本文關(guān)鍵詞：抑制EZH2基因表達(dá)對T細(xì)胞淋巴瘤放射敏感性的影響

  更多相關(guān)文章： EZH2 短發(fā)卡RNA 小分子抑制劑 T細(xì)胞淋巴瘤 放射

【摘要】：目的:本研究旨在探索抑制EZH2基因表達(dá)聯(lián)合放射對T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(T cell Non-Hodgkin lymphoma,T-NHL)的體外抗腫瘤作用,并闡述EZH2表達(dá)降低對放射誘導(dǎo)T-NHL細(xì)胞系Hut78與Jurkat增殖及凋亡的影響,為T-NHL的基因聯(lián)合放射治療提供新的思路和理論依據(jù)。方法:1.采用含EZH2基因序列的sh RNA慢病毒干擾載體及陰性對照(空白載體)分別感染人T細(xì)胞淋巴瘤Hut78與Jurkat細(xì)胞株。2.通過RT-q PCR和Western-blot方法測定Hut78組(Hut78、Hut78 control、Hut78 EZH2-sh RNA)及Jurkat組(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)細(xì)胞中EZH2的表達(dá)情況。3.通過MTS/PMS法測定RNA干擾沉默EZH2基因?qū)-NHL細(xì)胞系Hut78及Jurkat增殖能力及放射敏感性的影響。4.采用EZH2小分子抑制劑UNC1999單藥處理T-NHL細(xì)胞系Hut78及Jurkat,以RT-q PCR和Western-blot方法檢測藥物處理前后細(xì)胞中EZH2的表達(dá)情況。5.通過MTS/PMS法測定EZH2小分子抑制劑UNC1999單藥及聯(lián)合X線照射對Hut78及Jurkat細(xì)胞增殖及存活率的影響。6.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測EZH2小分子抑制劑UNC1999單藥及聯(lián)合X線照射對Hut78和Jurkat細(xì)胞凋亡的影響。7.通過羅丹明123(Rhodamine123)染色檢測UNC1999聯(lián)合X線照射對Hut78和Jurkat細(xì)胞線粒體膜電位的影響。8.通過Western blot檢測EZH2小分子抑制劑UNC1999單藥及聯(lián)合X線照射對Hut78和Jurkat細(xì)胞PARP剪切、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1.采用含EZH2基因序列的sh RNA慢病毒干擾載體及陰性對照感染Hut78與Jurkat細(xì)胞,以RT-q PCR檢測Hut78組(Hut78、Hut78 control、Hut78EZH2-sh RNA)及Jurkat組(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)三種細(xì)胞EZH2在m RNA水平的表達(dá)情況。結(jié)果顯示Hut78 EZH2-sh RNA及JurkatEZH2-sh RNA細(xì)胞中EZH2的表達(dá)水平分別為31.6%和46.7%,與各組空白對照細(xì)胞相比,表達(dá)水平明顯降低,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);Western-blot檢測Hut78組(Hut78、Hut78 control、Hut78 EZH2-sh RNA)及Jurkat組(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)細(xì)胞EZH2蛋白的表達(dá)水平,提示轉(zhuǎn)染EZH2-sh RNA后細(xì)胞EZH2表達(dá)明顯降低。2.MTS/PMS法檢測Hut78組(Hut78、Hut78 control、Hut78 EZH2-sh RNA)及Jurkat組(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)三種細(xì)胞的增殖情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Hut78組三種細(xì)胞的吸光度值分別為0.722±0.016,0.656±0.015和0.209±0.014;Jurkat組三種細(xì)胞的吸光度值分別為0.860±0.037,0.794±0.029和0.419±0.045;與其他兩組細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染EZH2-sh RNA的細(xì)胞增殖明顯受抑;聯(lián)合X線照射后,EZH2-sh RNA組細(xì)胞存活率顯著降低(P0.05),提示EZH2-sh RNA可增強(qiáng)放射對細(xì)胞的增殖抑制作用。3.EZH2小分子抑制劑UNC1999處理Hut78及Jurkat細(xì)胞,測算IC50值,分別為:28.59和20.28μmol/L;經(jīng)RT-q PCR和Western-blot方法驗證,細(xì)胞EZH2表達(dá)水平降低。與放射聯(lián)合應(yīng)用,對細(xì)胞的增殖抑制作用增強(qiáng),放射敏感性增加。4.