本文關(guān)鍵詞：酒精誘導(dǎo)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡過程中自噬的研究

  更多相關(guān)文章： 自噬 酒精 LC3 p62 SMMC-7721

【摘要】：目的:使用不同濃度的酒精作用于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721,觀察細(xì)胞凋亡過程中自噬的發(fā)生。方法:四甲偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測酒精對SMMC-7721細(xì)胞生存率的影響;DAPI染色觀察細(xì)胞凋亡;間接免疫熒光法觀察細(xì)胞自噬標(biāo)志物L(fēng)C3與p62表達(dá)變化;透射電鏡觀察細(xì)胞中自噬體的超微結(jié)構(gòu);蛋白免疫印跡法(Western-Blot)定量檢測LC3與p62蛋白量表達(dá)。結(jié)果:酒精濃度分別為100 mmol/L、200 mmol/L、400 mmol/L和800 mmol/L,處理SMMC-7721細(xì)胞24h,與0 mmol/L酒精濃度組比較,細(xì)胞生存率分別為76.35%(P0.05)、56.25%(P0.01)、45.22%(P0.01)和38.42%(P0.01),酒精可顯著抑制SMMC-7721細(xì)胞的增殖,生存率呈濃度依賴性。DAPI染細(xì)胞核,隨酒精濃度增加可見典型細(xì)胞凋亡特征性變化,凋亡率較對照組有顯著差異(P0.05),酒精可顯著誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡;間接免疫熒光觀察酒精致SMMC-7721細(xì)胞自噬,自噬標(biāo)志物L(fēng)C3在細(xì)胞核附近密度增高,p62在細(xì)胞質(zhì)中也有增加,并且可見LC3與p62點(diǎn)狀共定位;Western-Blot結(jié)果顯示,不同酒精濃度處理SMMC-7721細(xì)胞2h時,LC3-II和p62的表達(dá)量在200 mmol/L時都達(dá)到最高,較去血清對照組有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),LC3-I表達(dá)量降低但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);酒精濃度200 mmol/L處理SMMC-7721細(xì)胞不同時間,LC3表達(dá)量較去血清對照組有顯著增加,p62表達(dá)量在2h和6h明顯增加,之后逐漸降低;使用單純?nèi)パ迮囵B(yǎng)基對照處理相同時間,LC3表達(dá)量較去血清對照組有顯著增加,但趨勢與含酒精組不同,p62表達(dá)量在2h和6h明顯增加,但增加程度有所降低;透射電鏡也觀察到SMMC-7721細(xì)胞中有自噬體存在。結(jié)論:酒精顯著誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡;酒精誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡過程中有自噬發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：自噬 酒精 LC3 p62 SMMC-7721
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-12
• 1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器12-17
• 1.1 細(xì)胞株12
• 1.2 主要儀器設(shè)備12-13
• 1.3 主要試劑與實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 1.4 主要試劑配制方法14-17
• 1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)基14
• 1.4.2 磷酸鹽緩沖液（PBS）14
• 1.4.3 MTT工作液14
• 1.4.4 30% Acr-Bis14
• 1.4.5 分離膠緩沖液14
• 1.4.6 濃縮膠緩沖液14-15
• 1.4.7 1.0 mol/L Tris·HCl，pH 7.515
• 1.4.8 10% SDS15
• 1.4.9 2×轉(zhuǎn)移電泳緩沖液15
• 1.4.10 10×電泳緩沖液15
• 1.4.11 10×TBS緩沖液15
• 1.4.12 TBST緩沖液15
• 1.4.13 Epon812樹脂15-17
• 2 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 2.1 MTT法檢測細(xì)胞生存率17
• 2.2 DAPI染色檢測細(xì)胞凋亡17
• 2.3 間接免疫熒光檢測LC3與p62的表達(dá)及定位17-18
• 2.4 透射電鏡觀察自噬體形態(tài)學(xué)特征18
• 2.5 Western-Blot檢測LC3與p62蛋白表達(dá)量18-20
• 2.5.1 蛋白樣品的制備和定量18-19
• 2.5.2 SDS-PAGE及轉(zhuǎn)移電泳19-20
• 2.5.3 抗體雜交和發(fā)光檢測20
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)方法20-21
• 3 結(jié)果21-33
• 3.1 酒精對SMMC-7721細(xì)胞生存率的影響21-22
• 3.2 酒精誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡22-23
• 3.3 自噬體的超微結(jié)構(gòu)23
• 3.4 間接免疫熒光法觀察酒精對SMMC-7721細(xì)胞LC3的影響23-24
• 3.5 間接免疫熒光法觀察酒精對SMMC-7721細(xì)胞p62的影響24
• 3.6 SMMC-7721細(xì)胞中LC3與p62的共定位24-25
• 3.7 Western-Blot法檢測酒精對SMMC-7721細(xì)胞LC3的影響25-28
• 3.8 Western-Blot法檢測酒精對SMMC-7721細(xì)胞p62的影響28-33
• 4 討論33-35
• 5 結(jié)論35-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 文獻(xiàn)綜述41-67
• 參考文獻(xiàn)55-67
• 附錄A 英文縮略詞表67-69
• 致謝69-71
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文71-72

