本文關(guān)鍵詞：溶血磷脂酸對肝癌細(xì)胞遷移的影響及其相關(guān)機(jī)理研究

  更多相關(guān)文章： 溶血磷脂酸 肝癌細(xì)胞 細(xì)胞遷移 分子機(jī)理 楊氏模量

【摘要】：肝癌作為全球范圍內(nèi)最常見的癌癥之一,其發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤中分別位居第五位和第二位。近年來,肝癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)不斷增加,每年大約有70萬人死于肝癌。目前肝癌的治療方式有手術(shù)切除、放射治療和化學(xué)藥物治療等,但這些治療方法仍然不能阻止肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,如何更好的預(yù)防和治療肝癌仍然是臨床上面臨的難題。溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)是一種廣泛存在的生物活性磷脂,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生理和病理過程。研究發(fā)現(xiàn)癌變組織中LPA的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常組織,并參與了癌癥的發(fā)生和發(fā)展過程。LPA與腫瘤細(xì)胞運(yùn)動能力的變化密切相關(guān),而腫瘤細(xì)胞運(yùn)動能力的改變是癌癥惡化和轉(zhuǎn)移的前提條件。因此,探究LPA對腫瘤細(xì)胞遷移的影響及其相關(guān)機(jī)理具有十分重要的意義。已經(jīng)有研究報(bào)道了LPA對多種腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響,但由于腫瘤細(xì)胞種類繁雜,LPA對腫瘤細(xì)胞遷移的影響呈現(xiàn)出一定的組織/細(xì)胞特異性。目前,LPA對肝癌細(xì)胞遷移行為的影響特征及分子機(jī)制,人們還缺乏深入認(rèn)識。為此,本課題主要探討了LPA對肝癌細(xì)胞遷移能力的影響及其相關(guān)機(jī)理。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)LPA對肝癌細(xì)胞MHCC97H和HepG2遷移行為的影響采用Transwell法分別考察了LPA對高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞MHCC97H和低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞HepG2遷移行為的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPA能夠明顯促進(jìn)MHCC97H細(xì)胞的遷移行為,并在一定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。LPA對HepG2細(xì)胞的遷移行為沒有明顯的影響。(2)LPA受體(LPAR)在LPA促肝癌細(xì)胞遷移中的作用為了探明兩種肝癌細(xì)胞遷移行為響應(yīng)LPA出現(xiàn)差異的原因,采用RT-PCR技術(shù)分別檢測了MHCC97H和HepG2細(xì)胞中LPAR1-6的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),MHCC97H表達(dá)LPAR1、2、5和6,而HepG2表達(dá)LPAR2、3、4、5和6。結(jié)果提示,兩種肝癌細(xì)胞遷移行為對LPA響應(yīng)的差異可能是由于受體表達(dá)模式不同。進(jìn)一步采用LPAR1/3的特異性抑制劑Ki16425處理MHCC97H細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),LPA促M(fèi)HCC97H細(xì)胞的遷移行為被明顯抑制。實(shí)驗(yàn)表明,LPA可能與MHCC97H細(xì)胞上LPAR1作用介導(dǎo)了細(xì)胞的遷移行為。(3)LPA促M(fèi)HCC97H細(xì)胞遷移的相關(guān)機(jī)理為了考察RhoA/ROCK信號通路在LPA誘導(dǎo)MHCC97H細(xì)胞遷移中的可能作用,實(shí)驗(yàn)采用ROCK抑制劑Y-27632處理后觀察了MHCC97H細(xì)胞遷移對LPA響應(yīng)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組比較,ROCK抑制劑處理明顯抑制了LPA促進(jìn)的MHCC97H遷移能力(p0.01)。細(xì)胞骨架F-actin在細(xì)胞遷移過程中起重要作用。為了明確F-actin是否參與了LPA影響MHCC97H細(xì)胞遷移的過程,采用免疫染色和Western Blot檢測了LPA作用下F-actin表達(dá)變化。結(jié)果顯示,LPA能夠促進(jìn)MHCC97H細(xì)胞F-actin的表達(dá);LPAR1/3抑制劑和ROCK抑制劑能分別抑制LPA促進(jìn)的F-actin表達(dá);用細(xì)胞松弛素B解聚F-actin后,也廢除了LPA對MHCC97H細(xì)胞遷移的促進(jìn)作用。結(jié)果表明,LPA可能通過RhoA/ROCK-F-actin信號通路實(shí)現(xiàn)對MHCC97H細(xì)胞遷移的誘導(dǎo)作用。進(jìn)一步通過原子力顯微鏡分析了此過程中細(xì)胞力學(xué)特性的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPA處理后MHCC97H的楊氏模量顯著下降,表明LPA能夠降低MHCC97H細(xì)胞硬度,增加細(xì)胞的遷移能力。本文的研究表明,LPA可能與MHCC97H細(xì)胞上的LPAR1結(jié)合,通過RhoA/ROCK-F-actin信號通路上調(diào)F-actin的表達(dá),降低細(xì)胞的硬度,從而促進(jìn)MHCC97H細(xì)胞的遷移。該研究結(jié)果為全面認(rèn)識LPA對腫瘤細(xì)胞遷移的影響及分子機(jī)理提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),為臨床上腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的靶向干預(yù)提供了參考。
