本文關(guān)鍵詞：靶向載藥納米粒子的制備及對(duì)胰腺癌細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：胰腺癌是一種預(yù)后極差的惡性腫瘤,目前就胰腺癌的早期診斷及綜合治療投入巨大但效果甚微。化療作為胰腺癌治療的重要手段之一受到廣泛重視,但其生物利用度差及全身毒性等不足嚴(yán)重影響其療效。納米技術(shù)可以有效彌補(bǔ)以上不足。表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)在胰腺癌中呈過表達(dá)狀態(tài),因此可將其作為分子靶向劑標(biāo)記于納米粒子表面從而達(dá)到胰腺癌細(xì)胞靶向識(shí)別治療的目的。本研究中我們將展示一個(gè)以納米粒子為基礎(chǔ)的用于胰腺癌治療且逐步發(fā)展的遞送系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)中通過調(diào)控納米粒子制備過程的溫度、攪拌速度、穩(wěn)定劑及原料劑量等條件制備出粒徑分別為(25±7.6)nm,(49±8.6)nm,(88±20.5)nm,(145±13.5)nm,(205±8.4)nm的5種負(fù)載吲哚青綠的聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(Polybutylcyanoacrylate nanoparticles carrying Indocyanine green,ICG-PBCA-NPs)。利用紫外/可見光分光光度計(jì)測(cè)定并繪制吲哚青綠(Indocyanine green,ICG)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。選取健康雄性小鼠隨機(jī)分為7組,每組小鼠分別于給藥1,5,12h后處死,解剖獲得心、肝、脾、腎和胰腺樣品并制作成冰凍切片用于熒光觀察。另外,將給藥0.5,1,5和12h后的心、肝、脾、腎和胰腺樣品制備成勻漿,離心后以紫外可見光分光光度計(jì)測(cè)定ICG的A值,利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)ICG濃度。結(jié)果均發(fā)現(xiàn)(25±7.6)nm組于小鼠各組織中無明顯分布。胰腺組織于(49±8.6)nm粒子組熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于其他各組,肝臟、脾臟于納米粒徑為(145±13.5)nm時(shí)出現(xiàn)最強(qiáng)熒光。心臟熒光強(qiáng)度隨粒徑變化不大且較弱。另外,隨著粒徑減小ICG-PBCA-NPs在各組織中最強(qiáng)熒光出現(xiàn)時(shí)間縮短。在以上研究基礎(chǔ)上通過乳化聚合法制備粒徑大小約為50nm的負(fù)載五氟尿嘧啶聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(Polbutylcyanoacrylatenanoparticles carrying 5-fluorouracil,5-Fu-PBCA-NPs)及偶聯(lián)抗EGFR單抗的負(fù)載五氟尿嘧啶聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(EGFR-grafted polybutylcyanoacrylate nanoparticles carrying 5-fluorouracil,5-Fu-EGFR-NPs)。然后運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)5-Fu-EGFR-NPs中抗體活性。通過MTT比色法檢測(cè)50,40,30,20,10,5ug?mL-1濃度下PBCA-NPs組、5-Fu-PBCA-NPs組、5-Fu-EGFR-NPs及五氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)原藥組在12,24,48h對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生存率的抑制作用。結(jié)果提示聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(polybutylcyanoacrylate nanoparticles carrying 5-fluorouracil,PBCA-NPs)具有一定的安全性;經(jīng)靶向抗體抗EGFR單抗修飾后的5-Fu-EGFR-NPs與5-Fu-PBCA-NPs比較于24h時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),48h時(shí)顯示出明顯差異(P0.01);5-Fu裸藥組12,24h時(shí)抑瘤效果強(qiáng)于5-Fu-PBCA-NPs組(P0.05,P0.01),然而當(dāng)作用48h后5-Fu裸藥組的抑瘤效果明顯弱于5-Fu-PBCA-NPs組(P0.01);另外5-Fu-PBCA-NPs,5-Fu-EGFR-NPs及5-Fu三組抑瘤率均顯示出劑量依賴性。據(jù)以上研究可知,PBCA-NPs的粒徑大小明顯影響粒子在小鼠體內(nèi)的分布,其中粒徑大小為50 nm左右時(shí)胰腺的靶向性最好。在此基礎(chǔ)上合成粒徑約50 nm的具有主動(dòng)靶向性的5-Fu-EGFR-NPs,通過體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該粒子的胰腺癌細(xì)胞抑制作用,結(jié)果顯示抑瘤效果明顯強(qiáng)于未經(jīng)抗體修飾組。綜合以上研究結(jié)果,小粒徑載藥納米粒子經(jīng)EGFR單抗特異性修飾可能具有很好的胰腺癌治療效果。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 5-氟尿嘧啶 抗EGFR單克隆抗體 聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒 主動(dòng)靶向
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-25
• 附圖25-32
• 附表32-38
• 討論38-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-51
• 綜述 納米粒子靶向治療胰腺癌的研究進(jìn)展51-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 致謝64-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 黃樂松;王春霞;陳志良;江亮;顏志婷;彭俊祥;王羽倫;武海龍;;吉西他濱聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒對(duì)大鼠腦移植膠質(zhì)瘤的影響研究[J];中國(guó)藥房;2009年19期

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本文編號(hào)：873686