本文關(guān)鍵詞：基于PPARγ的核定位設(shè)計聯(lián)合用藥治療肺癌

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【摘要】：癌癥已經(jīng)成為導(dǎo)致人類死亡的主要疾病之一,它的發(fā)病率逐年增加。在所有惡性腫瘤中,肺癌的發(fā)病率及致死率居首。通過對該疾病的深入研究可知,其發(fā)病原因主要包括吸煙、遺傳及環(huán)境因素等,但具體的分子機制尚不清楚。目前,針對該疾病的治療方法主要包括兩種,即傳統(tǒng)治療方法與靶向治療方法。傳統(tǒng)治療方法是指手術(shù)或射線治療等,靶向治療方法是指依據(jù)靶向的異常信號通路或蛋白設(shè)計小分子進(jìn)行治療。然而,以上兩種治療方法都不能很好的緩解該疾病,因此對該疾病有效的治療方法的探索迫在眉睫。在本文的研究中,我們首先以肺癌細(xì)胞及肺部正常細(xì)胞為實驗對象,選擇并確定了所要研究的核心靶點蛋白。而后,通過計算機虛擬篩選,找到能夠調(diào)控靶點蛋白細(xì)胞定位的靶向小分子。最后,我們根據(jù)靶點蛋白參與的生理活動的分子機制提出聯(lián)合用藥策略,并進(jìn)行實驗驗證。我們的研究得到以下結(jié)論：(1)轉(zhuǎn)錄因子PPARy作為肺癌治療研究靶點,其活性、含量及細(xì)胞定位具有重要意義。(2)通過Pubchem虛擬篩選,得到Crm1的抑制劑天然產(chǎn)物SFE,并設(shè)計其衍生物S-25。(3)SFE及S-25可高效的抑制Crm1,阻滯PPARy于核內(nèi),殺傷肺癌細(xì)胞,并且兩個小分子對肺部正常細(xì)胞幾乎沒有任何影響,毒性很低。SFE殺傷肺癌細(xì)胞的IC50值為7μM左右,衍生物S-25殺傷肺癌細(xì)胞的IC50值為250 nM左右。(4) 同時使用PPARy的激活劑TZDs及Crm1的抑制劑SFE或S-25,與單獨使用這些小分子時相比,對肺癌細(xì)胞的殺傷力可顯著提高,同時肺癌細(xì)胞的致瘤能力以及遷移能力受到顯著抑制。在本文的研究中,首次以PPARy的核定位作為治療肺癌的依據(jù),第一次發(fā)現(xiàn)天然產(chǎn)物SFE能夠抑制Crm1,并設(shè)計了其衍生物S-25。除此之外,也是首次聯(lián)合使用PPARy的激活劑與Crm1的抑制劑治療肺癌,本文提供了新的安全肺癌靶向治療策略。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 過氧化物酶體增殖激活受體 染色體區(qū)域維持蛋白1
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 1 文獻(xiàn)綜述11-27
• 1.1 肺癌11-14
• 1.1.1 肺癌的生物學(xué)特征11
• 1.1.2 肺癌的發(fā)病原因11-12
• 1.1.3 肺癌的分類12
• 1.1.4 肺癌的治療12-14
• 1.2 過氧化物酶體增殖激活受體γ(PPARγ)14-21
• 1.2.1 PPARγ的組成14-16
• 1.2.2 PPARγ的工作模式16-17
• 1.2.3 PPARγ的功能17-18
• 1.2.4 PPARγ的配體18-21
• 1.3 染色體區(qū)域維持蛋白1(Crm1)21-26
• 1.3.1 Crm1的結(jié)構(gòu)21-22
• 1.3.2 Crm1的功能22-24
• 1.3.3 Crm1的抑制劑24-26
• 1.4 PPARγ與Crm126-27
• 2 PPAR γ與肺癌27-36
• 2.1 引言27
• 2.2 實驗材料、試劑與設(shè)備27-29
• 2.2.1 實驗材料27
• 2.2.2 實驗試劑27-28
• 2.2.3 實驗設(shè)備28-29
• 2.3 實驗步驟29-32
• 2.3.1 檢測PPARγ蛋白在不同肺部細(xì)胞中的含量29-30
• 2.3.2 脂質(zhì)體介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)染30-31
• 2.3.3 測定轉(zhuǎn)染質(zhì)粒對細(xì)胞增殖的抑制31