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金曉明,張引成,李雅馨,胡永升;阿霉素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中的信號傳遞[J];腫瘤研究與臨床;1999年05期

2 鄧麗英,張云漢,張紅新,馬長路,陳振光;細(xì)胞凋亡過程中的形態(tài)學(xué)變化與胞質(zhì)運(yùn)動的觀察[J];華人消化雜志;1998年S2期

3 張四洋;于淼;高建;邱雪杉;崔澤實(shí);;Cameleon測鈣系統(tǒng)在H_2O_2誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡過程中的應(yīng)用[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報;2013年10期

4 劉彥信,胡歡開,鄭德先;TRAIL誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞凋亡過程中的基因差異表達(dá)[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;2002年03期

5 范蕓,顧惜春,李蓉生,陳嘉林,劉俊達(dá);砷劑對NB_4細(xì)胞凋亡過程的影響[J];臨床血液學(xué)雜志;2002年04期

6 張引成,金曉明,劉軍,李家偉;細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)和蛋白激酶C濃度的改變[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年05期

7 王曉靜;氧化應(yīng)激相關(guān)的細(xì)胞凋亡過程中基因表達(dá)改變[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);2004年01期

8 周光飚,張廣森;吲哚美辛誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡過程中半胱天冬酶及細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的變化[J];中華血液學(xué)雜志;2001年05期

9 肖廣芬 ,盧青 ,楊向東;P73基因在長春新堿誘導(dǎo)髓性白血病細(xì)胞系U937細(xì)胞凋亡過程中的表達(dá)[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年05期

10 朱宏麗,汪月增,于力,李賓,姚善謙,樓方定;FAS,FASL及Bcl-2在化療藥物誘導(dǎo)RMA細(xì)胞凋亡過程中的表達(dá)[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2002年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蒲詠梅;張東才;;細(xì)胞凋亡過程中的鈣信號研究[A];首屆粵港生物物理學(xué)術(shù)研討會論文集[C];1999年

2 可國安;丁若虹;劉柏林;姜自清;;瘢痕細(xì)胞凋亡過程中Ca~(2+)和三磷酸肌醇濃度的改變[A];第十一次湖北省整形外科學(xué)術(shù)會議第四次湖北省醫(yī)學(xué)美容學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 劉彥信;胡歡開;任韻釗;史娟;鄭德先;;TRAIL誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡過程中基因差異表達(dá)及其功能研究[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

4 石松林;孔海燕;李祺福;王三英;路錕;;Prohibitin在人永生化表皮細(xì)胞凋亡過程中的表達(dá)及調(diào)控作用研究[A];“細(xì)胞活動 生命活力”——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會全體會員代表大會暨第十二次學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

5 胡歡開;劉彥信;鄭德先;;TRAIL誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡過程中基因差異表達(dá)的研究[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

6 蔡莉;易敬林;張旭;張學(xué)軍;;H2O2誘導(dǎo)RPE細(xì)胞凋亡過程中乙酰膽堿酯酶的表達(dá)[A];第十一次全省中、西醫(yī)眼科學(xué)術(shù)交流會學(xué)術(shù)論文集[C];2012年

7 汪獻(xiàn)旺;邢達(dá);;FOXO在細(xì)胞凋亡過程中的作用機(jī)制和信號通路研究[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

8 吳銀院;陳同生;邢達(dá);;實(shí)時分析UV誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中Bax的轉(zhuǎn)位[A];中國光學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

9 張永煒;劉衛(wèi)軍;蔣建飛;蕭東;丁健;;沙爾威辛誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡過程中PP2A活化并下調(diào)端粒酶活性[A];第六屆全國藥理學(xué)教學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2003年

10 蔣宇揚(yáng);;以小分子化合物為探針研究腫瘤細(xì)胞凋亡過程中的信號傳導(dǎo)通路[A];中國化學(xué)會第26屆學(xué)術(shù)年會化學(xué)生物分會場論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 何德功;癲癇發(fā)作與基因變異有關(guān)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉詩o，

本文編號：825849