本文關(guān)鍵詞：Id1基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞MG63惡性逆轉(zhuǎn)向成骨分化的影響及作用機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 骨肉瘤 分化抑制因子 增殖 遷移 分化 骨肉瘤 分化抑制因子 機(jī)制

【摘要】：第一部分Id1基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞MG63惡性逆轉(zhuǎn)向成骨分化的影響目的探討分析分化抑制因子1(Id1)基因在h MSCs、惡性程度不同的骨肉瘤細(xì)胞株143b、MG63、TE85以及人成骨細(xì)胞h FOB 1.19中的表達(dá)情況,并在MG63細(xì)胞中研究Id1基因過表達(dá)和沉默對(duì)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及細(xì)胞周期等惡性表型和成骨分化的影響。方法(1)應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)Id1基因在人h MSCs、惡性程度不同的骨肉瘤細(xì)胞株143b、MG63、TE85以及人成骨細(xì)胞h FOB 1.19中的表達(dá)情況;(2)通過重組腺病毒技術(shù)調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞MG63中Id1的表達(dá)水平,應(yīng)用RT-PCR和Western Blot技術(shù)分別在m RNA和蛋白水平確定調(diào)控效果;(3)分別應(yīng)用CCK8實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)調(diào)控MG63細(xì)胞中Id1表達(dá)水平后細(xì)胞增殖能力、遷移能力和侵襲能力等惡性表型的變化;(4)通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Id1表達(dá)水平調(diào)控后MG63細(xì)胞周期的變化;(5)應(yīng)用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)讀數(shù)法檢測(cè)調(diào)控MG63細(xì)胞中Id1表達(dá)水平后細(xì)胞成骨分化早期指標(biāo)ALP的活力變化。結(jié)果(1)Id1在h MSCs中表達(dá)較高,在三種惡性程度不同的骨肉瘤細(xì)胞株中的表達(dá)量較高且表達(dá)量與惡性程度呈現(xiàn)正相關(guān),在成骨細(xì)胞中表達(dá)最低;(2)Ad Id1重組腺病毒可以使MG63細(xì)胞中的Id1表達(dá)量增高,Adsi Id1重組腺病毒可以使MG63細(xì)胞中的Id1表達(dá)量降低(P㩳0.05);(3)Id1過表達(dá)后,MG63細(xì)胞的增殖能力、遷移能力、侵襲能力等惡性表型均增強(qiáng),Id1表達(dá)量下調(diào)后則逆轉(zhuǎn)MG63細(xì)胞的惡性表型;(4)Id1過表達(dá)后,G1期細(xì)胞比例降低,Id1表達(dá)量下調(diào)后,G1期細(xì)胞比例增高(P㩳0.05);(5)Id1表達(dá)量下調(diào)后,正常成骨分化的早期指標(biāo)堿性磷酸酶(ALP)表達(dá)量增高(P㩳0.05);結(jié)論Id1基因在具有多向分化潛能的h MSCs中表達(dá)較高,在分化成熟的成骨細(xì)胞中表達(dá)較低,在三種骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)量較高且表達(dá)量與惡性程度呈正相關(guān);Id1過表達(dá)后MG63細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力等惡性表型均增強(qiáng),且處于G1期的細(xì)胞比例降低,抑制Id1基因表達(dá)可以促使骨肉瘤細(xì)胞MG63的增殖能力、遷移能力和侵襲能力等惡性表型均減弱,處于G1期的細(xì)胞比例增高,正常成骨分化的早期指標(biāo)堿性磷酸酶(ALP)表達(dá)量增高。第二部分Id1基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞MG63惡性逆轉(zhuǎn)向成骨分化的作用機(jī)制目的探究分化抑制因子1(Id1)基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞MG63惡性逆轉(zhuǎn)向成骨分化的作用機(jī)制,為骨肉瘤的基因治療尋找關(guān)鍵靶點(diǎn),以期通過分子水平干預(yù)實(shí)現(xiàn)骨肉瘤的分化治療。方法(1)通過重組腺病毒技術(shù)調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞MG63中Id1的表達(dá)水平,應(yīng)用Western Blot技術(shù)在蛋白水平確定調(diào)控效果;(2)通過Western Blot技術(shù)在蛋白水平檢測(cè)調(diào)控Id1基因的表達(dá)后相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果(1)Adsi Id1重組腺病毒可以使MG63細(xì)胞中的Id1蛋白表達(dá)量明顯低于RFP處理組和blank組(P㩳0.05);(2)Id1表達(dá)量下調(diào)后,原癌基因c-myc蛋白表達(dá)量明顯低于RFP處理組和blank組(P㩳0.05);(3)Id1表達(dá)量下調(diào)后,侵襲相關(guān)的S100A4蛋白和TIMP1蛋白的表達(dá)量均明顯低于RFP處理組和blank組(P㩳0.05);(4)Id1表達(dá)量下調(diào)后,細(xì)胞周期相關(guān)Cyclin D1蛋白和P27蛋白的表達(dá)量均明顯低于RFP處理組和blank組(P㩳0.05);(5)Id1表達(dá)量下調(diào)后,抗凋亡相關(guān)Survivin和Bcl-2的表達(dá)量均明顯低于RFP處理組和blank組(P㩳0.05);(6)Id1表達(dá)量下調(diào)后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的chop蛋白表達(dá)量明顯低于RFP處理組和blank組(P㩳0.05),GRP78蛋白表達(dá)量明顯高于RFP處理組和blank組(P㩳0.05);(7)Id1表達(dá)量下調(diào)后,ROR2蛋白表達(dá)量明顯低于RFP處理組和blank組(P㩳0.05)。結(jié)論Id1基因表達(dá)下調(diào)可能通過下調(diào)原癌基因c-myc、侵襲相關(guān)基因S100A4和TIMP1、周期相關(guān)基因Cyclin D1、抗凋亡相關(guān)基因Survivin和Bcl-2、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因chop以及Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因ROR2的表達(dá)逆轉(zhuǎn)骨肉瘤的惡性表型并促進(jìn)其成骨分化。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 分化抑制因子 增殖 遷移 分化 骨肉瘤 分化抑制因子 機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-19
• 第一部分 Id1基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞MG63惡性逆轉(zhuǎn)并向成骨分化的影響研究19-45
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和器材19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-33
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-40
• 4 討論40-45
• 第二部分 Id1基因沉默促使骨肉瘤的惡性逆轉(zhuǎn)并成骨分化的機(jī)制探究45-59
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和器材45
• 2 實(shí)驗(yàn)方法45
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-54
• 4 討論54-59
• 全文總結(jié)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 文獻(xiàn)綜述67-76
• 參考文獻(xiàn)72-76
• 致謝76-77
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文77

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