本文關(guān)鍵詞：自噬在人肺腺癌細(xì)胞放療抵抗形成中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：背景與目的在中國,近年來肺癌的發(fā)病率和死亡率均高居首位。全球及美國癌癥最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,癌癥新發(fā)病例數(shù)明顯增加,其中肺癌新發(fā)病例數(shù)及死亡率攀升,在男性中均為首位。肺癌根據(jù)病理類型分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85%,而肺腺癌是非小細(xì)胞肺癌最常見的組織學(xué)類型之一。肺腺癌的主要治療手段包括手術(shù)、化療、放療、分子靶向治療等。近十年來,隨著大型精確放療設(shè)備的不斷研制開發(fā),計(jì)算機(jī)技術(shù)和醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,放射治療的技術(shù)水平不斷提高,副反應(yīng)和并發(fā)癥明顯減少,放射治療已經(jīng)成為治療腫瘤的主要而有效的手段之一。肺腺癌的起病隱匿,多數(shù)患者就診時(shí)已為局部晚期或出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,往往失去根治性手術(shù)機(jī)會。術(shù)后輔助放療及放化療同步已成為臨床中常用的綜合治療策略。臨床中,放療后局部復(fù)發(fā)或未控的患者十分常見,因此,放療抵抗成為降低放射治療臨床療效、影響患者預(yù)后的主要障礙之一。腫瘤放療抵抗的機(jī)制比較多見的有:腫瘤干細(xì)胞、DNA損傷修復(fù)、腫瘤乏氧狀態(tài)、P53突變、自噬增強(qiáng)、Micro RNAs調(diào)節(jié)異常、各種生長因子過表達(dá)等。自噬是衰老的細(xì)胞器或者大分子物質(zhì)在溶酶體中降解為氨基酸、脂肪酸以及核苷酸進(jìn)行重復(fù)利用的程序性死亡過程,它在維持細(xì)胞自身動態(tài)平衡和基因組完整性中起重要作用。我們實(shí)驗(yàn)室前期用逐漸增加多西他賽濃度的方法在體外誘導(dǎo)人肺腺癌SPC-A1細(xì)胞,自建了SPC-A1耐多西他賽細(xì)胞株SPC-A1/DTX。并且,實(shí)驗(yàn)室前期研究已經(jīng)證實(shí),高水平的自噬可促進(jìn)人肺腺癌細(xì)胞對多西他賽耐藥的產(chǎn)生。而自噬怎樣參與到肺腺癌細(xì)胞放療抵抗形成的過程及機(jī)制,國內(nèi)外研究尚不充分。本研究旨在通過研究自噬對耐藥細(xì)胞放療抵抗產(chǎn)生的原因及其可能的機(jī)制,并探討了調(diào)節(jié)自噬水平對人肺腺癌細(xì)胞放療敏感性的影響。材料與方法1、采用透射電鏡觀察人肺腺癌親本細(xì)胞SPC-A1和耐藥細(xì)胞SPC-A1/DTX自噬溶酶體形成情況,兩株細(xì)胞各分為兩組:未經(jīng)放射線照射組及6Gy劑量照射組。處理后的細(xì)胞分別在透射電鏡下觀察自噬體形成情況。2、熒光顯微鏡檢測親本人肺腺癌細(xì)胞SPC-A1和耐藥細(xì)胞SPC-A1/DTX放療前后的GFP-LC3熒光密度變化,以及給予藥物(3-MA)及下調(diào)Survivin表達(dá)抑制自噬后,耐藥株株細(xì)胞GFP-LC3熒光密度變化。親本細(xì)胞與耐藥細(xì)胞比較時(shí),兩株細(xì)胞各分為兩組:未經(jīng)放射線照射組及6Gy劑量照射組;抑制自噬水平時(shí),耐藥細(xì)胞分為4組:空白對照組,3-MA/si RNA-Survivin組,6Gy/6Gy+si RNA-control照射組,3-MA/si RNA-Survivin+6Gy照射組。