本文關(guān)鍵詞：瘧原蟲遺傳減毒子孢子的抗肺癌作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： 遺傳減毒子孢子 LLC細胞 免疫治療

【摘要】：肺癌仍然是世界上常見的惡性腫瘤之一,其中NSCLC占肺癌總數(shù)的85%,其發(fā)病率和死亡率高,意味著沒有有效的治療方法。盡管隨著外科手術(shù)、化療、放療、分子靶向藥物治療等的不斷進展,但是肺癌的療效仍然不理想。近年來對腫瘤與免疫系統(tǒng)之間關(guān)系的研究中興起了免疫治療這一新的概念,其主要通過增強機體的抗腫瘤免疫應(yīng)答,被認為最有希望的肺癌治療策略。然而,由于肺癌的免疫耐受作用,肺癌的免疫治療并不理想。因此,迫切的需要研究一些新的治療辦法。瘧原蟲遺傳減毒子孢子是一種經(jīng)遺傳操縱方式特異敲除瘧原蟲肝期發(fā)育的必要基因,得到能入侵肝實質(zhì)細胞,但發(fā)育停滯在晚期的子孢子。遺傳減毒子孢子能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生強烈CD4/CD8+T淋巴細胞反應(yīng),有效地抵御子孢子的感染和清除感染肝細胞的瘧原蟲。那么瘧原蟲遺傳減毒子孢子誘導(dǎo)機體產(chǎn)生的T淋巴細胞免疫反應(yīng)能否抗肺癌?針對這個問題我們設(shè)計了以下實驗探討,是否瘧原蟲遺傳減毒子孢子通過靜脈免疫建立的小鼠模型能發(fā)揮抗肺癌的作用并初步探討其機制。一、瘧原蟲遺傳減毒子孢子的獲得與鑒定:1、瘧原蟲遺傳減毒子孢子的獲得:遺傳減毒子孢子獲取于第三軍醫(yī)大學(xué)病原生物教研室。2、動物體內(nèi)實驗驗證瘧原蟲遺傳減毒子孢子是否減毒成功:定義遺傳減毒子孢子組為實驗組,野生型子孢子組為對照組。將遺傳減毒子孢子與野生型子孢子通過尾靜脈分別注射3×10~4/200ul給實驗組與對照組小鼠,每隔2天/次尾靜脈血涂片檢查原蟲血癥。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對照組在第6天出現(xiàn)原蟲血癥,第14天原蟲血癥達到30%,而實驗組原蟲血癥一直為0。結(jié)果表明遺傳減毒子孢子減毒成功。二、探討瘧原蟲遺傳減毒子孢子抗肺癌的作用:1、遺傳減毒子孢子免疫小鼠及LLC細胞的接種:將解剖得到的子孢子稀釋為1.5×10~5/ml的濃度,通過尾靜脈實驗組注射200ul的GAS稀釋液,對照組注射含正常按蚊唾液腺同體積的PBS液;2周后將LLC細胞懸液5×10~5/200ul皮下接種于所有小鼠的右側(cè)腹股溝。2、遺傳減毒子孢子可以抑制腫瘤生長、延長小鼠生存率:小鼠成瘤后每2天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的最大直徑a及最短橫徑b(單位為毫米mm),用公式a*b~2/2計算腫瘤體積并記錄小鼠的死亡率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)遺傳減毒子孢子可以抑制腫瘤的生長(P0.05);且延長GAS組小鼠的生存率(P=0.041)。三、瘧原蟲遺傳減毒子孢子抗肺癌作用的機制研究:1、免疫組化檢測腫瘤標(biāo)本:10%的多聚甲醛固定小鼠腫瘤標(biāo)本,石蠟包埋切片后,用Ki-67抗體、CD31抗體、Tunel凋亡檢測試劑盒,分別檢測腫瘤的增殖、血管生成及凋亡情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)遺傳減毒子孢子抑制腫瘤的增殖及血管生成,促進腫瘤細胞的凋亡。2、流式CBA方法-檢測小鼠外周血細胞因子實驗:用遺傳減毒子孢子及含正常按蚊唾液腺的PBS分別免疫小鼠后,分別取免疫后1、3、5、7、9天作為檢測點,檢測GAS組與PBS組小鼠血清中的IFN-γ,IL-6/12和TNF-α。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有檢測指標(biāo)均在免疫后快速增加。3、流式細胞儀檢測小鼠外周血CD8~+T淋巴細胞:用遺傳減毒子孢子及含正常按蚊唾液腺的PBS分別免疫小鼠后,分別取免疫后1、7、14天檢測點,流式檢測GAS組與PBS組小鼠外周血CD8+T細胞。分離白細胞后用抗體CD8-APC,CD11c-FITC標(biāo)記。流式檢測發(fā)現(xiàn)GAS組小鼠CD8+T細胞顯著增多。
【關(guān)鍵詞】：遺傳減毒子孢子 LLC細胞 免疫治療
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• Abstract5-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 1.1 選題緣由10
• 1.2 研究背景10-11
• 1.3 研究意義11
• 1.4 研究內(nèi)容11
• 1.5 研究方法11-12
• 第二章 遺傳減毒子孢子的獲得與鑒定12-15
• 2.1 材料與方法12-13
• 2.2 方法13
• 2.3 結(jié)果13-15
• 第三章 探討瘧原蟲遺傳減毒子孢子抗肺癌的作用15-20
• 3.1 材料與方法15-16
• 3.2 方法16-18
• 3.3 結(jié)果18-20
• 第四章 遺傳減毒子孢子抗肺癌作用機制的探討20-33
• 4.1 材料與方法20-21
• 4.2 方法21-25
• 4.3 結(jié)果25-29
• 4.4 討論29-33
• 全文總結(jié)33-35
• 參考文獻35-38
• 文獻綜述 寄生蟲與腫瘤38-48
• 參考文獻42-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果48-50
• 致謝50-51

