本文關(guān)鍵詞：異甘草酸鎂在胃癌中的抗炎抗腫瘤作用及其機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌 炎癥 異甘草酸鎂 磷脂酶A2 ⅣA 環(huán)氧化酶2

【摘要】：胃癌是嚴(yán)重影響人類健康的消化道惡性腫瘤之一,每年有750,000人死于胃癌。多項(xiàng)研究表明,胃癌的發(fā)生和發(fā)展與炎癥密切相關(guān)。慢性炎癥反應(yīng)可以激活趨化因子,生長因子以及活性氧等物質(zhì),這些介質(zhì)可以活化胃腸道細(xì)胞的炎癥通路增加細(xì)胞循環(huán)、阻止腫瘤抑制通路、激活癌基因進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。一旦腫瘤形成后,炎癥又會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖分化抑制其凋亡,促進(jìn)血管新生和轉(zhuǎn)移進(jìn)一步導(dǎo)致腫瘤的發(fā)展。大量的動物模型已經(jīng)證實(shí)慢性炎癥與胃癌的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。控制炎癥反應(yīng)將會對胃癌的治療有著關(guān)鍵性的作用。磷脂酶A2 (phospholipase A2, PLA2)是一大類能夠在sn-2酯鍵處對磷脂進(jìn)行水解的酶類,也是酯類代謝的關(guān)鍵酶之一,它可以分解磷脂產(chǎn)生花生四烯酸(Arachdonic Acid,AA),進(jìn)一步代謝產(chǎn)生環(huán)氧化酶(cyclooxygenase, COX)和前列腺素(Prostaglandin E2, PGE2),引發(fā)炎癥反應(yīng),所以PLA2是炎癥反應(yīng)的扳機(jī)點(diǎn),位于炎癥反應(yīng)的上游,也有著“死亡開關(guān)”的稱號。多種腫瘤發(fā)生和發(fā)展與PLA2有著直接或間接的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn),與正常胃黏膜相比,胃炎和胃癌患者PLA2呈高表達(dá)狀態(tài)。課題組也在前期工作中通過代謝組學(xué)的方式篩選出了PLA2,并發(fā)現(xiàn)其與胃癌的發(fā)展有著密切的關(guān)系。根據(jù)其功能和分布共分為五類,其中胞質(zhì)型PLA2(Cytosolic phospholopase A2, cPLA2)水解膜磷脂產(chǎn)生花生四烯酸,參與多種炎癥反應(yīng)。cPLA2中的cPLA2-IVA或cPLA2a (gene PLA2G4A),是首先被證實(shí)的,也是含量最多與炎癥關(guān)系最為密切的亞型。研究發(fā)現(xiàn)cPLA2a作為前炎癥因子對胃癌的生物學(xué)功能的調(diào)控有著重要的作用。環(huán)氧化酶2(COX-2)是PLA2分解磷脂產(chǎn)生花生四烯酸后再經(jīng)過多種酶代謝后的產(chǎn)物,是目前研究較多的與癌癥密切相關(guān)的炎癥因子。在結(jié)腸癌患者中經(jīng)常見到COX-2的高表達(dá),長期服用環(huán)氧化酶(COX)的抑制劑一非甾體類抗炎藥可以顯著降低結(jié)腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。課題組也在前期的工作中發(fā)現(xiàn),COX-2的高表達(dá)與胃部腫瘤分化程度和Lauren分型密切相關(guān),提示COX-2可以作為胃癌的一個新的預(yù)后指標(biāo)。中國傳統(tǒng)中草藥甘草酸(Glycyrrhizic acid, GA)提取自甘草的根部,其藥理作用如下：抗關(guān)節(jié)炎,抗過敏,抗病毒,抗肝毒,抗炎等。經(jīng)過人體代謝甘草酸最后可以轉(zhuǎn)變?yōu)楦什荽嗡?Glycyrrhetinic acid),甘草次酸是人體內(nèi)發(fā)揮作用的主要形式。研究表明,甘草次酸可以通過抑制cPLA2/AA通路在起始階段控制炎癥反應(yīng)下調(diào)相關(guān)炎性介質(zhì)治療多種炎性疾病。異甘草酸鎂(Magnesium isoglycyrrhizinate, MgIG)是甘草次酸的第四代衍生物,因此我們推測,異甘草酸鎂是否通過抑制cPLA2a進(jìn)一步降低COX-2的表達(dá)控制炎癥反應(yīng)進(jìn)而干預(yù)胃癌的發(fā)展。本文從兩個部分進(jìn)行研究：第一部分體外研究,不同濃度異甘草酸鎂作用于胃癌細(xì)胞MFC后篩選出有效作用濃度,通過MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測藥物對細(xì)胞增殖的影響,通過流式細(xì)胞儀檢測藥物對細(xì)胞周期和凋亡的影響,并觀測細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。PT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度藥物對cPLA2α和COX-2的基因表達(dá)水平的影響,免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度藥物對cPLA2α和COX-2的蛋白表達(dá)水平的影響。第二部分體內(nèi)實(shí)驗(yàn),采用如下分組：①荷瘤小鼠+生理鹽水空白對照組②荷瘤小鼠+異甘草酸鎂低劑量組③荷瘤小鼠+異甘草酸鎂高劑量組④荷瘤小鼠+化療藥物(5-FU)組⑤荷瘤小鼠+化療藥物(5-FU)+異甘草酸鎂低劑量組⑥荷瘤小鼠+化療藥物(5-FU)+異甘草酸鎂高劑量組。觀察瘤重和瘤體積變化情況并統(tǒng)計(jì)每組實(shí)驗(yàn)鼠的生存期,通過HE檢測腫瘤組織形態(tài)學(xué)改變,通過免疫組化和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測各組cPLA2α和COX-2表達(dá)的變化情況。第一部分異甘草酸鎂干預(yù)胃癌細(xì)胞株MFC增殖的體外實(shí)驗(yàn)研究目的：異甘草酸鎂作用于胃癌細(xì)胞株MFC后,觀察在濃度設(shè)定范圍內(nèi)對其抑制效應(yīng),并在mRNA和蛋白水平檢測藥物對磷脂酶A2 IVA (cytosolic phospholipase A2 group IVA, cPLA2a)和環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase 2, COX-2)的抑制作用,并對其可能的作用機(jī)制做初步的探討。