本文關鍵詞：肌醇六磷酸的幾種次級磷酸化形式對HT-29細胞體外生長的抑制作用

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【摘要】：目的:比較肌醇六磷酸(IP6)的不同次級磷酸化形式對人結腸癌HT-29細胞體外生長的影響,并初步探究其作用的相關機制。方法:1.應用MTT實驗檢測不同濃度IP3、IP1、IP6作用48h后,對結腸癌HT-29細胞生長的抑制率,并分別計算半數(shù)抑制濃度(the half maximal inhibitory concentration,IC50);2.流式細胞術法檢測不同濃度IP3和IP6對結腸癌HT-29細胞凋亡的發(fā)生率和細胞周期的影響;3.免疫細胞化學法檢測不同濃度IP3和IP6對HT-29細胞內PCNA、Bcl-2、Bax表達的影響;4.實時定量PCR(Real time PCR,RT-PCR)檢測不同濃度IP3和IP6對細胞癌基因P53、Bcl-2、Bax m RNA表達的影響;5.Western blot檢測IP3和IP6作用HT-29細胞后,癌基因P53表達的變化。結果:1.IP3、IP1、IP6均具有抑制HT-29細胞增殖的作用,且IP3、IP1的作用效果均優(yōu)于IP6(P0.05),尤以IP3的抑制作用最強(P0.05)。IP3、IP1、IP6作用48h對HT-29細胞的IC50值分別為2.3mmol/L、3.3mmol/L、3.5mmol/L。2.IP3和IP6均可使HT-29細胞細胞周期發(fā)生G1期阻滯,且隨著IP3和IP6干預劑量的增加,HT-29細胞停留在G1期的細胞增加,同空白對照組相比,差別具有顯著性(P0.05),其中以IP3的阻滯作用更強。與對照組相比,IP3和IP6各劑量組HT-29細胞凋亡率均有升高,并且隨著IP3和IP6干預劑量增加,細胞凋亡率逐漸升高,與IP相比,IP作用組細胞凋亡率更高(P0.05)。3.與對照組相比,不同濃度的IP3和IP6對PCNA的表達均有明顯抑制作用,可抑制Bcl-2蛋白的表達,并促進Bax蛋白的表達(P0.05)。且在相同劑量下,IP3的作用較IP6更為明顯(P0.05)。4.隨著IP3和IP6作用劑量的增加,HT-29細胞P53、Bcl-2 m RNA的表達均降低,Bax m RNA的表達增加,差別具有顯著性(P0.05)。且在相同劑量下,IP3的作用效果優(yōu)于IP6。5.與對照組相比,IP3和IP6組HT-29細胞P53蛋白表達均降低,差別具有顯著性(P0.05)。其中以IP3組下調P53蛋白的作用更明顯(P0.05)。結論:IP6的次級磷酸化形式均可有效的抑制結腸癌HT-29細胞的生長,且抑制作用效果均優(yōu)于IP6,其中尤以IP3的作用最明顯。IP3可顯著的抑制HT-29細胞PCNA、P53、Bcl-2基因的表達,并促進Bax基因的表達,從而起到抑制癌細胞增殖,誘導凋亡的作用,其作用效果顯著優(yōu)于IP6。
【關鍵詞】：肌醇六磷酸 次級磷酸化形式 HT-29細胞 細胞增殖 細胞凋亡
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要2-4
• abstract4-8
• 引言8-9
• 第一章 材料與方法9-18
• 1.1 實驗細胞系9
• 1.2 主要試劑9
• 1.3 主要儀器及設備9-10
• 1.4 細胞培養(yǎng)10
• 1.5 細胞復蘇10
• 1.6 細胞傳代10
• 1.7 細胞凍存10-11
• 1.8 MTT實驗檢測IP_3、IP_1、IP_6對結腸癌HT-29細胞增殖的影響11
• 1.8.1 干預方式11
• 1.8.2 實驗步驟11
• 1.9 流式細胞術法檢測不同濃度IP_3和IP_6對HT-29細胞周期和凋亡的影響11-12
• 1.9.1 干預方式11
• 1.9.2 不同濃度IP_3和IP_6對HT-29細胞周期分布影響11-12
• 1.9.3 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測IP_3和IP_6對HT-29細胞凋亡的影響12
• 1.10 免疫細胞化學法測定不同濃度IP_3和IP_6對HT-29細胞PCNA、Bcl-2 及Bax表達的影響12-13
• 1.10.1 干預方式12
• 1.10.2 實驗步驟12-13
• 1.10.3 實驗結果判斷13
• 1.11 實時定量PCR( RT-PCR)法檢測IP_3和IP_6對結腸癌HT-29細胞內P53、Bcl-2、Bax mRNA表達的影響13-15
• 1.11.1 干預方式13
• 1.11.2 總mRNA的提�。═rizol法）13
• 1.11.3 mRNA的純度及濃度的測定13-14
• 1.11.4 逆轉錄14
• 1.11.5 PCR擴增14-15
• 1.11.6 引物的設計與合成15
• 1.12 Western Blot檢測不同濃度IP_3和IP_6對P53蛋白表達影響15-17
• 1.12.1 干預方式15
• 1.12.2 樣品制備15-16
• 1.12.3 BCA法測定各組樣品蛋白濃度16
• 1.12.4 Western blot實驗操作步驟16-17
• 1.13 統(tǒng)計學處理分析17-18
• 第二章 結果18-31
• 2.1 不同濃度IP_3、IP_1、IP_6對結腸癌HT-29細胞增殖的影響18-19
• 2.2 不同濃度IP_3和IP_6對HT-29細胞周期分布的影響19-21
• 2.3 不同濃度IP_3和IP_6對HT-29細胞凋亡率的影響21
• 2.4 不同濃度IP_3和IP_6對HT-29細胞PCNA蛋白表達的影響21-23
• 2.5 不同濃度IP_3和IP_6對結腸癌HT-29細胞Bcl-2 mRNA及蛋白表達的影響23-26
• 2.6 不同濃度IP_3和IP_6對結腸癌HT-29細胞Bax mRNA及蛋白表達的影響26-28
• 2.7 不同濃度IP_3和IP_6對結腸癌HT-29細胞P53 mRNA及蛋白表達的影響28-31
• 第三章 討論31-34
• 第四章 結論34-35
• 參考文獻35-37
• 綜述37-46
• 綜述參考文獻42-46
• 攻讀學位期間的研究成果46-47
• 致謝47-48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 安春綿;呂曉峰;李保義;安鳳霞;;中醫(yī)藥治療原發(fā)性肝癌研究進展[J];河北中醫(yī);2010年09期

2 張海平;宋揚;;植酸鈉對誘癌大鼠結腸黏膜增殖活性的影響[J];齊魯醫(yī)學雜志;2006年02期

3 劉曉燕;宋揚;;肌醇六磷酸對結腸癌HT-29細胞分化的影響[J];齊魯醫(yī)學雜志;2008年03期

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本文編號：865812