本文關(guān)鍵詞：Kruppel樣因子8通過(guò)上調(diào)FLT1促進(jìn)769-P腎癌細(xì)胞株體外增殖

  更多相關(guān)文章： Kruppel樣因子8 腎透明細(xì)胞癌 調(diào)控機(jī)制

【摘要】：目的：在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O細(xì)胞株中瞬時(shí)敲低Kruppel樣因子8(Kruppel like factor 8, KLF8)的表達(dá)能夠抑制786-O細(xì)胞系的增值,但KLF8在腎癌中的作用機(jī)制并不清楚,既往的研究表明,在腎癌中VHL突變導(dǎo)致的VEGF/VEGFR、 PDGFβ/PAGFRβ、TGF/EGFR過(guò)度激活,在腎癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,本研究旨在探討過(guò)表達(dá)KL8基因?qū)δI透細(xì)胞癌細(xì)胞系769-P的增值能力的影響,以及該作用是否與上述經(jīng)典通路有關(guān),其作用靶點(diǎn)是什么。方法：應(yīng)用慢病毒包裝系統(tǒng)構(gòu)建重組KLF8質(zhì)粒,與空載體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293V細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝,再分別感染769-P細(xì)胞株,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real TimePCR)及Western blot技術(shù)檢測(cè)769-P細(xì)胞KLF8的表達(dá)情況。根據(jù)769-P細(xì)胞感染重組KLF8慢病毒或空載體將其分為兩組進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn),用平板克隆實(shí)驗(yàn)及MTS方法檢測(cè)769-P細(xì)胞增殖能力的變化,應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化。應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)潛在靶基因在過(guò)表達(dá)KLF8組和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組中的表達(dá)情況。應(yīng)用siRNA (small interference RNA)技術(shù)敲低FLT1后根據(jù)FLT1蛋白表達(dá)量篩選出敲低效果最明顯的siRNA。分別在轉(zhuǎn)染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8質(zhì)粒和pLV-EGFP (2A) Puro空載體質(zhì)粒的769-P細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siFLT1,再應(yīng)用平板克隆實(shí)驗(yàn),MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)769-P細(xì)胞株增殖能力的變化。結(jié)果：①成功篩選出高表達(dá)KLF8基因的769-P細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8組的KLF8蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著上調(diào)。②平板克隆實(shí)驗(yàn)：轉(zhuǎn)染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8組較空載體組克隆數(shù)明顯增多(P0.05). ③MTS實(shí)驗(yàn)，，在48h、72h、96h的檢測(cè)中,實(shí)驗(yàn)組在490nm吸光值顯著升高(P0.05)。④流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞周期,轉(zhuǎn)染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8組G0/G1細(xì)胞比例明顯減少S期細(xì)胞比例增加。⑤Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)FLT1在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)顯著上升。⑥應(yīng)用siFLTl敲低FLT1后,769-P細(xì)胞株的增值能力明顯下降,平板克隆實(shí)驗(yàn)：769P-KLF8+control克隆數(shù)最多,769P-KLF8+siFLT1與769P-EMPTY+control組次之，769-P-EMPTY+siFLT1克隆數(shù)最少;MTS:769P-KLF8+control組于72h,96h時(shí)間點(diǎn)在490nm處光吸收值最高,769P-KLF8+siFLT1與769P-EMPTY+control組次之，769-P-EMPTY+siFLT1最低(P0.05)。結(jié)論：KLF8基因過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系769-P的增值,并且該增值效應(yīng)依賴于FLT1(即VEGFR1)的表達(dá)升高。
【關(guān)鍵詞】：Kruppel樣因子8 腎透明細(xì)胞癌 調(diào)控機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 KLF8過(guò)表達(dá)后對(duì)腎透明細(xì)胞癌增殖能力的影響11-20
• 1. 材料與方法11-14
• 2. 結(jié)果14-19
• 3. 小結(jié)19-20
• 第二部分 KLF8過(guò)表達(dá)后靶基因的篩選及siFLT1的篩選20-26
• 1. 材料與方法20-23
• 2. 結(jié)果23-25
• 3. 小結(jié)25-26
• 第三部分 抑制FLT1表達(dá)后對(duì)769-P細(xì)胞增殖能力的影響26-30
• 1. 材料與方法26-27
• 2. 結(jié)果27-29
• 3. 小結(jié)29-30
• 討論及結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 文獻(xiàn)綜述：KLF8在腫瘤中的研究進(jìn)展33-42
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 英文略縮詞表42-43
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文43-44
• 致謝44-45

本文編號(hào)：861199