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊柏林;抗子孢子抗體對鼠瘧紅外期原蟲無作用[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(寄生蟲病分冊);1974年04期

2 連惟能;球蟲的子孢子折光球的一種簡單染色方法[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1981年04期

3 黃在松;在岡比亞嬰兒中檢出先天傳遞的抗瘧原蟲子孢子抗體[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1982年06期

4 徐麟鶴,P.Rossignol;雞瘧原蟲子孢子超微結(jié)構(gòu)的觀察[J];寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1983年04期

5 潘家云;;子孢子染色方法的改進[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1984年03期

6 宗粵琦;從蚊體快速分離子孢子的簡單離心法[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1986年01期

7 徐曉春;;人環(huán)子孢子抗體對感染瘧原蟲按蚊的影響[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1990年04期

8 ;伯氏鼠瘧原蟲子孢子通過斯氏按蚊涎腺的途徑的電子顯微鏡研究[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(寄生蟲病分冊);1975年01期

9 錢會霖;;一種快速簡便檢查蚊體內(nèi)子孢子的方法[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1979年03期

10 洪守書;雞瘧原蟲子孢子的細胞表面的初步觀察[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);1982年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王黎霞;韋錚;安健;黃芳;;柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵與細胞凋亡的關(guān)系[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會、中國病理生理學(xué)會動物病理生理專業(yè)委員會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

2 郭釗義;房德文;;山東省家蠶不同類型微粒子孢子致病力調(diào)查[A];華東·華中地區(qū)第十二次蠶種學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

3 于慧珠;陳兆國;岳城;米榮升;夏延富;;微小隱孢子蟲子孢子表面抗原CP15／60基因的克隆及表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會成立大會暨第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

4 郭安;尹繼剛;向梅;劉賢英;張巖;陳啟軍;;微小隱孢子蟲子孢子與宿主黏附相關(guān)蛋白質(zhì)的篩選[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

5 喬軍;孟慶玲;才學(xué)鵬;田廣孚;景志忠;張艷;;運用SMART技術(shù)構(gòu)建斯氏艾美耳球蟲子孢子cDNA文庫[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 韓紅玉;柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊和子孢子差異表達基因的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

2 常巧呈;瘧原蟲種間鑒定及惡性瘧原蟲子孢子表面蛋白質(zhì)功能分析[D];吉林大學(xué);2011年

3 周作勇;雞Toll樣受體對Eimeria tenella的識別及信號通路研究[D];西南大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 鄧旭鋒;瘧原蟲遺傳減毒子孢子的抗肺癌作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

2 彭欲率;長角血蜱唾液腺內(nèi)呂氏泰勒蟲子孢子形態(tài)學(xué)及純化[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 郭安;微小隱孢子蟲子孢子黏附相關(guān)蛋白質(zhì)的篩選及定位[D];吉林大學(xué);2008年

4 許穎;約氏瘧原蟲子孢子侵入肝細胞相關(guān)基因及蛋白研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 鄭鴻;識別子孢子TLRs的鑒定及其抑制瘧原蟲肝期發(fā)育機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 陳繼德;約氏瘧原蟲子孢子侵入相關(guān)基因分析及235kDa棒狀體蛋白研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 彭小紅;約氏瘧原蟲子孢子與小鼠骨髓來源DC的相互作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 李巍;雞柔嫩艾美耳球蟲子孢子單鏈抗體輕重鏈可變區(qū)基因的擴增與序列分析[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

，

本文編號：865856