方法：不同濃度的異甘草酸鎂處理胃癌細(xì)胞株MFC后,通過細(xì)胞增殖(MTT)實(shí)驗(yàn),篩選出適宜濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),通過平板克隆實(shí)驗(yàn)觀察其對細(xì)胞增殖的抑制作用,通過流式細(xì)胞儀檢測藥物對細(xì)胞周期和凋亡的影響。采用RT-PCR的方法檢測其對cPLA2a和COX-2 mRNA水平的影響,采用Western blot的方法檢測其對cPLA2a和COX-2蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果：在已篩選的濃度范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)組與對照組相比較,胃癌細(xì)胞株MFC的增殖能力減弱(p0.05),克隆形成率明顯下降(p0.05),促進(jìn)了細(xì)胞凋亡,cPLA2a的mRNA水平和蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào),呈現(xiàn)濃度依賴性,而COX-2的mRNA水平和蛋白表達(dá)水平變化趨勢不明顯。結(jié)論：在所設(shè)定的濃度范圍內(nèi),異甘草酸鎂可以抑制胃癌細(xì)胞株MFC的增殖,并促進(jìn)其凋亡,其機(jī)制可能與抑制cPLA2a的表達(dá)有關(guān)。第二部分異甘草酸鎂干預(yù)胃癌發(fā)展的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究目的：615小鼠皮下荷瘤成功后隨機(jī)分成6組,分別給予不同濃度的抗炎藥異甘草酸鎂和與化療藥物(5-FU)聯(lián)合使用后,通過比較各組的瘤重和瘤體積大小,以及生存時間的長短,觀察異甘草酸鎂對615小鼠胃癌發(fā)展的干預(yù)作用。觀察腫瘤組織HE染色后的形態(tài)學(xué)變化,并在蛋白水平檢測其對磷脂酶A2 IVA(group IVA phospholipase A2,cPLA2a)和環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase 2, COX-2)的抑制作用。方法：選取4到6周齡的雄性615小鼠72只,建立胃癌MFC細(xì)胞株皮下荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后隨機(jī)分為6組,每組12只。組別分別為：荷瘤小鼠+生理鹽水空白對照組、荷瘤小鼠+異甘草酸鎂低劑量(50mg/kg)處理組、荷瘤小鼠+異甘草酸鎂高劑量(200mg/kg)處理組、荷瘤小鼠+化療藥物(5-FU)處理組、荷瘤小鼠+化療藥物(5-FU)聯(lián)合異甘草酸鎂低劑量(50mg/kg)處理組、荷瘤小鼠+化療藥物(5-FU)聯(lián)合異甘草酸鎂高劑量(200mg/kg)處理組。藥物作用14天后,通過測量比對各組腫瘤組織的體積、重量以及cPLA2a和COX-2表達(dá)的情況探討異甘草酸鎂的抗炎抗腫瘤活性及其作用機(jī)制。結(jié)果：藥物作用14天后,異甘草酸鎂高劑量組、化療藥物組、化療藥物與異甘草酸鎂低劑量聯(lián)合應(yīng)用組以及化療藥物與異甘草酸鎂高劑量聯(lián)合應(yīng)用組與生理鹽水空白對照組相比較,瘤重減輕(p0.05),瘤體積縮小(p0.01),生存時間有所延長(m0.05)。cPLA2a和COX-2的蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)。腫瘤組織形態(tài)學(xué)HE染色沒有明顯變化。結(jié)論：異甘草酸鎂在體內(nèi)可以干預(yù)胃癌的發(fā)展,其機(jī)制可能與抑制炎癥因子cPLA2a和COX-2的表達(dá)相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 炎癥 異甘草酸鎂 磷脂酶A2 ⅣA 環(huán)氧化酶2
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 縮略詞表13-14
• 前言14-18
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第一部分 異甘草酸鎂干預(yù)胃癌細(xì)胞株MFC增殖的體外實(shí)驗(yàn)研究18-43
• 材料及方法20-31
• 一、材料及儀器20-23
• 二、實(shí)驗(yàn)方法23-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-39
• 一、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-32
• 二、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果32
• 三、低、中、高劑量的異甘草酸鎂作用細(xì)胞72h后,細(xì)胞形態(tài)變化32-33
• 四、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)33-35
• 五、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)35-36
• 六、RT-PCR結(jié)果36-37
• 七、Western blot結(jié)果37-39
• 討論39-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 第二部分 異甘草酸鎂干預(yù)胃癌發(fā)展的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究43-62
• 材料及方法45-51
• 一、材料及儀器45-47
• 二、實(shí)驗(yàn)方法47-51
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-60
• 一、用藥后各組小鼠腫瘤組織51
• 二、用藥后各組小鼠瘤重變化51-52
• 三、用藥后各組小鼠瘤體積變化52-53
• 四、用藥后各組小鼠的生存期53-54
• 五、各組小鼠腫瘤組織HE染色結(jié)果54-56
• 六、各組小鼠腫瘤組織免疫組化結(jié)果56-59
• 七、小鼠腫瘤組織Western blot結(jié)果59-60
• 討論60-62
• 全文小結(jié)62-64
• 參考文獻(xiàn)64-66
• 綜述66-71
• 參考文獻(xiàn)69-71
• 就讀期間發(fā)表論文及所獲獎項(xiàng)71-72
• 致謝72-73

