發(fā)布時間：2017-09-15 00:22

  本文關(guān)鍵詞：人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞分化及侵襲轉(zhuǎn)移作用的基礎(chǔ)研究

  更多相關(guān)文章： 胰腺癌 人參炔醇 胰腺癌干細(xì)胞 遷移與侵襲 分化

【摘要】：研究目的近年來,隨著在胰腺癌中證實(shí)有腫瘤干細(xì)胞(CSC)的存在,對胰腺癌復(fù)發(fā)、侵襲轉(zhuǎn)移形成產(chǎn)生了新的認(rèn)識和研究方向。中藥干預(yù)胰腺癌干細(xì)胞的研究也越來越多。本研究通過體外探討人參炔醇(PNN Panaxynol)對胰腺癌干細(xì)胞增殖活性的作用,并進(jìn)一步探討其對胰腺癌干細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力及干性的影響,從而為人參炔醇干預(yù)治療胰腺癌進(jìn)一步提供有效的理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法本研究通過以腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD133為篩選標(biāo)記,從胰腺癌細(xì)胞系Panc-1細(xì)胞中分離出CD133陽性細(xì)胞,在體外通過檢測細(xì)胞周期及干性相關(guān)蛋白Oct4、CD133的表達(dá)進(jìn)一步進(jìn)行鑒定。然后用人參炔醇干預(yù)胰腺癌干細(xì)胞,CCK-8實(shí)驗(yàn)篩選出最佳作用濃度及時間；進(jìn)而探討其對胰腺癌干細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移及體外分化的作用。(1)無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)和富集胰腺癌細(xì)胞系Panc-1干細(xì)胞。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測培養(yǎng)的胰腺癌Panc-1細(xì)胞的表面標(biāo)記分子CD133表達(dá)情況。(2)采用流式細(xì)胞分選術(shù)分選及鑒定胰腺癌干細(xì)胞；將分選出的細(xì)胞培養(yǎng)于無血清的培養(yǎng)基中,適時傳代。(3) Western-Blot檢測分選出的CD1334+細(xì)胞內(nèi)干性相關(guān)蛋白Oct4及CD133的表達(dá)情況。(4)流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)觀察分選出的CD133+細(xì)胞的周期分布情況。(5)采用CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后其增殖活性的影響,篩選其最佳作用濃度及時間。(6) Transwell侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)觀察胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后其遷移及侵襲能力的影響。(7) Western-Blot檢測胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后其增殖相關(guān)蛋白PCNA及遷移相關(guān)蛋白E-Cadherin、N-Cadherin及Vimentin表達(dá)的變化。(8)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后其干細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD133的變化。(9) Western-Blot檢測胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后其干性相關(guān)蛋白Oct4及CD133表達(dá)的變化。研究結(jié)果(1)無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)一段時間后,細(xì)胞呈球生長,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明無血清培養(yǎng)法能夠有效的富集CD133表型的胰腺癌細(xì)胞。(2)流式細(xì)胞分選術(shù)分選出的CD133+細(xì)胞純度98%。(3) Western-Blot檢測分選出的CD133+細(xì)胞內(nèi)干性相關(guān)蛋白Oct4及CD133表達(dá)明顯高于對照組。(4)流式細(xì)胞周期試驗(yàn)顯示CD133+細(xì)胞大多處于細(xì)胞周期靜止期(G0/G1期)。(5)CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示人參炔醇可以抑制胰腺癌干細(xì)胞的增殖活性并且呈濃度依賴性,且以人參炔醇濃度為80μg/mL作用48h后作用最明顯。(6) Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示人參炔醇可以有效抑制胰腺癌干細(xì)胞的遷移及侵襲能力并且呈濃度依賴性,且以其濃度為80μg/mL作用48h后作用最明顯。(7) Western-Blot結(jié)果顯示胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后其增殖相關(guān)蛋白PCNA表達(dá)下調(diào),遷移相關(guān)蛋白E-Cadherin表達(dá)上調(diào)及N-Cadherin、 Vimentin表達(dá)下調(diào)。(8)流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后CD133表達(dá)減少。(9)Western-Blot結(jié)果顯示胰腺癌干細(xì)胞經(jīng)人參炔醇干預(yù)后其干性相關(guān)蛋白Oct4及CD133表達(dá)下調(diào)。結(jié)論(1)本研究使用干細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD133成功分選和鑒定胰腺癌干細(xì)胞,分選出的CD133+細(xì)胞具有明顯的干細(xì)胞特性。(2)本研究主要在體外證實(shí)人參炔醇能夠有效的抑制胰腺癌干細(xì)胞的遷移及侵襲能力,此作用主要與抑制了胰腺癌干細(xì)胞的增殖活性及上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(EMT)有關(guān)。(3)本研究主要在體外證實(shí)人參炔醇可促進(jìn)胰腺癌干細(xì)胞體外分化、抑制其干性。而這一作用可能與人參炔醇抑制了胰腺癌干細(xì)胞EMT過程相關(guān)。為胰腺癌的臨床治療提供了有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 人參炔醇 胰腺癌干細(xì)胞 遷移與侵襲 分化
