本文關(guān)鍵詞：DAB2IP在前列腺癌中的表達(dá)及其對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究

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【摘要】：研究背景:DAB2IP目前被認(rèn)為是一種新型的候選抑癌基因,同時(shí)也是Ras-GAP家族成員,其在各系統(tǒng)腫瘤中發(fā)現(xiàn)表達(dá)廣泛缺失,并通過(guò)PI3K-Akt等信號(hào)通路介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移。多西紫杉醇是前列腺癌一線化療藥物,單獨(dú)用藥療效亟待提高,本課題擬將DAB2IP與多西紫杉醇結(jié)合進(jìn)行研究,通過(guò)構(gòu)建DAB2IP過(guò)表達(dá)載體,建立穩(wěn)定表達(dá)DAB2IP的前列腺癌細(xì)胞系,探討其對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響并初步探討其機(jī)制,旨在為前列腺癌的治療提供新的思路和作用靶點(diǎn)。第一部分DAB2IP在前列腺癌中的表達(dá)及其臨床意義目的探討DAB2IP在前列腺癌中的表達(dá)及臨床意義。方法隨機(jī)挑選43例已行術(shù)后病理診斷前列腺癌的患者,術(shù)前所有患者均未行內(nèi)分泌治療及放、化療。從病理科標(biāo)本庫(kù)中取出對(duì)應(yīng)患者的組織蠟塊,切取每例蠟塊標(biāo)本的癌組織作為實(shí)驗(yàn)組,隨機(jī)切取腫瘤附近正常組織作為對(duì)照組。運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)DAB2IP蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果光鏡下觀察到DAB2IP蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),呈棕黃色。在前列腺癌細(xì)胞中,位于腺上皮細(xì)胞,染色較淡。前列腺癌組織DAB2IP蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為25.6%;在癌旁正常前列腺組織中,位于腺上皮細(xì)胞,染色較深,前列腺癌附近正常組織中表達(dá)陽(yáng)性率為83.7%。腫瘤組織和正常組織相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論DAB2IP蛋白在前列腺癌組織較癌旁正常前列腺組織中表達(dá)水平明顯下調(diào)。第二部分DAB2IP慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞系的建立目的建立穩(wěn)定過(guò)表達(dá)DAB2IP的PC3細(xì)胞系,為探討DAB2IP在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)前列腺癌細(xì)胞的影響提供模型。方法構(gòu)建DAB2IP慢病毒表達(dá)載體,繼而轉(zhuǎn)入293FT細(xì)胞中行慢病毒包裝,利用獲得的慢病毒毒液感染人前列腺癌PC3細(xì)胞,經(jīng)過(guò)抗性篩選后獲目的細(xì)胞,提取細(xì)胞總蛋白后采用Western Blot法進(jìn)行載體驗(yàn)證。結(jié)果DAB2IP蛋白表達(dá)在轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中明顯高于對(duì)照組細(xì)胞(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建DAB2IP慢病毒表達(dá)載體,并建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染DAB2IP的前列腺癌PC3細(xì)胞系,為體外研究DAB2IP對(duì)前列腺癌細(xì)胞的增殖、遷移等影響構(gòu)建模型。第三部分DAB2IP對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞增殖及遷移能力影響的研究目的探討DAB2IP對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞增殖、遷移能力的影響。方法將轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組PC3細(xì)胞按加入多西紫杉醇濃度(10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L)各分為四組,每組以不加藥組作為空白對(duì)照,多西紫杉醇分別作用24h、48h后,運(yùn)用MTS法檢測(cè)PC3細(xì)胞的增殖活性;將轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組PC3細(xì)胞以多西紫杉醇(10-6 mol/L)作用24h,48h,不加藥組作為空白對(duì)照,采用劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移。結(jié)果MTS結(jié)果顯示:培養(yǎng)24h后,分別檢測(cè)兩組細(xì)胞的吸光度(即OD值),轉(zhuǎn)染組前列腺癌PC3細(xì)胞OD值為2.06±0.12,對(duì)照組前列腺癌PC3細(xì)胞OD值為2.44±0.15,二者相比,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞OD值明顯低于空質(zhì)粒組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);多西紫杉醇(濃度10-5mol/L)作用24h后,轉(zhuǎn)染組前列腺癌PC3細(xì)胞的增殖抑制率為(32.4±3.0)%,對(duì)照組前列腺癌PC3細(xì)胞的增殖抑制率為(29.5±4.7)%,二者相比,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖抑制率明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。多西紫杉醇其他濃度(10-6、10-7、10-8 mol/L)作用,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖抑制率明顯高于對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);DAB2IP轉(zhuǎn)染后可提高多西紫杉醇對(duì)PC3細(xì)胞的增殖抑制作用(P0.05),當(dāng)多西紫杉醇濃度為10-6 mol/L及以上時(shí)該抑制作用更為明顯(P0.05)。細(xì)胞劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示:細(xì)胞劃痕24h后,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞遷移率(21.40±3.09)%明顯低于對(duì)照組(47.31±4.18)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);換用含多西紫杉醇(10-6mol/L)培養(yǎng)液后,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞遷移率(19.12±1.12)%仍明顯低于對(duì)照組(25.49±1.96)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論DAB2IP基因轉(zhuǎn)染后可以有效抑制前列腺癌PC3細(xì)胞的增殖,提高多西紫杉醇對(duì)PC3細(xì)胞的化療作用;DAB2IP基因轉(zhuǎn)染后前列腺癌PC3細(xì)胞遷移能力下降。進(jìn)一步研究DAB2IP對(duì)前列腺癌增殖和遷移的分子機(jī)制對(duì)改善前列腺癌的治療具有指導(dǎo)意義。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 DAB2IP PC3細(xì)胞 慢病毒表達(dá)載體
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-13
• 第一部分 DAB2IP在前列腺癌中的表達(dá)及其臨床意義13-19
• 實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-16
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-17
• 討論17-18
• 結(jié)論18-19
• 第二部分DAB2IP慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞系的建立19-30
• 實(shí)驗(yàn)材料19-22
• 實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 第三部分DAB2IP對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞增殖及遷移能力影響的研究30-45
• 實(shí)驗(yàn)材料30-32
• 實(shí)驗(yàn)方法32-34
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 中英文縮略詞對(duì)照表50-51
• 攻讀期間取得成果51-52
• 致謝52

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