本文關(guān)鍵詞：EZH2下調(diào)對T細(xì)胞淋巴瘤的增殖及化療敏感性的影響

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【摘要】：目的:T細(xì)胞淋巴瘤(TCL)是來源于T細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病,占所有淋巴瘤的12%~15%。其病理類型繁雜,是一種侵襲性較強(qiáng),生物學(xué)行為及臨床表現(xiàn)具有明顯異質(zhì)性的一類惡性淋巴腫瘤。該病另一重要特點(diǎn)是其發(fā)病率具有明顯的種族及地區(qū)差異性,在HTLV-1流行的亞洲國家發(fā)病率更高。而大多數(shù)TCL對傳統(tǒng)的經(jīng)典治療方案療效較差。臨床上亟需尋找到新的治療方法。EZH2蛋白是重要的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶分子,依靠其高度保守的SET結(jié)構(gòu)域可以甲基化H3K27,三甲基化的H3K27可以將PRC1復(fù)合物招募到特定的基因位點(diǎn),沉默與細(xì)胞分化、抑制增殖在內(nèi)的基因,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。前期免疫組化顯示TCL組織中EZH2高表達(dá)。所以本實(shí)驗(yàn)旨在通過慢病毒介導(dǎo)的EZH2-sh RNA及EZH2抑制劑UNC1999處理hut78細(xì)胞系,觀察EZH2對細(xì)胞增殖、凋亡的影響;及與化療聯(lián)合后的協(xié)同增敏作用。為EZH2抑制劑應(yīng)用到臨床治療中提供理論基礎(chǔ)。同時(shí),從凋亡、耐藥及粘附轉(zhuǎn)移三方面探討EZH2的相關(guān)調(diào)控機(jī)制。方法:1.利用慢病毒介導(dǎo)的EZH2-sh RNA轉(zhuǎn)染人T細(xì)胞淋巴瘤hut78構(gòu)建EZH2下調(diào)的單克隆細(xì)胞系,在RT-q PCR和Western-blot進(jìn)行驗(yàn)證的基礎(chǔ)上,采用MTS、Brdu、流式檢測靶基因EZH2下調(diào)后對Hut78細(xì)胞增殖凋亡的影響。2.采用多種臨床常用化療藥物(阿霉素、環(huán)磷酰胺、長春新堿、順鉑、氟達(dá)拉濱、地塞米松)梯度處理hut78、hut78 control及hut78 EZH2-sh RNA,利用MTS檢測化療藥物對三種細(xì)胞系細(xì)胞增殖的影響。3.采用EZH2小分子抑制劑UNC1999梯度處理hut78,MTS檢測其對hut78細(xì)胞增殖抑制情況。同時(shí)聯(lián)合化療藥物梯度處理hut78,觀察化療增敏情況。4.采用RT-q PCR或Western-blot方法,從細(xì)胞凋亡及細(xì)胞耐藥、轉(zhuǎn)移角度檢測EZH2下調(diào)后相關(guān)分子表達(dá)情況變化。結(jié)果:1.采用EZH2-sh RNA下調(diào)hut78細(xì)胞EZH2的表達(dá)水平后,MTS檢測顯示:hut78出現(xiàn)明顯的增殖抑制,抑制率達(dá)46.8%。2.采用不同化療藥物分別處理hut78、hut78 EZH2-sh RNA細(xì)胞,后者抑制率明顯增加,藥物的IC50值下降,二者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.采用EZH2抑制劑梯度處理hut78細(xì)胞,hut78出現(xiàn)明顯的增殖抑制性,呈顯著的時(shí)間及濃度依賴性。4.采用EZH2抑制劑聯(lián)合化療藥物處理hut78,明顯增加了化療藥物的增殖抑制性,Q值分析顯示EZH2抑制劑對化療藥物具有協(xié)同增敏作用(q1.15)。5.檢測hut78、hut78 EZH2-sh RNA及EZH2抑制劑處理后的hut78三種細(xì)胞系中主要凋亡分子(P53、Bcl-2)、耐藥分子(LRP、MDR-1、MRP-1)及細(xì)胞轉(zhuǎn)移粘附分子(VCAM、ICAM)的表達(dá)情況,RQ值(相對表達(dá)量)具有差異性,(P0.05)。結(jié)論:1.采用EZH2-sh RNA轉(zhuǎn)染hut78及利用EZH2抑制劑處理hut78細(xì)胞系后,可引起hut78中EZH2的表達(dá)下降。2.EZH2的下調(diào)可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。3.EZH2的下調(diào)可增加hut78對化療藥物的敏感性,EZH2抑制劑與化療藥物之間具有協(xié)同作用。4.EZH2下調(diào)可引起細(xì)胞凋亡、耐藥及轉(zhuǎn)移粘附分子的表達(dá)異常,提示EZH2具有廣泛的調(diào)控作用,對腫瘤的發(fā)生、耐藥及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：EZH2 shRNA UNC1999 T細(xì)胞淋巴瘤 增殖 化療增敏
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 1 對象和方法14-31
• 1.1 材料、試劑與儀器14-17
• 1.1.1 細(xì)胞系14
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)藥物15
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 1.1.5 主要試劑配制16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-31
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 1.2.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)18-19
• 1.2.3 慢病毒介導(dǎo)EZH2 - shRNA感染皮膚T細(xì)胞淋巴瘤H u t 78 細(xì)胞株19-22
• 1.2.4 RT-PCR22-24
• 1.2.5 蛋白提取測定24-25
• 1.2.6 蛋白電泳25-27
• 1.2.7 MTS檢測細(xì)胞增殖率27
• 1.2.8 MTS法測定藥物對Hut-78細(xì)胞生長的抑制率27-28
• 1.2.9 Brdu試驗(yàn)28-29
• 1.2.10 細(xì)胞凋亡29
• 1.2.11 細(xì)胞周期29
• 1.2.12 采用RT-PCR檢測下游耐藥蛋白的表達(dá)情況29-30
• 1.2.13 采用RT-PCR檢測細(xì)胞粘附分子的表達(dá)情況30
• 1.2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30-31
• 2 結(jié)果31-49
• 2.1 EZH2基因沉默后對hut78細(xì)胞系的影響31-32
• 2.1.1 RT-PCR及Western驗(yàn)證31-32
• 2.1.2 增殖抑制32
• 2.2 EZH2基因沉默后增加化療藥物敏感32-35
• 2.3 EZH2抑制劑對hut78細(xì)胞系的影響35-42
• 2.4 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默EZH2與EZH2抑制劑聯(lián)合應(yīng)用42-44
• 2.5 EZH2對細(xì)胞凋亡、耐藥及轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的調(diào)控44-49
• 3 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述 EZH2基因與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展57-72
• 綜述參考文獻(xiàn)66-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 胡峗宏;林曉燕;崔嶸嶸;王錚元;許誠;;EZH2蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2013年07期

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本文編號：843475