本文關(guān)鍵詞：光熱治療聯(lián)合免疫治療復(fù)合制劑抗腫瘤活性研究

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【摘要】：光熱治療(photothermal therapy,PTT)憑借其局部、高效、副作用小等優(yōu)勢(shì)迅速成為腫瘤治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)。其原理是利用富集在腫瘤部位的光熱試劑在入射光激發(fā)下,利用其光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)產(chǎn)生熱量,可使腫瘤局部溫度升高從而實(shí)現(xiàn)殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。納米給藥系統(tǒng)可將光熱轉(zhuǎn)換物質(zhì)通過(guò)增強(qiáng)滲透和滯留效應(yīng)(enhanced permeation and retention effect,EPR效應(yīng))靶向到腫瘤部位,可降低全身系統(tǒng)毒性,顯著提高了腫瘤治療效果。近年來(lái),免疫治療(Immune Therapy,IT)作為一種新型抗腫瘤技術(shù)備受關(guān)注。其主要目的是通過(guò)激活機(jī)體的免疫功能,增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力,從而實(shí)現(xiàn)機(jī)體自動(dòng)清除腫瘤細(xì)胞。然而,免疫治療對(duì)于實(shí)體腫瘤的治療效果具有局限性,只能作為一種輔助手段聯(lián)合其他抗腫瘤技術(shù),協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤效果。最新研究表明,PTT不僅能對(duì)腫瘤組織造成不可逆損傷,還能刺激機(jī)體的免疫功能,因此將PTT與IT聯(lián)合應(yīng)用能達(dá)到協(xié)同抗腫瘤作用。為協(xié)同發(fā)揮光熱治療和免疫治療,提高抗腫瘤效果,本文設(shè)計(jì)了由包載有機(jī)光熱試劑Cypate的脂質(zhì)體、免疫原阿霉素-牛血清蛋白(ADM-BSA)以及分子橋透明質(zhì)酸-阿霉素(HA-ADM)組成的抗腫瘤復(fù)合制劑,具體研究?jī)?nèi)容概述如下:首先簡(jiǎn)要闡述了近幾年關(guān)于光熱治療、免疫治療與激光免疫治療的研究背景以及在腫瘤治療領(lǐng)域研究進(jìn)展,并在此礎(chǔ)上闡明了本論文的立題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容。然后通過(guò)溶劑揮發(fā)法制備了Cypate脂質(zhì)體,并對(duì)其理化性質(zhì)和體內(nèi)外藥效學(xué)性質(zhì)進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Cypate脂質(zhì)體形態(tài)為球形、平均粒徑(111.9±5.94)nm、包封率(98.11±1.13)%;Cypate脂質(zhì)體同游離Cypate相比,體外升溫效果和單線(xiàn)態(tài)氧產(chǎn)量明顯提高,且具有較好的物理穩(wěn)定性。體外細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果表明,與游離Cypate相比,Cypate脂質(zhì)體細(xì)胞攝取量較高,并能定位于酸性細(xì)胞器溶酶體中,且在激光照射下具有明顯的光熱殺傷作用,4T1腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)指標(biāo)IC50降低89.99%(P0.01),而無(wú)明顯的暗毒性。在體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)中,組織分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cypate經(jīng)脂質(zhì)體包載后在腫瘤部位富集量提高了57.7%,且96 h內(nèi)在腫瘤部位仍有滯留。熱成像結(jié)果顯示,在激光照射下,濃度為3.0 mg·kg-1的Cypate脂質(zhì)體可使腫瘤部位溫度升高20℃。同時(shí),單劑量(以Cypate計(jì),3.0 mg·kg-1)尾靜脈給藥并在24小時(shí)后對(duì)腫瘤組織進(jìn)行近紅外激光照射,即可產(chǎn)生有效的抗腫瘤光熱治療效果。同時(shí)基于實(shí)驗(yàn)前期研究以及抗原-抗體和受體-配體間的相互作用理論,通過(guò)戊二醛交聯(lián)法合成外源性免疫原ADM-BSA,經(jīng)過(guò)透析純化后,采用紫外-可見(jiàn)分光光度法和傅里葉紅外分光光度法對(duì)其進(jìn)行鑒別,并通過(guò)BCA定量法計(jì)算ADM和BSA的偶聯(lián)率為12.8。然后通過(guò)ELISA法分別測(cè)定經(jīng)皮下免疫健康小鼠和荷瘤小鼠血清中抗ADM抗體,結(jié)果表明免疫原ADM-BSA具有較好的免疫原性,能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體。此外,將HA和ADM通過(guò)酰胺反應(yīng)合成分子橋HA-ADM,MTT和細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與游離ADM相比,HA-ADM對(duì)鼠源性乳腺癌細(xì)胞以及人源性宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用明顯增強(qiáng),IC50下降了86.7%,且細(xì)胞攝取量明顯提高,表明HA-ADM對(duì)腫瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。同時(shí),細(xì)胞ELISA結(jié)果表明HA-AD具有橋聯(lián)作用,使腫瘤細(xì)胞表面形成了“CD44-HA-ADM-抗ADM抗體”復(fù)合物,從而增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別作用。