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 董方圓;王杰軍;;甘草次酸及其衍生物的抗炎機(jī)制[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

2 Rui Yang;Li-qiang Wang;Ying Liu;;Antitumor Activities of Widely-used Chinese Herb—Licorice[J];Chinese Herbal Medicines;2014年04期

3 李志強(qiáng);夏春輝;劉孜卓;張印綱;;異甘草酸鎂注射液治療肝硬化患者有效性和安全性的系統(tǒng)評價(jià)[J];實(shí)用肝臟病雜志;2015年04期

4 王宇明;于樂成;;肝臟炎癥及其防治專家共識[J];中國實(shí)用內(nèi)科雜志;2014年02期

5 王霄;羅婷;李虹娟;段志青;王陳蕓;王海漩;胡云章;胡凝珠;;兩種佐劑甘草酸二銨和苦參素對甲型肝炎病毒抗原誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響[J];中國生物制品學(xué)雜志;2014年04期

6 木合布力·阿布力孜;王永波;高苗苗;徐方野;盛磊;熱娜·卡斯木;;甘草次酸-順鉑復(fù)合物的制備及其對人肝癌Bel-7402細(xì)胞的抗癌活性研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2014年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 靳雪源;丙型病毒性肝炎聯(lián)合治療藥物相互作用及肝靶向利巴韋林的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

2 李娟;血清細(xì)胞因子和microRNA檢測在宮頸疾病中的臨床應(yīng)用價(jià)值[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 高苗苗;甘草次酸抗癌復(fù)合物及查爾酮類化合物的合成和抗癌活性研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

2 李啟杰;復(fù)方甘草酸苷誘導(dǎo)抗病毒分子及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的體外研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2013年

3 李松;甘草酸對人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的作用及其機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

4 司常云;α體甘草酸制劑治療輕癥自身免疫性肝炎的療效[D];鄭州大學(xué);2014年

，

本文編號：846085