3、Western Blot技術(shù)測定自噬相關(guān)蛋白標(biāo)志物L(fēng)C3Ⅱ/Ⅰ、p62、beclin-1、Survivin蛋白表達(dá)變化。親本細(xì)胞與耐藥細(xì)胞比較時(shí),兩株細(xì)胞各分為兩組:未經(jīng)放射線照射組及6Gy劑量照射組。在SPC-A1/DTX細(xì)胞中,應(yīng)用自噬抑制劑3-MA預(yù)處理或使用Survivin si RNA下調(diào)Survivin表達(dá),樣品蛋白分為4組處理組:空白對照組,3-MA/si RNA-Survivin組,6Gy/6Gy+si RNA-control照射組,3-MA/si RNA-Survivin+6Gy照射組。4、流式細(xì)胞學(xué)分析凋亡和細(xì)胞周期分布變化。5、MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)分別檢測細(xì)胞生存能力和增殖能力改變情況。結(jié)果1、化療耐藥的人肺腺癌耐多西他賽細(xì)胞SPC-A1/DTX比親本細(xì)胞SPC-A1更耐受放療,接受相同放療劑量后增殖能力更強(qiáng),ED50值較高(耐藥株均值約為7.5Gy,親本株均值約為4Gy)(P0.05)。2、SPC-A1/DTX比SPC-A1自噬小體明顯增多、帶GFP標(biāo)簽的LC3熒光密度增強(qiáng),自噬相關(guān)蛋白標(biāo)志物L(fēng)C3Ⅱ/Ⅰ、p62、beclin-1表達(dá)增強(qiáng)(P0.05),提示自噬水平較高。3、放射線同時(shí)可引起兩種細(xì)胞株自噬水平的增高。給予藥物(自噬抑制劑3-MA)預(yù)先處理耐藥細(xì)胞,或者使用Survivin si RNA下調(diào)Survivin表達(dá)后給予放療,可顯著抑制自噬標(biāo)志物L(fēng)C3和beclin-1、上調(diào)p62表達(dá)(P0.05),使GFP-LC3熒光密度明顯降低,提示可顯著降低耐藥細(xì)胞的自噬水平。4、給予藥物(自噬抑制劑3-MA)預(yù)先處理耐藥細(xì)胞,或者使用Survivin si RNA下調(diào)Survivin表達(dá),可降低SPC-A1/DTX細(xì)胞生存能力和增殖能力、增加放射敏感的G2/M期細(xì)胞比例、增加凋亡率(P0.05),即增強(qiáng)了SPC-A1/DTX的放療敏感性。結(jié)論自噬為SPC-A1/DTX細(xì)胞耐受放射治療提供了一個(gè)自我保護(hù)的機(jī)制。自噬促進(jìn)人肺腺癌耐多西他賽細(xì)胞放療抵抗產(chǎn)生,而抑制自噬成為逆轉(zhuǎn)人肺腺癌細(xì)胞放、化療耐受的一個(gè)可能的策略。
【關(guān)鍵詞】：自噬 放療抵抗 人肺腺癌 3-MA Survivin 放療敏感性
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞表11-12
• 前言12-21
• 參考文獻(xiàn)16-21
• 一. 材料與方法21-35
• 二. 結(jié)果35-49
• 三. 討論49-52
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 結(jié)論與展望55-57
• 文獻(xiàn)綜述57-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 發(fā)表論文68-69
• 致謝69

