本文關(guān)鍵詞：相關(guān)腫瘤標(biāo)志性microRNA新型檢測(cè)體系的構(gòu)建及其應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 分子信標(biāo) 腫瘤 miR-204 DSN Pre-miR-21

【摘要】：microRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性長約19-25nt(核苷酸)的非編碼微小核糖核酸,它能在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA在生物體內(nèi)普遍存在并參與調(diào)控許多生命過程,包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、個(gè)體發(fā)育、疾病發(fā)生、基因調(diào)控及代謝。miRNA的異常與人類腫瘤疾病相關(guān),因而,在腫瘤疾病中定量檢測(cè)miRNA能為腫瘤的診斷、治療與預(yù)后提供依據(jù)。分子信標(biāo)因特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單快速等特點(diǎn),成為最理想的定量檢測(cè)miRNA的工具之一。本文主要致力于基于分子信標(biāo)定量檢測(cè)miRNA的研究,主要內(nèi)容如下：1.分子信標(biāo)直接檢測(cè)腫瘤相關(guān)的miRNA-204本章利用以miRNA-204為靶標(biāo)的分子信標(biāo),通過優(yōu)化分子信標(biāo)穩(wěn)定性、雜交性能、特異性的條件,構(gòu)建MB/miR-204雜交標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立了一種快速、安全、特異的miRNA-204定量檢測(cè)新方法,該方法檢測(cè)線性范圍在1-100nM,檢測(cè)下限達(dá)到1nM。將其用于腫瘤細(xì)胞和膠質(zhì)瘤組織中的miRNA-204表達(dá)變化定量檢測(cè),發(fā)現(xiàn)miRNA-204在MCF-7細(xì)胞和膠質(zhì)瘤組織中下調(diào),為深入闡明miRNA-204在腫瘤發(fā)生中的作用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.分子信標(biāo)結(jié)合DSN介導(dǎo)的高靈敏miRNA-204檢測(cè)本章利用DSN酶的特點(diǎn),設(shè)計(jì)了DNA與RNA嵌合的分子信標(biāo),通過考察酶促介導(dǎo)信號(hào)放大體系的影響因子,優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件,建立了檢測(cè)下限在pM級(jí)的高靈敏檢測(cè)miRNA-204的方法。運(yùn)用分子信標(biāo)結(jié)合DSN的檢測(cè)體系,定量檢測(cè)腫瘤細(xì)胞和膠質(zhì)瘤組織中miRNA-204的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與直接檢測(cè)一致,表明該體系準(zhǔn)確可靠。此方法為無創(chuàng)檢測(cè)臨床樣品、研究miRNA功能、疾病的早期診斷與預(yù)后提供新的檢驗(yàn)手段。3.分子信標(biāo)檢測(cè)腫瘤相關(guān)的Pre-miR-21本章我們通過優(yōu)化MB/Pre-miR-21雜交的實(shí)驗(yàn)條件,考察MB的特異性,構(gòu)建檢測(cè)Pre-miR-21的標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立了一種分子信標(biāo)檢測(cè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)的前體miRNA--Pre-miR-21的新方法。將其應(yīng)用到檢測(cè)MCF-7細(xì)胞、膠質(zhì)瘤、胃癌中Pre-miR-21的表達(dá)水平,并以qRT-PCR驗(yàn)證其準(zhǔn)確性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：MCF-7細(xì)胞中干擾Z38基因表達(dá)能使Pre-miR-21表達(dá)上調(diào)；胃癌癌組織比癌旁組織Pre-miR-21表達(dá)水平高；膠質(zhì)瘤中惡性程度越高Pre-miR-21表達(dá)越高,呈正相關(guān)趨勢(shì)。分子信標(biāo)在Pre-miR-21檢測(cè)中表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：分子信標(biāo) 腫瘤 miR-204 DSN Pre-miR-21
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.43
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 緒論10-26
• 1.1 本文的研究背景及意義10
• 1.2 microRNA概述10-19
• 1.2.1 miRNA的研究背景10-11
• 1.2.2 miRNA的特點(diǎn)11
• 1.2.3 miRNA的生物合成過程及作用機(jī)制11-12
• 1.2.4 miRNA與疾病12-13
• 1.2.5 miRNA的檢測(cè)方法13-19
• 1.3 分子信標(biāo)概述19-25
• 1.3.1 分子信標(biāo)的基本原理19-20
• 1.3.2 影響分子信標(biāo)性能的因素20-21
• 1.3.3 分子信標(biāo)研究進(jìn)展與應(yīng)用21-25
