發(fā)布時(shí)間：2017-09-13 16:24

  本文關(guān)鍵詞：中草藥貓眼草提取物誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡的研究

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【摘要】：目的觀察貓眼草提取物在體外誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖抑制作用;探討貓眼草誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細(xì)胞細(xì)胞凋亡的能力,并分析其可能發(fā)生的作用機(jī)制。方法采用體外培養(yǎng)技術(shù),以不同濃度貓眼草(0.2 g/L,0.4 g/L,0.8 g/L,1.6g/L,3.2 g/L)作用于人胃癌SGC-7901細(xì)胞,用MTT比色法檢測(cè)不同濃度的貓眼草對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的影響;熒光顯微鏡下觀察SGC-7901細(xì)胞凋亡形態(tài)變化;應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率及凋亡周期變化;通過(guò)免疫組化法檢測(cè)胃癌SGC-7901細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果1、MTT法測(cè)定不同濃度貓眼草的對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901作用24h、48h、72h均有明顯的抑制作用,與對(duì)照組相比有顯著的差異性(P0.05),且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),其產(chǎn)生的抑制作用越明顯,表現(xiàn)出時(shí)間及劑量依賴性。2、相差顯微鏡下觀察不同濃度的貓眼草處理的SGC-7901細(xì)胞后與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化,生長(zhǎng)緩慢,其貼壁狀態(tài)差,細(xì)胞邊緣不整、出現(xiàn)皺縮、變圓,形態(tài)變差,失去了正常細(xì)胞形態(tài)。3、熒光顯微鏡下觀察不同濃度的貓眼草處理的SGC-7901細(xì)胞后,與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞較對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢較稀疏,細(xì)胞體積變圓、變小,細(xì)胞核出現(xiàn)固縮,細(xì)胞質(zhì)濃縮;折光性變強(qiáng),呈現(xiàn)不規(guī)則形狀,呈致密強(qiáng)熒光,DNA濃縮并向核膜靠攏,有少量凋亡小體形成4、流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期分析顯示,細(xì)胞經(jīng)貓眼草處理后,在G1和S期細(xì)胞數(shù)比率減少,而在G2/M期細(xì)胞數(shù)比率增加,貓眼草可能通過(guò)阻斷胃癌SGC-7901細(xì)胞在G2/M期,誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡,且細(xì)胞周期阻滯效應(yīng)和凋亡率均呈劑量依賴性。5、細(xì)胞免疫組化結(jié)果表明,SGC-7901細(xì)胞胞漿內(nèi)有Bcl-2表達(dá),棕黃色顆粒較多,強(qiáng)陽(yáng)性細(xì)胞較多,棕黃色顆粒增多,大部分表達(dá)較強(qiáng),隨著貓眼草濃度的加大,SGC-7901細(xì)胞表達(dá)Bcl-2蛋白隨著時(shí)間、劑量的增加而陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低,著色變淡,強(qiáng)陽(yáng)性染色的比例減少,棕黃色不表達(dá)或較弱表達(dá)。結(jié)論1.MTT結(jié)果顯示,在一定范圍內(nèi)貓眼草可明顯抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖,與對(duì)照組相比均有顯著的差異性(P0.05),并隨著劑量的增加和時(shí)間的延長(zhǎng),凋亡率越發(fā)明顯。2.通過(guò)倒置相差顯微鏡和熒光顯微鏡的觀察,鏡下見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,可清楚的看到凋亡小體,證實(shí)了貓眼草提取物可誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細(xì)胞發(fā)生凋亡。3.流式細(xì)胞術(shù)表明不同濃度的貓眼草可以改變細(xì)胞周期,實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞周期G2/M期抑制比率增加明顯,表明貓眼草可阻滯SGC-7901細(xì)胞在G2/M期并誘導(dǎo)其凋亡。4.免疫組化顯示不同藥物濃度貓眼草作用于人胃癌SGC-7901細(xì)胞,結(jié)果表明SGC-7901細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)下調(diào),細(xì)胞凋亡可能與貓眼草下調(diào)Bcl-2的表達(dá)有關(guān),Bcl-2作為抑制細(xì)胞凋亡的基因之一,下調(diào)Bcl-2基因可能是誘導(dǎo)凋亡的重要作用機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：貓眼草 胃癌 SGC-7901 MTT法 流式細(xì)胞術(shù) 免疫組化
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中英文對(duì)照縮略詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-28
• 討論28-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 綜述37-43
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 致謝43-44
• 碩士期間發(fā)表論文44

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本文編號(hào)：844759