本文關鍵詞：Kruppel樣因子8通過上調(diào)FLT1促進769-P腎癌細胞株體外增殖

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【摘要】：目的：在腎透明細胞癌細胞系786-O細胞株中瞬時敲低Kruppel樣因子8(Kruppel like factor 8, KLF8)的表達能夠抑制786-O細胞系的增值,但KLF8在腎癌中的作用機制并不清楚,既往的研究表明,在腎癌中VHL突變導致的VEGF/VEGFR、 PDGFβ/PAGFRβ、TGF/EGFR過度激活,在腎癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,本研究旨在探討過表達KL8基因對腎透細胞癌細胞系769-P的增值能力的影響,以及該作用是否與上述經(jīng)典通路有關,其作用靶點是什么。方法：應用慢病毒包裝系統(tǒng)構建重組KLF8質粒,與空載體質粒分別轉染293V細胞進行病毒包裝,再分別感染769-P細胞株,利用實時熒光定量PCR技術(Real TimePCR)及Western blot技術檢測769-P細胞KLF8的表達情況。根據(jù)769-P細胞感染重組KLF8慢病毒或空載體將其分為兩組進行功能實驗,用平板克隆實驗及MTS方法檢測769-P細胞增殖能力的變化,應用流式細胞學技術檢測細胞周期變化。應用Western blot技術檢測潛在靶基因在過表達KLF8組和轉染空質粒組中的表達情況。應用siRNA (small interference RNA)技術敲低FLT1后根據(jù)FLT1蛋白表達量篩選出敲低效果最明顯的siRNA。分別在轉染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8質粒和pLV-EGFP (2A) Puro空載體質粒的769-P細胞中轉染siFLT1,再應用平板克隆實驗,MTS實驗檢測769-P細胞株增殖能力的變化。結果：①成功篩選出高表達KLF8基因的769-P細胞株,轉染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8組的KLF8蛋白表達較對照組顯著上調(diào)。②平板克隆實驗：轉染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8組較空載體組克隆數(shù)明顯增多(P0.05). ③MTS實驗，，在48h、72h、96h的檢測中,實驗組在490nm吸光值顯著升高(P0.05)。④流式細胞學檢測細胞周期,轉染pLV-EGFP (2A) Puro-KLF8組G0/G1細胞比例明顯減少S期細胞比例增加。⑤Western blot檢測發(fā)現(xiàn)FLT1在實驗組中表達顯著上升。⑥應用siFLTl敲低FLT1后,769-P細胞株的增值能力明顯下降,平板克隆實驗：769P-KLF8+control克隆數(shù)最多,769P-KLF8+siFLT1與769P-EMPTY+control組次之，769-P-EMPTY+siFLT1克隆數(shù)最少;MTS:769P-KLF8+control組于72h,96h時間點在490nm處光吸收值最高,769P-KLF8+siFLT1與769P-EMPTY+control組次之，769-P-EMPTY+siFLT1最低(P0.05)。結論：KLF8基因過表達能夠促進腎透明細胞癌細胞系769-P的增值,并且該增值效應依賴于FLT1(即VEGFR1)的表達升高。
【關鍵詞】：Kruppel樣因子8 腎透明細胞癌 調(diào)控機制
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 KLF8過表達后對腎透明細胞癌增殖能力的影響11-20
• 1. 材料與方法11-14
• 2. 結果14-19
• 3. 小結19-20
• 第二部分 KLF8過表達后靶基因的篩選及siFLT1的篩選20-26
• 1. 材料與方法20-23
• 2. 結果23-25
• 3. 小結25-26
• 第三部分 抑制FLT1表達后對769-P細胞增殖能力的影響26-30
• 1. 材料與方法26-27
• 2. 結果27-29
• 3. 小結29-30
• 討論及結論30-31
• 參考文獻31-33
• 文獻綜述：KLF8在腫瘤中的研究進展33-42
• 參考文獻38-42
• 英文略縮詞表42-43
• 攻讀學位期間發(fā)表論文43-44
• 致謝44-45

本文編號：861199