本文關(guān)鍵詞：亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1（LZTFL1）在胃癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究

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【摘要】：目的： 了解亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1(leucine zipper transcription factor-like1, LZTFL1)在胃癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)水平和啟動(dòng)子甲基化情況,研究LZTFL1表達(dá)水平對胃癌增殖和遷移能力的影響,闡明LZTFL1在胃癌中表達(dá)調(diào)控機(jī)制。 方法： 1.通過免疫組織化學(xué)的方法檢測30例胃癌患者組織標(biāo)本胃癌組織和正常胃粘膜組織中LZTFL1蛋白的表達(dá)水平；通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR和Western Blotting分別檢測4種胃癌細(xì)胞株(AGS. MKN28, MKN45和BGC823)以及正常胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1,的LZTFL1mRNA的表達(dá)水平及LZTFL1蛋白表達(dá)水平。 2.通過質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法在胃癌細(xì)胞株AGS中過表達(dá)LZTFL1,通過MTS、流式細(xì)胞術(shù)和transwell等實(shí)驗(yàn)技術(shù)來分析LZTFLl基因表達(dá)增加后對胃癌細(xì)胞增殖能力和遷移能力的影響。 3.應(yīng)用LZTFL1特異性的siRNA,在正常胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1中敲低LZTFL1基因的表達(dá),通過MTS、流式細(xì)胞術(shù)和transwell等實(shí)驗(yàn)技術(shù)來分析LZTFL1基因表達(dá)減少后對胃粘膜細(xì)胞增殖能力和遷移能力的影響。 4.在胃癌細(xì)胞株AGS中敲低轉(zhuǎn)錄因子YYl以及在GES-1中過表達(dá)YY1后,通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR和Western Blotting的方法檢測LZTFL1mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化。 5.對LZTFL1基因的啟動(dòng)子(promoter)區(qū)進(jìn)行分析,通過染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin immune-coprecipitation, CHIP)實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)錄因子YY1對LZTFL1啟動(dòng)子區(qū)的調(diào)控作用。 6.通過亞硫酸氫鹽硫化測序(Bisulfite Genomic Sequencing, BGS)和亞硫酸氫鹽甲基化特異性PCR (Methylation specific PCR,MSP)的方法檢測LZTFL1啟動(dòng)子區(qū)甲基化的情況。在胃癌細(xì)胞株AGS中使用甲基化抑制劑Aza,檢測使用Aza后LZTFL1基因表達(dá)變化情況。 結(jié)果： 1. LZTFL1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯低于正常胃粘膜。 2.在胃癌細(xì)胞株中,LZTFL1基因的mRNA和蛋白水平均為低表達(dá)水平,而在正常胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1中則表現(xiàn)為高表達(dá)。 3.增加LZTFL1基因表達(dá)能抑制胃癌細(xì)胞的增殖、促進(jìn)凋亡,并且在一定程度上抑制胃癌細(xì)胞的遷移,反之降低LZTFL1基因表達(dá)能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和遷移。 4.YY1過表達(dá)能抑制LZTFL1基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá),敲低YY1后,LZTFL1基因在mRNA和蛋白水平均有所上升。 5.YY1通過對LZTFL1基因的啟動(dòng)子區(qū)的直接結(jié)合作用,抑制LZTFL1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。 6.胃癌細(xì)胞株AGS中LZTFL1基因的啟動(dòng)子區(qū)處于高甲基化狀態(tài),經(jīng)過Aza去甲基化處理后,LZTFL1基因表達(dá)發(fā)生上調(diào)。 結(jié)論： 1. LZTFL1基因在胃癌組織水平和胃癌細(xì)胞水平均表現(xiàn)為低表達(dá),增加LZTFL1基因的表達(dá)能抑制胃癌細(xì)胞的增殖和遷移能力,敲低LZTFL1基因表達(dá)將增加細(xì)胞的增殖和遷移能力。 2.轉(zhuǎn)錄因子YY1通過對LZTFL1基因的啟動(dòng)子區(qū)的直接作用,阻礙LZTFL1基因的表達(dá)。 3.胃癌中LZTFL1的低表達(dá)和其啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化狀態(tài)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1(leucine zipper transcription factor-like1 LZTFL1)陰陽因子1(YY1) 甲基化
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文縮寫一覽表11-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-26
• 結(jié)果26-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 綜述44-57
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 作者簡介57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Epigenetic regulation: methylation of histone and non-histone proteins[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年04期

2 KatherineDCrew;AlfredINeugut;;Epidemiology of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2006年03期

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本文編號(hào)：806702