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-14
• 第一章 緒論14-20
• 1. 胰腺癌14
• 2. 胰腺癌干細(xì)胞14-18
• 2.1 腫瘤干細(xì)胞的背景14-15
• 2.2 胰腺癌干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)15-16
• 2.3 腫瘤干細(xì)胞的分選16-17
• 2.4 腫瘤干細(xì)胞的鑒定17
• 2.5 胰腺癌干細(xì)胞與轉(zhuǎn)移17-18
• 2.6 胰腺癌干細(xì)胞相關(guān)的信號通路及意義18
• 3. 人參炔醇18-20
• 3.1 人參炔醇的來源18-19
• 3.2 人參炔醇的藥理作用19-20
• 第二章 胰腺癌干細(xì)胞體外培養(yǎng)分離與鑒定20-33
• 2.1 材料與方法20-22
• 2.1.1 細(xì)胞株來源20
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑20-21
• 2.1.3 主要試劑制備21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)操作步驟22-27
• 2.2.1 胰腺癌細(xì)胞系Panc-1細(xì)胞培養(yǎng)22
• 2.2.2 無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)和富集胰腺癌干細(xì)胞22-23
• 2.2.3 流式細(xì)胞儀分選胰腺癌干細(xì)胞23-24
• 2.2.4 Western-Blot檢測CD133~+細(xì)胞Oct4及CD133蛋白的表達(dá)24-26
• 2.2.5 流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)步驟26
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 2.3 結(jié)果27-30
• 2.3.1 無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)及富集胰腺癌干細(xì)胞27
• 2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果27-28
• 2.3.3 流式細(xì)胞儀分選結(jié)果28-29
• 2.3.4 Western-Blot檢測結(jié)果29
• 2.3.5 流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-30
• 2.4 討論30-33
• 第三章 人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移作用研究33-45
• 3.1 材料與方法33-34
• 3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑33-34
• 3.1.2 主要試劑制備34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)操作步驟34-37
• 3.2.1 CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞的增殖能力的影響35
• 3.2.2 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)觀察人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞遷移的影響35-36
• 3.2.3 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞侵襲的影響36
• 3.2.4 Western Blot檢測人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移作用36-37
• 3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析37
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-42
• 3.3.1 CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-38
• 3.3.2 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-39
• 3.3.3 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-40
• 3.3.4 Western Blot檢測結(jié)果40-42
• 3.4 討論42-45
• 第四章 人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞分化的作用研究45-50
• 4.1 材料與方法45-46
• 4.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑45-46
• 4.1.2 主要試劑制備(參照3.1.2)46
• 4.2 實(shí)驗(yàn)操作步驟46
• 4.2.1 流式檢測人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD133的影響46
• 4.2.2 Western-Blot檢測人參炔醇對胰腺癌干細(xì)胞Oct4及CD133表達(dá)的影響46
• 4.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析46
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-48
• 4.3.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果47
• 4.3.2 Western Blot檢測結(jié)果47-48
• 4.4 討論48-50
• 第五章 結(jié)論與展望50-51
• (一) 結(jié)論50
• (二) 展望50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文59

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本文編號：853218