• 2.3.4 平板克隆實驗31-32
• 2.4 實驗結(jié)果與討論32-35
• 2.4.1 PPARγ在不同肺部細(xì)胞中的含量檢測32
• 2.4.2 Flag-PPARγ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞后對其生長的影響32-34
• 2.4.3 Flag-PPARγ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞后對其增殖能力的影響34-35
• 2.5 本章小結(jié)35-36
• 3 鞭向小分子的篩選與實驗驗證36-52
• 3.1 引言36-37
• 3.2 實驗材料、試劑與設(shè)備37-39
• 3.2.1 實驗材料37
• 3.2.2 實驗試劑37-38
• 3.2.3 實驗設(shè)備38-39
• 3.3 實驗步驟39-42
• 3.3.1 靶向小分子的虛擬篩選39
• 3.3.2 靶向小分子的質(zhì)譜檢測39
• 3.3.3 使用CCK8檢測經(jīng)靶向小分子處理后的肺部細(xì)胞增殖水平39
• 3.3.4 檢測經(jīng)靶向小分子處理后的肺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期39-40
• 3.3.5 檢測經(jīng)靶向小分子處理后PPARγ在肺癌細(xì)胞中的含量40-41
• 3.3.6 測經(jīng)靶向小分子處理后PPARγ在肺癌細(xì)胞中的分布41-42
• 3.4 實驗結(jié)果與討論42-51
• 3.4.1 靶向小分子的篩選結(jié)果42-43
• 3.4.2 SFE及其衍生物S-25的質(zhì)譜檢測43-45
• 3.4.3 SFE及其衍生物S-25的IC_(50)測定結(jié)果45-46
• 3.4.5 SFE及其衍生物S-25處理肺癌細(xì)胞后細(xì)胞周期檢測結(jié)果46-47
• 3.4.6 SFE及其衍生物S-25處理肺癌細(xì)胞后核內(nèi)PPARγ的含量檢測結(jié)果47-48
• 3.4.7 SFE及其衍生物S-25處理肺癌細(xì)胞后PPARγ的分布檢測結(jié)果48-49
• 3.4.8 SFE及其衍生物S-25對肺癌細(xì)胞及肺部正常細(xì)胞的增殖抑制的對比49-51
• 3.5 本章小結(jié)51-52
• 4 TZDs對肺癌細(xì)胞的殺傷及基于PPARγ的核定位設(shè)計聯(lián)合用藥策略52-66
• 4.1 引言52-53
• 4.2 實驗材料、試劑與設(shè)備53-55
• 4.2.1 實驗材料53-54
• 4.2.2 實驗試劑54-55
• 4.2.3 實驗設(shè)備55
• 4.3 實驗步驟55-59
• 4.3.1 檢測經(jīng)TZDs處理后的肺癌細(xì)胞增殖水平55-56
• 4.3.2 檢測聯(lián)合用藥與單獨用藥時的細(xì)胞增殖水平56
• 4.3.3 檢測不同處理方法對肺癌細(xì)胞中重要蛋白的含量的影響56-58
• 4.3.4 平板克隆實驗58
• 4.3.5 細(xì)胞劃痕實驗58-59
• 4.4 實驗結(jié)果與討論59-65
• 4.4.1 TZDs對肺癌細(xì)胞的增殖抑制59-60
• 4.4.2 聯(lián)合用藥與單獨用藥對肺癌細(xì)胞增殖抑制的對比60
• 4.4.3 聯(lián)合用藥與單獨用藥對肺癌細(xì)胞中重要蛋白的含量的影響60-62
• 4.4.5 聯(lián)合用藥與單獨用藥對肺癌細(xì)胞凋亡蛋白的含量的影響62
• 4.4.6 聯(lián)合用藥與單獨用藥對肺癌細(xì)胞致瘤能力的對比62-63
• 4.4.7 聯(lián)合用藥與單獨用藥對肺癌細(xì)胞遷移能力的對比63-65
• 4.5 本章小結(jié)65-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況75-76
• 致謝76-77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：878422