本文關(guān)鍵詞：RASSF2A基因在乳腺癌中表達(dá)及異常甲基化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的在許多癌癥中,腫瘤抑制基因RASSF2A由于其啟動(dòng)子的甲基化而失活,本實(shí)驗(yàn)的研究目的是對(duì)于RASSF2A基因在乳腺癌中表達(dá)及異常甲基化的探究。方法(1)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測2株人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MDA-MB-231和1株正常乳腺上皮細(xì)胞系HBL-100中RASSF2A基因m RNA表達(dá)水平,以及這2株人乳腺癌細(xì)胞系在不同濃度去甲基化藥物5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-Cd R)連續(xù)處理5天前后RASSF2A基因m RNA表達(dá)水平變化;同時(shí)運(yùn)用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR,MSP)技術(shù)對(duì)這2株人乳腺癌細(xì)胞和1株正常乳腺上皮細(xì)胞RASSF2A基因甲基化狀態(tài)進(jìn)行對(duì)比檢測分析。(2)收取42例乳腺癌及其癌旁正常組織標(biāo)本,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和MSP技術(shù)分別檢測RASSF2A表達(dá)水平和其啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀態(tài),分析RASSF2A甲基化與乳腺癌主要臨床病理特征參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和MDA-MB-231中RASSF2A m RNA表達(dá)水平降低,其中MCF-7的表達(dá)水平更低,與正常乳腺上皮細(xì)胞系中該基因表達(dá)水平相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P1=0.000;P2=0.000);MSP結(jié)果證實(shí)這2株癌細(xì)胞系的RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)域均存在完全甲基化,而正常乳腺上皮細(xì)胞未出現(xiàn)甲基化改變;但經(jīng)5-Aza-Cd R去甲基化處理3天后,乳腺癌細(xì)胞系RASSF2A m RNA表達(dá)水平又開始升高,并在一定程度上存在時(shí)間和劑量的依賴性,尤以MCF-7為明顯。這說明在MCF-7和MDA-MB-231中,RASSF2A基因表達(dá)異常是甲基化修飾致基因表達(dá)沉默的結(jié)果。針對(duì)臨床42例乳腺癌組織標(biāo)本的驗(yàn)證研究顯示,RASSF2A m RNA在癌組織的表達(dá)水平較癌旁正常組織明顯降低(P=0.016),其中17(17/42)例低表達(dá)者乳腺癌組織表現(xiàn)為RASSF2A啟動(dòng)子甲基化,而相匹配的42例癌旁正常乳腺組織中均未檢測到RASSF2A啟動(dòng)子甲基化(P=0.000)。乳腺癌中RASSF2A啟動(dòng)子甲基化與病人的年齡、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、TNM分期、ER、PR和Her2狀態(tài)、以及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性均無顯著相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論在人乳腺癌細(xì)胞系和乳腺癌癌組織中RASSF2A m RNA表達(dá)水平降低,其原因經(jīng)體外細(xì)胞學(xué)研究證實(shí)與該基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化密切相關(guān);進(jìn)一步臨床組織標(biāo)本的研究也表明癌組織中存在RASSF2A啟動(dòng)子甲基化而配對(duì)的癌旁正常乳腺組織無異常甲基化。RASSF2A啟動(dòng)子甲基化可能抑制了該基因轉(zhuǎn)錄,使其失去抑癌基因的功效,從而在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到一定的促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 甲基化 RASSF2A
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分RASSF2A基因在乳腺癌中表達(dá)及異常甲基化的體外細(xì)胞學(xué)研究11-34
• 1.背景11
• 2.材料11-16
• 3.方法16-25
• 4.結(jié)果25-32
• 5.討論32-34
• 第二部分RASSF2A基因在乳腺癌中表達(dá)及異常甲基化的臨床組織標(biāo)本的研究34-47
• 1. 背景34
• 2. 材料34-35
• 3. 方法35-38
• 4. 結(jié)果38-45
• 5.討論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 文獻(xiàn)綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 附錄 1:主要中英文縮略詞表59-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況60-61
• 致謝61

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