• 1.4 本文擬開展的工作25-26
• 第2章 分子信標(biāo)直接檢測(cè)腫瘤相關(guān)的miR-20426-40
• 2.1 前言26-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分27-33
• 2.2.1 分子信標(biāo)檢測(cè)miRNA的實(shí)驗(yàn)原理27
• 2.2.2 儀器與試劑27-28
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法28-33
• 2.3 結(jié)果與討論33-39
• 2.3.1 分子信標(biāo)穩(wěn)定性及雜交性能的影響因子33-34
• 2.3.2 分子信標(biāo)與靶miRNA雜交特異性考察34-35
• 2.3.3 分子信標(biāo)雜交標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建35-36
• 2.3.4 腫瘤細(xì)胞/織總RNA的鑒定與濃度測(cè)定36
• 2.3.5 分子信標(biāo)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中miR-204表達(dá)水平36-37
• 2.3.6 qRT-RCR法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中miR-204表達(dá)水平37-38
• 2.3.7 分子信標(biāo)檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織中miR-204表達(dá)水平38-39
• 2.3.8 qRT-RCR法檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織中miR-204表達(dá)水平39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 第3章 分子信標(biāo)結(jié)合DSN介導(dǎo)的miR-204高靈敏檢測(cè)40-48
• 3.1 前言40-41
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分41-43
• 3.2.1 DSN酶介導(dǎo)分子信標(biāo)信號(hào)放大檢測(cè)miRNA原理41
• 3.2.2 儀器和試劑41-42
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法42-43
• 3.3 結(jié)果與討論43-47
• 3.3.1 分子信標(biāo)抗酶切能力與酶促放大可行性分析43-44
• 3.3.2 DSN酶濃度條件的優(yōu)化44
• 3.3.3 信號(hào)放大檢測(cè)下限的確定與標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建44-45
• 3.3.4 分子信標(biāo)酶促信號(hào)放大檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中miR-204表達(dá)水平45-46
• 3.3.5 分子信標(biāo)酶促信號(hào)放大檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織中miR-204表達(dá)水平46-47
• 3.4 小結(jié)47-48
• 第4章 分子信標(biāo)直接檢測(cè)腫瘤相關(guān)的Pre-miR-2148-62
• 4.1 前言48
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分48-54
• 4.2.1 分子信標(biāo)直接檢測(cè)Pre-miRNA的實(shí)驗(yàn)原理48-49
• 4.2.2 儀器與試劑49-50
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法50-54
• 4.3 結(jié)果與討論54-61
• 4.3.1 分子信標(biāo)熱穩(wěn)定性考察54-55
• 4.3.2 分子信標(biāo)檢測(cè)Pre-miR-21可行性分析55
• 4.3.3 分子信標(biāo)/Pre-miR-21雜交實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化55-57
• 4.3.4 MB/Pre-miR-21雜交標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建57-58
• 4.3.5 分子信標(biāo)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中PmiRNA-21表達(dá)水平58-59
• 4.3.6 qRT-RCR法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中Pre-miR-21表達(dá)水平59
• 4.3.7 分子信標(biāo)檢測(cè)腫瘤組織中Pre-miR-21表達(dá)水平59-60
• 4.3.8 qRT-RCR法檢測(cè)腫瘤組織中Pre-miR-21表達(dá)水平60
• 4.3.9 Western blotting檢測(cè)Pre-miR-21調(diào)控的靶蛋白60-61
• 4.4 小結(jié)61-62
• 結(jié)論與展望62-63
• 參考文獻(xiàn)63-71
• 附錄 攻讀碩士學(xué)位期間參與發(fā)表論文和專利71-72
• 致謝72

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