體內(nèi)藥效學(xué)結(jié)果顯示,以免疫原ADM-BSA和分子橋HA-ADM為基礎(chǔ)的免疫治療抑瘤率為25.55%,具有一定的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用,但治療效果有限。最后將Cypate脂質(zhì)體、免疫原ADM-BSA以及分子橋HA-ADM組成抗腫瘤復(fù)合制劑,并對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行考察。體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果表明靶向熱療聯(lián)合免疫治療具有協(xié)同抗腫瘤效果,可明顯降低腫瘤的復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)率降低了60%。此外,光熱治療還可以刺激的免疫功能,細(xì)胞因子ELISA試劑盒結(jié)果表明光熱治療結(jié)合免疫治療可明顯提高荷瘤小鼠脾臟中細(xì)胞因子白介素-12(interleukin-12,IL-12)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量。本論文構(gòu)建了聯(lián)合靶向熱療和免疫治療的抗腫瘤復(fù)合制劑,對(duì)其在癌癥治療方面的應(yīng)用進(jìn)行了較為深入的研究,并對(duì)探索激光免疫治療在腫瘤治療領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：光熱治療 免疫治療 激光免疫治療 脂質(zhì)體
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R730.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-23
• 1.1 光熱治療11-17
• 1.1.1 無(wú)機(jī)材料在光熱治療領(lǐng)域的應(yīng)用12-15
• 1.1.2 有機(jī)材料在光熱治療領(lǐng)域的應(yīng)用15-17
• 1.2 免疫治療17-19
• 1.3 激光免疫療法19-21
• 1.4 立題依據(jù)和研究?jī)?nèi)容21-23
• 第二章 Cypate脂質(zhì)體的制備、表征及其抗腫瘤效果評(píng)價(jià)23-47
• 一、引言23-24
• 二、實(shí)驗(yàn)部分24-33
• 2.1 材料24-25
• 2.2 Cypate體外分析方法的建立25
• 2.3 Cypate脂質(zhì)體的制備及表征25-27
• 2.4 Cypate脂質(zhì)體體外細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià)27-31
• 2.5 Cypate脂質(zhì)體體內(nèi)動(dòng)物學(xué)評(píng)價(jià)31-33
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論33-46
• 3.1 Cypate體外分析方法的建立33-34
• 3.2 Cypate脂質(zhì)體的制備及表征34-38
• 3.3 Cypate脂質(zhì)體體外細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià)38-42
• 3.4 Cypate脂質(zhì)體體內(nèi)動(dòng)物學(xué)評(píng)價(jià)42-46
• 四、本章小結(jié)46-47
• 第三章 基于阿霉素聯(lián)合生物大蛋白的靶向免疫治療的基礎(chǔ)研究47-67
• 一、引言47-48
• 二、實(shí)驗(yàn)部分48-56
• 2.1 材料48-49
• 2.2 免疫原的制備及表征49-51
• 2.3 免疫原的免疫原性考察51-53
• 2.4 分子橋的制備及表征53-54
• 2.5 分子橋的靶向功能考察54-55
• 2.6 分子橋連接橋作用考察55-56
• 2.7 免疫治療抗腫瘤活性的考察56
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論56-65
• 3.1 免疫原的制備與表征56-58
• 3.2 免疫原的免疫原性考察58-59
• 3.3 分子橋的制備和鑒定59-61
• 3.4 分子橋的主動(dòng)靶向性的考察61-63
• 3.5 分子橋連接橋作用考察63-64
• 3.6 免疫治療抗腫瘤活性的研究64-65
• 四、本章小結(jié)65-67
• 第四章 復(fù)合制劑抗腫瘤活性的研究67-74
• 一、引言67
• 二、實(shí)驗(yàn)部分67-70
• 2.1 材料67-68
• 2.2 復(fù)合制劑協(xié)同抗腫瘤活性的研究68-70
• 2.3 光熱治療對(duì)與免疫治療非特異性激活機(jī)體免疫功能增強(qiáng)作用的研究70
• 三、結(jié)果與討論70-72
• 3.1 復(fù)合制劑協(xié)同抗腫瘤活性的研究70-72
• 3.2 光熱治療對(duì)與免疫治療非特異性激活機(jī)體免疫功能增強(qiáng)作用的研究72
• 四、本章總結(jié)72-74
• 第五章 全文總結(jié)與展望74-76
• 5.1 論文總結(jié)74-75
• 5.2 展望75-76
• 參考文獻(xiàn)76-88
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開(kāi)發(fā)表的論著、論文88-89
• 致謝89-90

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3 王建新 江蘇建安生物科技公司創(chuàng)始人和總經(jīng)理;免疫治療60年：兩代人的承諾[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

4 董笑非;默克雪蘭諾成立免疫治療學(xué)院[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

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6 記者 李宏策;免疫治療可激活嗜中性粒細(xì)胞治療癌癥[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

7 Ben Hirschler 編譯 儲(chǔ)e，

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