本文關鍵詞：雙氫青蒿素與阿霉素聯(lián)用對人結腸癌腫瘤細胞耐藥性的初步研究

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【摘要】：目的：腫瘤多藥耐藥現(xiàn)象對腫瘤的治療及預后有著重大影響。以HCT8/ADR人結腸癌耐藥細胞為研究對象,觀察雙氫青蒿素與阿霉素對該細胞的增殖抑制、周期調控、誘導凋亡的影響,并對兩藥合用的協(xié)同作用機制進行了初步的研究,從而為中藥聯(lián)合化療提供新的思路,同時為耐藥腫瘤臨床治療提供實驗依據(jù)及理論依據(jù)。方法：體外培養(yǎng)HCT8/ADR人結腸癌細胞,48h后收集細胞并調整好細胞數(shù)。其中①以5×103的密度鋪種于96孔板。設空白對照組,實驗組為阿霉素(DOX)組、雙氫青蒿素(DHA)組、阿霉素和雙氫青蒿素聯(lián)用組,共計4組,并設置藥物濃度如下阿霉素組(mg·L-1)為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10；雙氫青蒿素組(mg·L-1)為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10；阿霉素和雙氫青蒿素聯(lián)用組：分別固定雙氫青蒿素濃度為5 mg·L-1和10 mg·L-1,阿霉素(mg·L-1)濃度依次為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5。在孵育24h后,用MTT法分別檢測雙氫青蒿素、阿霉素及兩藥聯(lián)合對HCT8/ADR細胞的增殖影響并評估兩藥聯(lián)合的作用效果；②以5×104的密度鋪種于12孔板。設空白對照組,實驗組為阿霉素(DOX)組、雙氫青蒿素(DHA)組、阿霉素和雙氫青蒿素聯(lián)用組,共計4組,根據(jù)從①中得到的結果,調整藥物濃度,選取阿霉素組濃度分別為0.05、0.1 mg/L；雙氫青蒿素組10 mg/L。用流式細胞儀分析各組藥物濃度對細胞周期及凋亡率的影響；并采用Western blot檢測自噬。結果：1.與單用藥相比,雙氫青蒿素和阿霉素的聯(lián)用分別在10 mg/L和0.1 mg/L時就能夠使HCT8/ADR人結腸癌細胞的生存率降到50%以下。2.流式細胞術檢測顯示,雙氫青蒿素和阿霉素聯(lián)用可以誘導HCT8/TADR結腸癌細胞發(fā)生明顯凋亡,與單用藥組相比具有統(tǒng)計意義(P0.05)。3.Western blot檢測顯示,雙氫青蒿素和阿霉素聯(lián)用能夠上調自噬相關蛋白LC3-Ⅱ和下調周期蛋白CyclinD1來誘導HCT8/ADR人結腸癌細胞發(fā)生自噬。結論：雙氫青蒿素和阿霉素聯(lián)用可以抑制HCT8/ADR的增殖,能夠促使凋亡發(fā)生。通過上調自噬相關蛋白LC3-Ⅱ促使自噬體形成,通過自噬機制降解周期蛋白CyclinDl從而導致表達下降。表明雙氫青蒿素能逆轉耐藥,恢復耐藥細胞對化療藥物的敏感。
【關鍵詞】：雙氫青蒿素 阿霉素 耐藥 結腸癌 聯(lián)合用藥
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一章 文獻研究12-22
• 1.1 腫瘤的形成12
• 1.2 中醫(yī)學對腫瘤的認識12-13
• 1.3 青蒿素及其衍生物13-14
• 1.4 雙氫青蒿素的藥理活性14-17
• 1.5 雙氫青蒿素抗腫瘤機制17-18
• 1.5.1 抑制腫瘤細胞增殖17
• 1.5.2 促進腫瘤細胞凋亡17
• 1.5.3 抑制腫瘤血管形成17-18
• 1.5.4 抑制腫瘤侵襲和轉移18
• 1.6 阿霉素抗腫瘤18
• 1.7 多藥耐藥發(fā)生機制18-19
• 1.8 對抗腫瘤耐藥策略—多藥聯(lián)合19-22
• 第二章 雙氫青蒿素聯(lián)合阿霉素對HCT 8/T人結腸癌細胞增殖抑制和協(xié)同作用22-32
• 2.1 材料與儀器22-23
• 2.1.1 主要儀器22
• 2.1.2 材料22
• 2.1.3 細胞22-23
• 2.1.4 試劑配制23
• 2.2 實驗方法23-24
• 2.2.1 細胞復蘇23
• 2.2.2 細胞傳代23-24
• 2.2.3 MTT法原理24
• 2.2.4 腫瘤細胞生長抑制實驗操作24
• 2.2.5 HCT8/ADR人結腸癌細胞生長抑制實驗24
• 2.3 結果24-29
• 2.3.1 吉非替尼與伏立諾他對HCT8/ADR耐藥腫瘤細胞生長抑制實驗24-25
• 2.3.2 吉非替尼與伏立諾他分別與阿霉素聯(lián)用對HCT8/ADR人結腸癌細胞生長抑制實驗25-26
• 2.3.3 雙氫青蒿素與阿霉素聯(lián)合對HCT8/ADR人結腸癌細胞生長抑制試驗26-29
• 2.4 討論29-31
• 2.5 小結31-32
• 第三章 雙氫青蒿素聯(lián)合阿霉素對HCT 8/ADR人結腸癌細胞周期及凋亡影響32-38
• 3.1 材料與儀器32-33
• 3.1.1 主要儀器32
• 3.1.2 材料32
• 3.1.3 細胞32
• 3.1.4 試劑配制32-33
• 3.2 實驗方法33-34
• 3.2.1 細胞復蘇33
• 3.2.2 細胞傳代33-34
• 3.2.3 流式細胞術檢測細胞凋亡原理34
• 3.2.4 凋亡測試方法34
• 3.3 結果34-37
• 3.4 討論37
• 3.5 小結37-38
• 第四章 WESTERN BLOT檢測自噬蛋白和周期蛋白38-44
• 4.1. 材料與儀器38-39
• 4.1.1 主要儀器38
• 4.1.2 材料38
• 4.1.3 細胞38-39
• 4.1.4 試劑配制39
• 4.2 實驗方法39-41
• 4.2.1 BCA法測定蛋白濃度39-40
• 4.2.2 蛋白收集40
• 4.2.3 制膠40
• 4.2.4 電泳40-41
• 4.2.5 轉模41
• 4.3 結果41-42
• 4.4 討論42-43
• 4.5 小結43-44
• 結語44-46
• 參考文獻46-51
• 作者簡介51-52
• 在校期間參與發(fā)表論文情況52-53
• 致謝53-54
• 統(tǒng)計學審核證明54

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本文編號：858462