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊威;李西融;;自噬基因Beclin 1與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];華夏醫(yī)學(xué);2014年03期

2 陳圓圓;劉宗亮;顏峰平;;自噬基因Beclin1與腫瘤的研究進(jìn)展[J];贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年03期

3 姚生;朱嫻穎;許霞青;解杰;王建超;;順鉑對腫瘤細(xì)胞DRAM LC3β表達(dá)的影響[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2015年02期

4 ZHONG WenYing;Lü Min;LIU LiYing;SUN JinLi;ZHONG ZengTao;ZHAO Yun;SONG HaiYun;;Autophagy as new emerging cellular effect of nanomaterials[J];Chinese Science Bulletin;2013年33期

5 謝正興;胡愛英;徐光明;劉博;魏孔亮;;碘125粒子內(nèi)放療后膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞自噬的發(fā)生[J];臨床神經(jīng)外科雜志;2013年05期

6 趙曉彪;劉冠杰;周亞龍;明玉玲;;自噬與肝癌治療的研究進(jìn)展[J];海南醫(yī)學(xué);2013年21期

7 顧昕;陳東芹;潘半舟;王銳;黃佳圓;黃桂春;陳龍邦;;自噬對人肺腺癌細(xì)胞放療敏感性的影響[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2015年04期

8 崔丹蕊;劉波;劉偉;;細(xì)胞自噬與腫瘤發(fā)生關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2015年06期

9 楊雪芬;張穎;;自噬基因Beclin1在卵巢癌中的研究進(jìn)展[J];海南醫(yī)學(xué);2015年13期

10 王棋文;王濤;王怡;袁燕;劉宗平;;Beclin-1復(fù)合物在鎘誘導(dǎo)PC12細(xì)胞自噬中的作用[J];揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2015年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Chong Zhang;Lin-yi Feng;Xiao-dan Shuai;Ya-si Xu;Dan Zhang;Da-yong Zhang;Bao-ming Wang;Li-huang Zhang;Jun-bo Wang;Jian-ping Pan;Hua Zhou;Si-cong Wang;Neng-ming Lin;;Aspirin enhanced ABT-737-induced apoptosis via regulation of PI3K pathway in human cancer cells[A];抗腫瘤藥物研究新進(jìn)展與腫瘤個(gè)性化藥物治療論壇論文集[C];2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王振波;LC3A在食管鱗癌中的放化療敏感性預(yù)測作用[D];山東大學(xué);2013年

2 鄧歡;AEG-1促進(jìn)肝癌細(xì)胞失巢凋亡抵抗的機(jī)制及自噬在其中作用的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

3 韋潁昕;硒誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞程序性死亡及作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 羅慧;AKT/β-catenin/FoxO3a信號通路在亞硒酸鈉誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡中機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 張學(xué)農(nóng);化合物RY10-4部分作用機(jī)制及抗腫瘤活性的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

6 劉虹;白介素-17A抑制GSK3β介導(dǎo)的細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)機(jī)制及其在肺纖維化中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 馬永剛;阻斷Toll樣受體-2活性改善阿霉素及缺血誘導(dǎo)的心功能障礙及心肌重塑[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

8 劉波;乙型肝炎病毒通過干擾溶酶體成熟抑制細(xì)胞自噬性降解途徑[D];浙江大學(xué);2013年

9 何衛(wèi)陽;TRAF2和RIP1介導(dǎo)的JNK激活誘導(dǎo)的自噬存活通路降低TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

10 侯靜;間充質(zhì)干細(xì)胞在輻射損傷后干性維持的機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭懿;丙戊酸誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞自噬的相關(guān)機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2013年

2 秦真真;自噬相關(guān)基因多態(tài)性與江蘇漢族人群女性乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

3 陳亞楠;自噬與卵巢上皮性癌細(xì)胞順鉑敏感性的關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

4 義軍蕾;iASPP的RNA干涉增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞對順鉑的敏感性[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

5 徐睿;自噬在A549肺腺癌細(xì)胞耐厄洛替尼中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 劉宣宣;鎘誘導(dǎo)人肝腎細(xì)胞自噬及相關(guān)蛋白作用初步研究[D];南京師范大學(xué);2013年

7 王日瑋;Beclin1基因增強(qiáng)三陰性乳腺癌細(xì)胞BT-549對多柔比星的敏感性[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

8 鐘梅;Apogossypolone聯(lián)合紫杉醇對人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

9 王莉;自噬在阿霉素誘導(dǎo)K562、K562/ADM細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制[D];蘭州大學(xué);2013年

10 邱橋成;沙門菌質(zhì)粒毒力基因spvB突變株的構(gòu)建及其對上皮細(xì)胞自噬的影響[D];蘇州大學(xué);2012年

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本文編號：850950