本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓源性間質(zhì)細(xì)胞融合的鑒定及生物學(xué)特性分析

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【摘要】：第一部分:膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓源性間質(zhì)細(xì)胞的體外融合及鑒定目的:在人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞雙色熒光示蹤體外共培養(yǎng)模型中,觀察膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與其微環(huán)境中骨髓源性間質(zhì)細(xì)胞之間的相互作用,包括能否發(fā)生融合,并以多指標(biāo)驗(yàn)證融合細(xì)胞的存在。方法:將紅色熒光蛋白(RFP)基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞株SU4-RFP和源于綠色熒光蛋白(EGFP)Balb/c裸小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)和巨噬細(xì)胞(Mφ)分別共培養(yǎng),激光共聚焦顯微鏡下觀察SU4-RFP分別與BMSCs、Mφ間的活躍相互作用,及能否發(fā)生融合,隨后采用顯微虹吸法單克隆高增殖力RFP/EGFP雙陽性細(xì)胞,并分別命名為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)細(xì)胞融合細(xì)胞(F-BMSCs)和膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與巨噬細(xì)胞融合細(xì)胞(F-Mφ),先以熒光標(biāo)記、原位雜交技術(shù)(FISH)、Western blotting分別檢測SU4-RFP、BMSCs、F-BMSCs、F-Mφ中RFP、EGFP基因和蛋白的表達(dá);再以免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測SU4-RFP、BMSCs、Mφ和F-BMSCs、F-Mφ細(xì)胞特異性標(biāo)志物的表達(dá);最后進(jìn)行染色體核型分析SU4-RFP、BMSCs、F-BMSCs、F-Mφ有絲分裂相的染色體形態(tài)特征。結(jié)果:激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察體外共培養(yǎng)的SU4-RFP能分別與BMSCs、Mφ發(fā)生活躍相互作用,二組共培養(yǎng)細(xì)胞均可發(fā)生膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與BMSCs或Mφ的融合,融合細(xì)胞共表達(dá)紅、綠兩種熒光;FISH、Western blotting檢測進(jìn)一步證實(shí)F-BMSCs、F-Mφ共表達(dá)RFP、EGFP基因及相應(yīng)的熒光蛋白;免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)情況,顯示融合前SU4-RFP細(xì)胞Nestin表達(dá)陽性,BMSCs特異性高表達(dá)其標(biāo)志物CD105和CD44,Mφ細(xì)胞高表達(dá)其特異性標(biāo)志物CD68。融合細(xì)胞中F-BMSCs共表達(dá)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Nestin和BMSCs標(biāo)志物CD105、CD44,F-Mφ共表達(dá)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Nestin和Mφ標(biāo)志物CD68;染色體核型分析顯示F-BMSCs、F-Mφ的染色體核型中小鼠型端著絲粒染色體占優(yōu)勢,F-BMSCs核型中含有符合人染色體特征的中著絲粒染色體兩條,F-Mφ含一條。結(jié)論:腫瘤干細(xì)胞可與微環(huán)境中骨髓源性BMSCs或Mφ發(fā)生活躍相互作用,并可自發(fā)融合。第二部分:膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓源性間質(zhì)細(xì)胞融合后生物學(xué)特性初步分析目的:研究膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或巨噬細(xì)胞融合后,融合細(xì)胞的生物學(xué)特性,并與膠質(zhì)瘤干細(xì)胞作比較。方法:采用克隆形成實(shí)驗(yàn)、CCK-8實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)分別檢測并比較F-BMSCs、F-Mφ、SU4-RFP細(xì)胞的增殖、侵襲能力以及細(xì)胞凋亡。結(jié)果:細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示融合細(xì)胞F-BMSCs、F-Mφ的克隆形成率高于SU4-RFP(P0.05),CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示融合細(xì)胞F-BMSCs、F-Mφ的增殖速度明顯高于SU4-RFP(P0.05),Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示F-BMSCs、F-Mφ的穿膜細(xì)胞數(shù)高于SU4-RFP(P0.05),融合細(xì)胞F-BMSCs、F-Mφ早期凋亡細(xì)胞比例低于SU4-RFP,(P0.05)。結(jié)論:膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與BMSCs或Mφ自發(fā)融合后,細(xì)胞克隆形成率、增殖及侵襲能力明顯增強(qiáng),而凋亡下降,提示膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞融合后,惡性表型進(jìn)一步增高。因此,通過阻斷膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓源性間質(zhì)細(xì)胞融合,有可能成為膠質(zhì)瘤治療的潛在靶點(diǎn),值得進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 細(xì)胞融合 雙色熒光示蹤 共培養(yǎng) 膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 融合細(xì)胞 生物學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 序言10-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓源性間質(zhì)細(xì)胞的體外融合及鑒定13-25
• 引言13
• 材料和方法13-17
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-21
• 討論21-23
• 參考文獻(xiàn)23-25
• 第二部分：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與骨髓源性間質(zhì)細(xì)胞融合后生物學(xué)特性初步分析25-33
• 引言25
• 材料和方法25-27
• 結(jié)果與分析27-29
• 討論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 研究小結(jié)33-34
• 綜述34-42
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 中英文對照縮略詞表42-43
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開參與發(fā)表的論文43-44
• 致謝44-45

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