發(fā)布時(shí)間：2017-09-12 07:04

  本文關(guān)鍵詞：瘦素促進(jìn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞分泌IL-18并影響乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究

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【摘要】：目的：本課題主要研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)在瘦素(leptin)作用下,對(duì)乳腺癌進(jìn)展的影響,以及對(duì)相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行探討,為乳腺癌研究和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1.首先用佛波酯(PMA)刺激人單核細(xì)胞THP1使其貼壁,然后加入白細(xì)胞介素4(IL-4)共同作用,誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為TAMs。2.瘦素作用于TAMs之后,收集條件培養(yǎng)基以處理乳腺癌細(xì)胞,通過侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞的侵襲遷移變化。3.分別采用qRT-PCR、Western Blotting和ELISA,檢測(cè)leptin對(duì)TAMs、乳腺癌細(xì)胞中IL-18表達(dá)和分泌的影響,并分析相關(guān)信號(hào)通路。4.免疫組織化學(xué)(IHC)檢測(cè)病人乳腺疾病樣本中TAMs和IL-18的表達(dá)；建立裸鼠乳腺癌移植模型,瘤內(nèi)注射巨噬細(xì)胞去除劑氯弗松(CCL),研究移植瘤生長(zhǎng)和肝肺轉(zhuǎn)移的變化,并用IHC檢測(cè)leptin處理組裸鼠瘤體內(nèi)IL-18表達(dá)的變化。結(jié)果：1.PMA. IL-4作用后,THP1被誘導(dǎo)分化為貼壁的M2型巨噬細(xì)胞。2.采用leptin處理TAMs后的條件培養(yǎng)基作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7、SKBR-3和MDA-MB-231。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：leptin可通過促進(jìn)TAMs表達(dá)分泌IL-18,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。3. leptin促進(jìn)TAMs表達(dá)分泌IL-18,主要是通過激活細(xì)胞信號(hào)通路NF-κB,從而上調(diào)IL-18轉(zhuǎn)錄因子NF-κB1而實(shí)現(xiàn)的(P0.01)；而leptin刺激乳腺癌細(xì)胞MCF-7表達(dá)分泌IL-18的機(jī)制,主要為通過激活細(xì)胞信號(hào)通路PBK/Akt,從而上調(diào)IL-18轉(zhuǎn)錄因子ATF-2 (P＜0.01)。4.臨床病人樣本分析結(jié)果顯示,CD163(M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記分子)和IL-18的表達(dá)與乳腺癌的惡性程度關(guān)系密切(P0.05)；裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)表明,去除巨噬細(xì)胞的作用后,Leptin處理組的IL-18表達(dá)顯著降低(P0.05)；且巨噬細(xì)胞的耗竭可以減慢裸鼠乳腺癌的生長(zhǎng),減少肺轉(zhuǎn)移。結(jié)論：1.leptin可促進(jìn)TAMs、乳腺癌細(xì)胞表達(dá)分泌IL-18,進(jìn)而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。2. Leptin促進(jìn)TAMs表達(dá)分泌IL-18與激活NF-κB信號(hào)通路之后,上調(diào)IL-18轉(zhuǎn)錄因子NF-κB1相關(guān)；在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中主要是激活信號(hào)通路PBK/Akt,并作用于轉(zhuǎn)錄因子ATF-2引起。此結(jié)果證明,在乳腺癌腫瘤微環(huán)境中,leptin可同時(shí)促進(jìn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞IL-18的表達(dá),但這兩種細(xì)胞是通過激活不同的信號(hào)通路,上調(diào)不同IL-18轉(zhuǎn)錄因子引起的。3. Leptin、CD163和IL-18的水平與乳腺癌的惡性程度密切相關(guān)。裸鼠移植瘤試驗(yàn)中,應(yīng)用CCL.去除巨噬細(xì)胞的作用后,瘤體IL-18表達(dá)水平降低,腫瘤生長(zhǎng)減慢和肺轉(zhuǎn)移減少。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 腫瘤微環(huán)境 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 IL-18 侵襲轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 第一部分：Leptin作用的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響13-23
• 1 材料與方法13-18
• 2 結(jié)果18-21
• 3 討論21-23
• 第二部分：Leptin促進(jìn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞分泌促炎因子IL-18的機(jī)制研究23-33
• 1 材料與方法23-28
• 2 結(jié)果28-31
• 3 討論31-33
• 第三部分：Leptin誘導(dǎo)TAMs表達(dá)分泌IL-18對(duì)裸鼠乳腺癌的影響33-41
• 1 材料與方法33-36
• 2 結(jié)果36-40
• 3 討論40-41
• 全文總結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 文獻(xiàn)綜述46-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53

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