本文關(guān)鍵詞：HER2單鏈抗體可變區(qū)表達(dá)與純化及抑制腫瘤細(xì)胞T6-17增殖的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:構(gòu)建HER2-sc Fv表達(dá)載體,體外純化獲得HER2-sc Fv蛋白,進(jìn)而探討HER2-sc Fv抑制高表達(dá)HER2的腫瘤細(xì)胞系T6-17增殖,為下一步抗腫瘤研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:①根據(jù)已有質(zhì)粒p UC57-HER2-sc Fv為模板設(shè)計(jì)引物,采用PCR技術(shù)獲取目的基因HER2-sc Fv。②運(yùn)用雙酶切及分子克隆等技術(shù)將目的基因片段克隆入原核表達(dá)質(zhì)粒p ET28a,構(gòu)建p ET28a-HER2-sc Fv重組質(zhì)粒。③重組質(zhì)粒p ET28a-HER2-sc Fv轉(zhuǎn)化Rosetta大腸桿菌,利用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)獲得HER2-sc Fv蛋白。④蛋白親和層析方法純化蛋白,進(jìn)而對包涵體蛋白復(fù)性。⑤SDS-PAGE及Western blot證實(shí)IPTG誘導(dǎo)HER2-sc Fv蛋白表達(dá)。⑥實(shí)驗(yàn)分為三組,分別為空白對照組,HER2-sc Fv組和曲妥珠單抗組。應(yīng)用MTT法研究HER2-sc Fv對HER2陽性腫瘤細(xì)胞T6-17增殖的生長抑制作用。結(jié)果:①PCR技術(shù)成功獲得HER2-sc Fv目的基因。②構(gòu)建的原核表達(dá)質(zhì)粒載體p ET28a-HER2-sc Fv,經(jīng)鑒定證實(shí)插入序列方向大小正確,質(zhì)粒構(gòu)建成功。SDS-PAGE和Western blot證實(shí)IPTG誘導(dǎo)p ET28a-HER2-sc Fv轉(zhuǎn)化的Rosetta大腸桿菌表達(dá)HER2-sc Fv蛋白成功,大小約為29KDa。獲得包涵體蛋白并復(fù)性,濃度為1358.3mg/L,純度約為90%,一升菌液可獲得蛋白約10mg左右。③MTT實(shí)驗(yàn)檢測三組結(jié)果顯示:HER2-sc Fv組抑制HER2陽性腫瘤細(xì)胞T6-17的抑制率為33.52%,與PBS組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P0.05);曲妥珠單抗組抑制HER2陽性腫瘤細(xì)胞T6-17的抑制率為34.79%,與PBS組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P0.01);而HER2-sc Fv組與曲妥珠單抗組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.429,P0.05)。結(jié)論:①成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-HER2-sc Fv。②重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化Rosetta大腸桿菌后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)可高效穩(wěn)定的表達(dá)HER2-sc Fv蛋白。③HER2-sc Fv蛋白在體外可以顯著抑制HER2陽性腫瘤細(xì)胞T6-17的增殖,該蛋白可進(jìn)一步應(yīng)用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究。
【關(guān)鍵詞】：HER2 單鏈抗體 蛋白純化 T6-17細(xì)胞系
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.2
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 縮略語/符號(hào)說明8-10
• 前言10-13
• 研究現(xiàn)狀、成果10-12
• 研究目的、方法12-13
• 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖13-14
• 對象和方法14-34
• 1.實(shí)驗(yàn)對象14-21
• 2.實(shí)驗(yàn)方法21-33
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法33-34
• 結(jié)果34-43
• 討論43-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明57-58
• 綜述 以HER2為靶點(diǎn)的靶向治療研究與進(jìn)展58-69
• 綜述參考文獻(xiàn)64-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 夏啟玉;肖蘇生;鄧柳紅;易小平;張春發(fā);;包涵體蛋白的復(fù)性研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年14期

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本文編號(hào)：820834