術(shù)后胃癌組織標(biāo)本中均檢測到VEZT基因的mRNA表達(dá)水平比在正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1及癌旁正常胃粘膜組織標(biāo)本中低。該研究結(jié)果表明,VEZT基因有作為胃癌相關(guān)候選抑癌基因的潛力,有望成為潛在的抗腫瘤治療靶點(diǎn)之一。但是,VEZT基因在胃癌細(xì)胞中的定位,與胃癌患者的臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系尚未完全闡明。因此,本研究對VEZT蛋白和E-鈣粘蛋白在胃癌細(xì)胞中進(jìn)行了定位,探討了VEZT蛋白在胃癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá),并分析了其與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。為了更加深入的了解VEZT在胃癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能,我們將VEZT基因克隆入pEGFP-N1構(gòu)建其過表達(dá)載體,為進(jìn)一步深入研究VEZT在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程及治療中的作用提供基礎(chǔ)。方法：通過免疫熒光技術(shù)對VEZT蛋白和E-鈣粘蛋白在SGC-7901胃癌細(xì)胞中進(jìn)行了定位,采用免疫組織化學(xué)法檢測119例術(shù)后胃癌組織標(biāo)本及其相應(yīng)癌旁正常組織中VEZT蛋白的表達(dá),并分析其與胃癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。從人腎小管上皮293T細(xì)胞中提取總RNA,利用PCR方法擴(kuò)增出VEZT基因片段,經(jīng)酶切、純化,利用DNA重組技術(shù)將目的基因片段VEZT連接于pEGFP-N1真核表達(dá)載體上,構(gòu)建重組質(zhì)粒載體,分別用酶切、1.0%瓊脂糖凝膠電泳及DNA測序、對比分析等對重組質(zhì)粒載體進(jìn)行鑒定。結(jié)果：1、VEZT蛋白主要表達(dá)于胃癌細(xì)胞的細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中,E-鈣粘蛋白主要表達(dá)于胃癌細(xì)胞膜上,兩者有部分重疊。2、胃癌組織標(biāo)本中VEZT的陽性表達(dá)率為30.25%,顯著低于相應(yīng)癌旁正常組織中VEZT的陽性表達(dá)率60.50%(P0.05)。3、胃癌組織標(biāo)本中VEZT的陽性表達(dá)率與胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(均P0.05),而與患者的年齡、腫瘤大小無相關(guān)性(均P0.05)。4、單因素生存分析顯示VEZT的表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后相關(guān)(P0.05)。5、酶切電泳分析得到的目的片段,大小與理論值一致,DNA測序、對比證實(shí)目的基因序列無突變。結(jié)論：1、VEZT蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中,部分與E-鈣粘蛋白連接。2、VEZT蛋白在胃癌組織中表達(dá)下調(diào),與胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。VEZT陽性表達(dá)是胃癌患者的獨(dú)立預(yù)后保護(hù)因素。3、VEZT基因真核過表達(dá)載體構(gòu)建成功。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 免疫組化 VEZT 預(yù)后 真核表達(dá)載體
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號說明11-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-26
• 結(jié)果26-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 附圖32-36
• 附表36-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述41-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文51-52
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭建紅 ,解軍 ,李士瑛;PTEN和VEGFPCNAbcl-2在胃癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J];中國藥物與臨床;2004年06期

，

本文編號：886536