【關(guān)鍵詞】：溶血磷脂酸 肝癌細(xì)胞 細(xì)胞遷移 分子機(jī)理 楊氏模量
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-10
• 1 緒論10-13
• 1.1 研究背景10-11
• 1.1.1 肝癌及其危害10
• 1.1.2 溶血磷脂酸的生物學(xué)特性10
• 1.1.3 LPA與肝癌細(xì)胞運(yùn)動能力的關(guān)系10-11
• 1.1.4 LPA與細(xì)胞生物力學(xué)特性的關(guān)系11
• 1.2 本文關(guān)心的問題11-12
• 1.3 本文研究的目的、內(nèi)容和意義12-13
• 1.3.1 本文研究的目的12
• 1.3.2 本文研究的內(nèi)容和意義12-13
• 2 LPA對肝癌細(xì)胞遷移行為的影響13-22
• 2.1 引言13
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 2.2.1 細(xì)胞13
• 2.2.2 主要儀器、耗材13-14
• 2.2.3 主要藥品、試劑14
• 2.2.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制14-15
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)15
• 2.3.2 細(xì)胞遷移分析—Transwell法15-16
• 2.3.3 細(xì)胞增殖分析—細(xì)胞計(jì)數(shù)法16-17
• 2.3.4 細(xì)胞周期分析—流式細(xì)胞術(shù)17-18
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-20
• 2.4.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察18
• 2.4.2 LPA對肝癌細(xì)胞遷移能力的影響18-19
• 2.4.3 LPA對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響19-20
• 2.5 分析討論20-21
• 2.6 本章小結(jié)21-22
• 3 LPA受體在LPA促肝癌細(xì)胞遷移中的作用22-31
• 3.1 引言22-23
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 3.2.1 主要儀器、耗材23-24
• 3.2.2 主要藥品、試劑24
• 3.2.3 主要試劑的配制24
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法24-26
• 3.3.1 肝癌細(xì)胞中LPAR的表達(dá)分析——RT-PCR法24-26
• 3.3.2 LPAR1抑制后細(xì)胞遷移分析—Transwell法26
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 3.4.1 肝癌細(xì)胞中LPAR1-6 的表達(dá)26-27
• 3.4.2 Ki16425處理能夠抑制LPA誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移27
• 3.5 分析討論27-29
• 3.6 本章小結(jié)29-31
• 4 LPA促肝癌細(xì)胞遷移中的相關(guān)機(jī)理研究31-48
• 4.1 引言31-32
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料32-34
• 4.2.1 主要儀器、耗材32
• 4.2.2 主要藥品、試劑32-33
• 4.2.3 主要試劑的配制33-34
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法34-39
• 4.3.1 細(xì)胞遷移分析—Transwell法34-35
• 4.3.2 細(xì)胞中F-actin的變化分析—免疫熒光染色法35
• 4.3.3 細(xì)胞中F-actin的變化分析—Western Blot35-38
• 4.3.4 細(xì)胞楊氏模量變化分析—AFM38-39
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-45
• 4.4.1 Y-27632 處理能夠抑制LPA誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移39-40
• 4.4.2 F-actin參與了LPA誘導(dǎo)的MHCC97H遷移40-44
• 4.4.3 LPA促M(fèi)HCC97H遷移過程中細(xì)胞硬度的變化44-45
• 4.5 分析討論45-47
• 4.6 本章小結(jié)47-48
• 5 結(jié)論與展望48-50
• 5.1 主要結(jié)論48
• 5.2 后續(xù)研究工作的展望48-50
• 致謝50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附錄57
• 作者在攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄57

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本文編號：874041