本文關(guān)鍵詞：基于量子點(diǎn)熒光探針的多種肺癌腫瘤標(biāo)志物同步檢測(cè)方法

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【摘要】：腫瘤標(biāo)志物的高靈敏度準(zhǔn)確定量對(duì)于提高肺癌早期診斷率、降低肺癌死亡率具有重大現(xiàn)實(shí)意義。研發(fā)出能夠高靈敏度、高通量、特異準(zhǔn)確地檢測(cè)疾病標(biāo)志物的分析方法的需求日益迫切。免疫分析作為一種蛋白質(zhì)檢測(cè)方法,因其檢測(cè)原理簡(jiǎn)單、分析表現(xiàn)優(yōu)異、具有良好的特異性與靈敏度,被廣泛應(yīng)用在蛋白質(zhì)檢測(cè)領(lǐng)域中。隨著納米技術(shù)的興起,將其應(yīng)用于免疫分析可以實(shí)現(xiàn)檢測(cè)靈敏度的大幅提高,并具有擴(kuò)展到多通道、多指標(biāo)同步檢測(cè)的能力,為疾病的早期檢測(cè)開(kāi)辟了新的機(jī)遇。本論文制備了高熒光性的量子點(diǎn)檢測(cè)探針,并構(gòu)建了一種基于量子點(diǎn)探針和免疫磁珠的多種蛋白質(zhì)同步檢測(cè)方法。主要完成了以下工作：1.制備了量子點(diǎn)熒光檢測(cè)探針和免疫磁珠捕獲探針。量子點(diǎn)具有獨(dú)特的光學(xué)、理化性質(zhì),其熒光強(qiáng)度是傳統(tǒng)熒光染料難以比擬的,而其大的體表比、表面豐富的活性基團(tuán)以及良好的生物兼容性使其能夠很好地實(shí)現(xiàn)生物功能化。本論文利用偶聯(lián)劑SMCC和還原劑DTT實(shí)現(xiàn)了對(duì)氨基化量子點(diǎn)和單克隆抗體的共價(jià)偶聯(lián),制備了具有優(yōu)異檢測(cè)靈敏度的量子點(diǎn)熒光檢測(cè)探針。以免疫磁珠作免疫反應(yīng)的固相支持物,不僅能夠獲得更好的動(dòng)力學(xué)表現(xiàn),而且還能實(shí)現(xiàn)量子點(diǎn)熒光信號(hào)富集作用。2.構(gòu)建了基于該量子點(diǎn)熒光探針和免疫磁珠的高靈敏度蛋白質(zhì)檢測(cè)方法,應(yīng)用于肺癌腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)的高靈敏度檢測(cè)。當(dāng)靶標(biāo)CEA存在時(shí),通過(guò)抗原抗體之間的特異性識(shí)別,會(huì)與量子點(diǎn)檢測(cè)探針以及捕獲探針之間發(fā)生免疫反應(yīng)形成三明治結(jié)構(gòu),利用磁力分離器對(duì)免疫復(fù)合物進(jìn)行富集后,通過(guò)檢測(cè)富集在磁珠表面的量子點(diǎn)熒光信號(hào),實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)定量的目的。該方法的檢測(cè)靈敏度為38 pg/mL,較傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫方法提高了約40倍。3.為實(shí)現(xiàn)對(duì)多種腫瘤標(biāo)志物的同步檢測(cè),提高檢測(cè)效率,本論文在已建立高靈敏度單指標(biāo)檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上,實(shí)現(xiàn)了對(duì)CEA、細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin-19 fragments, CYRFA 21-1)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)的同步檢測(cè)。篩選出三種不同發(fā)射波長(zhǎng)的量子點(diǎn),QD-525、QD-585、QD-625,分別對(duì)特異性識(shí)別NSE、CEA和CYRFA 21-1的單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記,待免疫反應(yīng)完成后,通過(guò)熒光成像分析方法對(duì)富集在磁珠表面的量子點(diǎn)熒光信號(hào)的種類(lèi)和強(qiáng)度進(jìn)行直接讀取,實(shí)現(xiàn)對(duì)多靶標(biāo)抗原的定性與定量檢測(cè)。該方法不僅靈敏度和檢測(cè)范圍滿足臨床需求,而且能夠有效地節(jié)省時(shí)間、樣品量和成本。
【關(guān)鍵詞】：量子點(diǎn) 熒光免疫分析 免疫磁珠 多指標(biāo)同步檢測(cè) 肺癌 腫瘤標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-14
• 第一章 緒論14-37
• 1.1 引言14-15
• 1.2 肺癌腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)15-22
• 1.2.1 肺癌概述15
• 1.2.2 肺癌的主要檢測(cè)手段15-16
• 1.2.3 肺癌腫瘤標(biāo)志物16-17
• 1.2.4 免疫分析概述17-20
• 1.2.5 多指標(biāo)同步檢測(cè)方法20-22
• 1.3 量子點(diǎn)概論22-29
• 1.3.1 量子點(diǎn)的光學(xué)性質(zhì)23-24
• 1.3.2 量子點(diǎn)的制備24-25
• 1.3.3 量子點(diǎn)的表面修飾及其功能化25-27
• 1.3.4 量子點(diǎn)在生物檢測(cè)中的應(yīng)用27-29
• 1.4 本課題的研究思路29
• 1.5 本章小結(jié)29-30
• 參考文獻(xiàn)30-37
• 第二章 基于量子點(diǎn)熒光探針的高靈敏度檢測(cè)方法37-51
• 2.1 引言37-38
• 2.2 實(shí)驗(yàn)原理38
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法38-42
• 2.3.1 儀器與試劑38-39
• 2.3.2 溶液配制39
• 2.3.3 捕獲探針的制備39-40
• 2.3.4 檢測(cè)探針的制備40-41
• 2.3.5 免疫反應(yīng)檢測(cè)CEA41
• 2.3.6 圖像分析41-42
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-46
• 2.4.1 基于量子點(diǎn)熒光探針的液相芯片的實(shí)驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化42-43
• 2.4.2 免疫反應(yīng)檢測(cè)CEA43-44
• 2.4.3 特異性44-45
• 2.4.4 準(zhǔn)確度和可重復(fù)性的驗(yàn)證45-46
• 2.5 討論46-47
• 2.6 本章小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 第三章 基于量子點(diǎn)熒光探針的液相芯片的多指標(biāo)同步檢測(cè)51-64
• 3.1 引言51-52
• 3.2 實(shí)驗(yàn)原理52
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法52-54
• 3.3.1 儀器與試劑52-53
• 3.3.2 溶液配制53
• 3.3.3 捕獲探針的制備53
• 3.3.4 光譜分析53
• 3.3.5 量子點(diǎn)檢測(cè)探針的制備53
• 3.3.6 免疫反應(yīng)同步檢測(cè)三種肺癌腫瘤標(biāo)志物53
• 3.3.7 圖像分析53-54
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-59
• 3.4.1 量子點(diǎn)探針的選擇54-55
• 3.4.2 交叉反應(yīng)性和光學(xué)信號(hào)干擾的考察55-56
• 3.4.3 多指標(biāo)同步檢測(cè)56-58
• 3.4.4 準(zhǔn)確度和可重復(fù)性的驗(yàn)證58-59
• 3.5 討論59-60
• 3.6 本章小結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 第四章 總結(jié)與展望64-66
• 附錄66-67
• 致謝67-68

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