流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡:EZH2小分子抑制劑UNC1999處理Hut78和Jurkat細(xì)胞,可促進(jìn)放射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。5.羅丹明123染色檢測細(xì)胞線粒體膜電位:EZH2小分子抑制劑UNC1999處理Hut78和Jurkat細(xì)胞,導(dǎo)致放射誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體膜電位降低更加明顯。6.Western blot實驗顯示:EZH2小分子抑制劑UNC1999處理Hut78和Jurkat細(xì)胞,促進(jìn)放射誘導(dǎo)的PARP剪切,抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低。結(jié)論:采用RNA干擾或小分子抑制劑降低Hut78和Jurkat細(xì)胞中EZH2的表達(dá),聯(lián)合X線照射,可增強(qiáng)放射對細(xì)胞的增殖抑制作用,促進(jìn)放射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：EZH2 短發(fā)卡RNA 小分子抑制劑 T細(xì)胞淋巴瘤 放射
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 對象和方法15-30
• 1.1 材料、試劑與儀器15-18
• 1.1.1 細(xì)胞系15
• 1.1.2 質(zhì)粒15
• 1.1.3 主要實驗試劑15-16
• 1.1.4 實驗儀器16-17
• 1.1.5 主要試劑配制17-18
• 1.2 實驗方法18-30
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18-19
• 1.2.2 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染19-20
• 1.2.3 慢病毒感染Hut78和Jurkat細(xì)胞的效果驗證20-27
• 1.2.4 MTS/PMS法檢測細(xì)胞增殖27-28
• 1.2.5 細(xì)胞凋亡檢測28-29
• 1.2.6 羅丹明123染色法檢測細(xì)胞線粒體膜電位29
• 1.2.7 Western-blot測定凋亡相關(guān)蛋白29
• 1.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析29-30
• 結(jié)果30-41
• 2.1 慢病毒介導(dǎo)EZH2-shRNA感染T細(xì)胞淋巴瘤Hut78及Jurkat細(xì)胞株30-31
• 2.2 RT-q PCR 和 Western-blot 驗證轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中 EZH2 的表達(dá)31-32
• 2.2.1 轉(zhuǎn)染后Hut78及Jurkat細(xì)胞中EZH2 mRNA的表達(dá)水平31
• 2.2.2 轉(zhuǎn)染后Hut78及Jurkat細(xì)胞中EZH2蛋白的表達(dá)水平31-32
• 2.3 MTS/PMS法檢測細(xì)胞的增殖活性32-34
• 2.3.1 EZH2-shRNA對Hut78和Jurkat細(xì)胞增殖的影響32
• 2.3.2 EZH2-shRNA聯(lián)合放射對Hut78和Jurkat細(xì)胞增殖的影響32-33
• 2.3.3 EZH2-shRNA聯(lián)合放射對Hut78和Jurkat細(xì)胞存活率的影響33-34
• 2.4 EZH2小分子抑制劑（UNC1999）處理Hut78和Jurkat細(xì)胞34
• 2.5 RT-qPCR和Western-blot檢測UNC1999處理細(xì)胞后EZH2表達(dá)水平34-35
• 2.5.1 UNC1999處理Hut78及Jurkat細(xì)胞后EZH2 mRNA的表達(dá)水平34-35
• 2.5.2 UNC1999處理Hut78與Jurkat細(xì)胞后EZH2蛋白的表達(dá)水平35
• 2.6 UNC1999對Hut78與Jurkat細(xì)胞凋亡的影響35-36
• 2.7 UNC1999聯(lián)合放射對Hut78和Jurkat細(xì)胞增殖的影響36
• 2.8 UNC1999聯(lián)合放射對Hut78和Jurkat細(xì)胞凋亡的影響36-38
• 2.9 UNC1999聯(lián)合放射對Hut78和Jurkat細(xì)胞線粒體膜電位的影響38-39
• 2.10 UNC1999聯(lián)合放射對Hut78及Jurkat細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響39-41
• 討論41-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2在腫瘤發(fā)生發(fā)展及治療中的研究進(jìn)展51-64
• 綜述參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王海茹;RNA干擾沉默STAT3基因?qū)θ撕眵[狀細(xì)胞癌放射敏感性的影響[D];吉林大學(xué);2009年

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本文編號：883633